杜仲保健酒质量标准研究

寇 威，王景春，王 伟 ，徐燕茹，王凌云，李 钦

1. 河南大学 第一附属医院，河南 开封 475000； 2. 河南大学 药学院，河南 开封 475004



杜仲保健酒质量标准研究

1. 河南大学 第一附属医院，河南 开封 475000； 2. 河南大学 药学院，河南 开封 475004

〔目的〕 研究杜仲保健酒的质量标准。〔方法〕 对杜仲保健酒的含醇量、总固体量、有毒物质进行了检测；采用TLC法对杜仲酒中西洋参和枸杞进行了定性分析；采用HPLC法对杜仲皮主要成分松脂醇二葡萄糖苷的含量进行了测定，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱，流动相为甲醇-水(21∶79)，流速为1.0 mL∕min。检测波长为277 nm，检测温度为25 ℃，进样量为50 μL。〔结果〕 TLC色谱特征明显，专属性强；松脂醇二葡萄糖苷在0.053 4～0.534 μg范围内线性关系良好(r=0.999 7)，平均回收率为96.756%，RSD为2.3%(n=6)。〔结论〕 该方法简单准确，可作为该杜仲保健酒的质量控制标准。

杜仲酒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法

杜仲(Eucommia ulmoides)为杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoides Oliver)的干燥树皮，是我国名贵滋补药材，具有降血压、补肝益肾、利尿、安胎等作用[1]。杜仲保健酒是由干燥杜仲皮、西洋参、枸杞、大枣、山药五味中药泡制而成，具有调节血压、降低血脂、滋阴补肾、强身健体、增强免疫力等功效。为了保证杜仲保健酒的质量，我们采用TLC法对西洋参、枸杞子进行了定性鉴别，采用HPLC法测定该品君药杜仲皮有效成分松脂醇二葡萄糖苷的含量。

1　仪器与药品

1.1仪器

Agilent 1260 infinity 高效液相色谱仪(美国安捷伦)；D-S AB135-S电子分析天平(METTLER TOLEDO公司)；01-2AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；KQ5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、展开缸。

1.2药品

枸杞子对照品；人参皂苷Rb1、Rg1、Re对照品和松脂醇二葡萄糖苷标准品(均由中国药品生物制品检定所提供)；硅胶G(为青岛海洋化工厂产品)；醋酸乙酯、乙醇、甲苯、甲酸、三氯甲烷、硫酸、正丁醇分析纯；纯水。

2　方法与结果[2]

2.1含醇量(酒精度)

分别从四批样品中各精密量取100 mL(共400 mL)酒液，置于500 mL蒸馏瓶中，水浴蒸馏；收集40 mL滤液并加蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，摇匀倒置干净烧杯中，静置3 min；放入酒精计和温度计，分别测量含醇量和温度，换算成20 ℃时的含醇量即得酒精度。四批酒样的平均酒精度为40.8%。

2.2总固体

分别从四批样品中各取30 mL酒液于干燥蒸发皿中，水浴蒸干后放入干燥箱中110 ℃干燥40 min，精密称重，即得干燥恒重后的总固体量。四批样品的平均总固体量为0.938 2 g/mL。

2.3有毒物质的鉴定

2.3.1甲醇检查精密量取酒液3 mL，加水定容至100 mL，取1 mL作为供试品溶液；精密称取甲醇10 mL，加水定容至100 mL，取1 mL作为对照品溶液。将两者均加水至5 mL，向两者中各加2 mL高锰酸钾-磷酸溶液，摇匀放置10 min；各加入2 mL草酸-硫酸溶液，混匀使之褪色，再加入5 mL品红-亚硫酸溶液，混匀。二者颜色对比，供试品比对照品颜色浅，符合规定，甲醇含量≤0.03%。

2.3.2杂醇油的检查取酒液10 mL，加5 mL水和10 mL甘油，摇匀后分次滴加在无溴滤纸上，使乙醇自然挥发。始终闻异臭，符合规定，杂醇油含量≤0.2%。

2.3.3铅盐的检查取酒液10 mL，加5 mL NaOH溶液和10 mL水，溶解后置钠氏比色管中，加5滴硫化钠试液。与同样处理后的10 mL铅溶液进行颜色比较，颜色较对照液浅，符合规定，铅含量≤1 mg/L。

2.4西洋参的鉴别

取酒液，90 ℃水浴加热，蒸至无醇味，加20 mL水，用25 mL正丁醇分别振摇提取2次；合并正丁醇提取液，每次10 mL水洗涤2次，分别取正丁醇液水裕加热蒸干。残渣加4 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

取1 g西洋参，量取25 mL甲醇加入，然后加热回流40 min，过滤并将滤液蒸干，残渣加20 mL水溶解。每次用25 mL正丁醇分别振摇提取2次，留取正丁醇提取液并合并，加水洗涤2次，每次10 mL；分别留取正丁醇液水浴加热至蒸干。残渣加4 mL甲醇溶解，即为对照药材溶液。

分别精密量取人参皂苷Rb1、Rg1、Re对照品各2 mg，并加入6 mL甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液。

分别吸取上述各溶液5 μL，分别点在同一硅胶G薄层板上，以水-甲醇-乙酸乙酯-三氯甲烷(10∶22∶40∶15)20 mL为展开剂上行展开。展距为8 cm，喷以体积分数为10%硫酸乙醇溶液，110 ℃加热至斑点清晰，在365 nm紫外灯下检视[3-4]，结果见图1。

图1　西洋参TLC图

2.5枸杞薄层鉴别

取酒液50 mL，水浴加热蒸至无醇味，加入20 mL水，用20 mL乙酸乙酯分别提取2次；合并乙酸乙酯提取液，置水浴上蒸干。残渣加1 mL乙醇溶解，作为供试品溶液。

取枸杞药材0.5 g，加30 mL水煎煮30 min过滤，滤液每次用20 mL乙酸乙酯分别提取2次；合并乙酸乙酯提取液，置水浴上蒸干。残渣加1 mL乙醇溶解，作为对照品溶液。

吸取上述各溶液5 μL，分别点于同一硅胶G板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(15∶8∶1.5)12 mL为展开剂，在展开缸上行展开。展距为8 cm，置365 nm紫外灯下检视[5]，结果见图2。

图2　枸杞TLC图

2.6松脂醇二葡萄糖苷含量测定[1,6-8]

表1　松脂醇二葡萄糖苷回收率实验(n=6)

2.6.1对照品溶液的制备精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品5.34 mg，用体积分数60%的甲醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，制成每1 mL含松脂醇二葡萄糖苷0.053 4 mg的对照品溶液。

2.6.2供试品溶液的制备量取10 mL酒液，置于分液漏斗中，分别用20，15，15 mL氯仿萃取3次；弃去氯仿液合并上层液，置于水浴加热蒸干；残渣加5 mL体积分数为60%的甲醇溶解，定容于10 mL容量瓶中，经0.45醋酸纤维素膜过滤，取滤液，得供试品溶液。

2.6.3色谱条件与系统适用性实验色谱柱Thermo Hypersil Gold C18(250 mm×4.6 mm，5 μm) ；以甲醇、水(21∶79)为流动相；流速1.0 mL/min，检测波长277 nm，柱温25 ℃，进样量50 μL。

2.6.4线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液5，10，20，30，40，50 μL，注入液相色谱仪，测定。以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，进行线性回归计算，得标准曲线方程：

y=338.68x+2.0575，

R2=0.9997。

表明松脂醇二葡萄糖苷线性关系良好。

2.6.5精密度实验精密吸取同一供试品溶液测定6次，进样50 μL，测定，其峰面积RSD为1.023%(n=6)实验结果表明，精密度良好。

2.6.6稳定性实验分别于配制后的0，2，4，12，24，48 h精密吸取供试品溶液50 μL，注入液相色谱仪，测定，松脂醇二葡萄糖苷峰面积RSD为0.52%。结果表明，供试品溶液在48 h内基本稳定。

2.6.7重复性实验取同一批样品(批号：2014125)，依法制备6份供试品溶液，进样量为50 μL，依法测定并计算，结果平均含量为0.187 6 mg/mL，RSD为1.023%(n=6)，表明此法重复性较好。

2.6.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品(批号：2014125)5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入对照品溶液(见第2.6.1节)5.0 mL，摇匀。依法测定，平均回收率为96.756%，RSD为2.304%，结果见表1。

2.6.9样品测定取不同批号(2014123，2014124，2014125，2012126，2014127，20131121，20131226)的样品，依法测定，结果见表2。

表2　松脂醇二葡萄糖苷含量测定结果

2.6.10对照品和供试品溶液的高效液相色谱图对照品溶液、供试品溶液以及阴性对照溶液，分别精密量取50 μL的溶液，注入色谱仪，得到高效液相色谱图，见图3、图4、图5。

图3　松脂醇二葡萄糖苷对照品HPLC图

图4　杜仲保健酒松脂醇二葡萄糖苷HPLC图

图5　杜仲保健酒松脂醇二葡萄糖苷阴性对照液HPLC图

3　讨论

采用TLC法对杜仲酒中西洋参和枸杞进行了定性分析，分离度高、专属性强。在中国药典2010 年版中，杜仲药材的定性鉴别仍为外观性状及显微鉴别，这种鉴别方法对于完整的杜仲药材来说是可行的，但对于粉末状药材或药材提取物等来说就不适应[9]。

杜仲皮的成分主要是松脂醇二葡萄糖苷，因此我们采用HPLC法测定杜仲保健酒中松脂醇二葡萄糖苷的含量，比较了甲醇、水(25∶75 V/V)，甲醇、水(21∶79 V/V)为流动相进行试验。结果表明，以甲醇、水(21∶79 V/V)作为流动相、流速为1.0 mL/min、检测波长为277 nm时，供试品色谱中待测峰保留时间适中，峰形对称，且与杂质峰有较好的分离。试验方法简单准确，为该杜仲保健酒的质量控制标准提供了相关依据。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典( 一部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010:80.

[2] 毛维伦. 芦荟酒剂的质量标准研究[J]. 湖北中医杂志，1998,20(3):55-57.

[3] 黄秋香. 西洋参薄层色谱鉴别方法改进[J]. 中药材，2002,25 (3):172-173.

[4] 王彤. 洋参膏中西洋参的薄层层析定性鉴别[J]. 中医函授通讯，1998,17 (6):39.

[5] 杨国红. 参茸三肾酒质量标准的研究[J]. 中草药，1994,25(9):457-458.

[6] 张倩茹. HPLC法测定杜仲及其相关制剂中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J]. 遵义医学院报，2009,32(4):338-340.

[7] 陈龙富. HPLC测定天麻钩藤饮中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J]. 贵州中医学院学报，2012,34(2):137-139.

[8] 王月茹. HPLC测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J]. 现代中医药，2009,29(6):78-79.

[9] 刘玲，鲍家科. 杜仲药材薄层色谱鉴别研究[J]. 中国民族民间医药2014,23(2):8-9.

[责任编辑李武营]

Study on quality standard of Eucommia health wine

1. The First Affiliated Hospital of Henan University, Henan Kaifeng 475000, China; 2. Pharmaceutial College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

〔Objective〕To study the quality standard of eucommia ulmoides health wine. 〔Methods〕The Eucommia health wine alcohol content, total solids, toxic substances were detected; using TLC method of eucommia ulmoides in American ginseng wine and Chinese wolfberry has carried on the qualitative analysis; By the method of HPLC, eucommia bark skin the content of main components of rosin alcohol two glycosidase were determined, the chromatographic column for Agilent Eclipse XDB-C18 column, mobile phase of methanol and water (when), flow rate is 1.0 mL/min, detection wavelength is 277 nm, the testing temperature is 25 ℃, sample amount to 50μL . 〔Results〕he TLC chromatography characteristics, specificity is strong; Rosin alcohol two glycosidase inside the scope of 0.0534 to 0.534 ug sex good (r=0.999 7), the average recovery was 96.756%, RSD was 2.3% (n=6).〔Conclusion〕the method is simple and accurate, and can be used as the quality control standard of eucommia ulmoides health wine.

Eucommia wine; quality wtandard; TLC; HPLC

1672-7606(2016)03-0178-04

2015-11-17

国家公益性行业专项“杜仲育种群体建立与综合利用技术研究”。

寇威(1983-)，女，河南开封人，主管药师，中药学硕士，从事中药质量控制方法的研究工作。

李钦(1965-)，男，河南开封人，中药学博士，硕士生导师，教授，从事中药学的教学与科研工作。

R927.2

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