咳喘软膏质量标准研究

加媛，王秀丽，赵京春*

(1.北京市宣武中医医院，北京 100050；2.北京中医药大学，北京 100029)

咳喘软膏质量标准研究

加媛1，王秀丽2，赵京春1*

(1.北京市宣武中医医院，北京 100050；2.北京中医药大学，北京 100029)

目的：研究并建立咳喘软膏的质量标准。方法：采用显微和薄层鉴别对五味子、白芥子和延胡索进行定性鉴别；用超高液相色谱法(UPLC)测定制剂中白芥子以芥子碱硫氰酸盐计的含量。结果：薄层色谱法定性鉴别斑点清晰，专属性强，阴性对照无干扰；芥子碱硫氰酸盐浓度在0.995～1.194 μg线性关系良好，r=0.999 2，加样回收率为96.1%，RSD为1.65%。结论：咳喘软膏质量标准方法准确，精密度高，切实可行。

咳喘软膏；质量标准；超高液相色谱法

咳喘软膏是由白芥子、百部、五味子、延胡索、细辛5味药材组成。本方为北京市宣武中医医院临床经验方，来源于清代张璐的《张氏医通》中的“冷哮方”。具有温肺化痰、止咳平喘之功能。在研制过程中，为了控制该制剂的质量，笔者采用显微和薄层色谱分别对方中五味子、白芥子和延胡索进行定性鉴别，用超高液相对君药白芥子进行定量鉴别，为今后咳喘软膏质量标准的建立提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子显微镜(OLYMPUS-TCA.5.0.C)；Waters UPLC、二元溶剂管理系统、在线脱气机、自动进样器、PDA检测器(Waters公司，美国)；微量天平(赛多利斯)；Thermo 高级超纯水系统；电子天平[赛多丽斯科学仪器(北京)有限公司]。

1.2 试药

芥子碱硫氰酸盐、延胡索对照药材(中国食品药品检定研究院，批号分别为111702-200501，120928-201208)；甲醇(赛默飞世尔科技公司，批号101437)；乙酸铵(北京化学试公司，批号060329)；乙酸乙酯、丙酮、甲酸、正己烷、三氯甲烷(国药集团化学试剂有限公司，批号分别为20140609，20140531，20140410，20130924，20140520)；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别

五味子的鉴别：取本品在显微镜下观察，种皮表皮石细胞淡黄棕色，表面观类多角形，壁较厚，孔沟细密，胞腔含暗棕色物[1]。见图1。

图1 五味子粉末显微鉴别特征

2.2 薄层色谱鉴别

2.2.1 白芥子的鉴别 取本品30 g，加入50 mL甲醇，超声处理45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，作为供试品溶液。另取芥子碱硫氰酸盐对照品，加甲醇制成质量浓度为1 mg·mL-1的对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液5～10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[2]。见图2。

注：1.芥子碱硫氰酸盐；2～4.咳喘软膏；5.阴性对照。图2 白芥子薄层色谱图

2.2.2 延胡索的鉴别 取本品30 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使其溶解。加浓氨调制碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10 mL，合并乙醚，蒸干，残渣加甲醇1 mL使其溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验，吸取上述两种溶液5～10 μL，分别点于同一1%氢氧化钠(NaOH)溶液制备的硅胶G薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置蒸气中熏至斑点显色清晰，挥尽碘。置紫外(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰[3]。见图3。

注：1.延胡索对照药材；2～4.咳喘软膏；5.阴性对照。图3 延胡索薄层色谱图

2.3 含量测定

2.3.1 检测波长的选择 配制芥子碱硫氰酸盐对照品溶液适量，在200～400 nm进行吸光度扫描，测定其在乙酸铵溶液中的吸收曲线。芥子碱硫氰酸盐最大吸收在326 nm，因此最终选择326 nm为检测波长。

图4 芥子碱硫氰酸盐在乙酸铵溶液中的吸收曲线

2.3.2 色谱条件 色谱柱：ACQUITY BEH C18柱(50 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流动相：乙腈-0.5%乙酸铵/水(10∶90，体积流量)；流速：0.4 mL·min-1；进样量：10 μL；样品室温度：4 ℃；柱温：35 ℃；检测波长：326 nm[4-7]。

2.3.3 对照品溶液的制备 精密称定芥子碱硫氰酸盐对照品1.99 mg，置10 mL容量瓶中，乙酸铵溶解并稀释至刻度，摇匀，即得芥子碱硫氰酸盐对照品溶液。

2.3.4 供试品溶液的制备 精密称取膏剂2 g，置具塞锥形瓶中，加50 mL乙酸铵溶液超声提取30 min，滤过，滤渣再用乙酸铵同法提取3次，滤液合并。减压回收溶剂至干，残渣加流动相溶解，转移至50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2，4]。

2.3.5 系统适用性试验 分别取乙酸铵溶液、芥子碱硫氰酸盐对照品溶液、膏剂供试品溶液，按2.3.2色谱条件进样并记录色谱图。芥子碱硫氰酸盐柱效、分离度、拖尾因子均符合要求。见图5～7。

图5 乙酸铵溶液色谱图

图6 芥子碱硫氰酸盐色谱图

2.3.6 精密度试验 取质量浓度为0.199 mg·mL-1的芥子碱硫氰酸盐对照品溶液，连续进样6次。结果RSD为0.55%，表明仪器精密度良好。

2.3.7 稳定性试验 取同一份样品溶液在0、2、4、8、12、24 h分别进样，按2.3.2色谱条件检测并记录峰面积。RSD为0.68%，表明样品在24 h内稳定性良好。

2.3.8 线性关系考察 精密自动吸取0.5、1、2、3、6 μL芥子碱硫氰酸盐对照品溶液，注入超高效液相色谱仪，按2.3.2谱条件检测。以芥子碱硫氰酸盐色谱峰面积(Y)为纵坐标，芥子碱硫氰酸盐浓度(X)为横坐标作线性回归。回归方程：Y=3 732 178X-171 282，r=0.999 2，表明芥子碱硫氰酸盐在0.995～1.194 μg线性关系良好。

2.3.9 重复性试验 精密称取咳喘软膏6份，按2.3.4供试品溶液制备方法平行准备6份样品溶液，按2.3.2色谱条件检测并记录试验结果。结果RSD为0.93%，表明该方法重复性良好。

2.3.10 加样回收率试验 平行称取咳喘软膏6份，每份1 g，分别加入质量浓度为1.99 mg·mL-1的芥子碱硫氰酸盐对照品储备液0.78 mL，按2.3.2色谱条件检测并记录试验结果。计算加样回收率为96.1%，RSD为1.65%，表明该方法准确性良好。

2.3.11 样品测定 取咳喘软膏样品3批，按2.3.4供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按2.3.2色谱条件检测并记录试验结果，计算芥子碱硫氰酸盐质量分数为1.551 mg·g-1[4]。

3 讨论

细辛的薄层色谱鉴别：取本品5 g，加甲醇20 mL，超声处理45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使其溶解，作为供试品溶液。另取细辛对照药材0.5 g，同法制成质量浓度为1 mg·mL-1的溶液，作为对照药材溶液。取不含细辛药材粉末的软膏5 g，同法制成阴性溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但阴性对照有干扰，故未列入正文。

《中华人民共和国药典》中芥子碱硫氰酸盐的提取溶剂为甲醇[2]，但该膏剂基质均为水溶性成分，且有文献表明，甲醇与磷酸二氢钾溶液提取芥子碱硫氰酸盐的效果相当[4]，因此本试验同时选择磷酸二氢钾和乙酸铵溶液为提取溶剂。结果表明，乙酸铵溶液的提取效率远大于磷酸二氢钾，因此最终选择乙酸铵溶液为提取溶剂。

[1] 周佐林.253种中药材粉末显微鉴别主要特征[J].时珍国药研究，1997，8(4)：339-342

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 张光仁.理气散结丸显微与薄层色谱鉴别研究[J].内蒙古中医药，2013，32(18)：145-146.

[4] 桂洁，汪永忠，夏伦祝，等.UPLC法测定阳和平喘颗粒中芥子碱硫氰酸盐的含量[J].海峡药学，2013，25(3)：42-43.

[5] 许丽，王晓玲.HPLC法测定止咳平喘乳膏半成品中芥子碱硫氰酸盐的含量[J].西南国防医药，2007，17(5)：551-553.

[6] 尹珉，王宏，曾祖平，等.HPLC法测定喘宁巴布剂中芥子碱硫氰酸盐的含量[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(1)：21-22.

[7] 彦玲，王晓玲，丛骆骆.白细咳喘膏中芥子碱硫氰酸盐含量的测定[J].中国中医药信息杂志，2007，14(7)：49-50.

StudyonQualityStandardofKechuanOintment

JIA Yuan1，WANGXiuli2，ZHAOJingchun1*

(1.XuanWuTCMHospitalBeijing，100050，China；2.BeijingUniversityofChineseMedicine，100029，China)

Objective：To establish the quality standards of Kechuan ointment.Methods：The Schisandrae Chinensis Fructus，Sinapis Semen and Corydalis Rhizoma were qualitatively identified by microscopy and TLC.Sinapine thiocyanate was quantitatively determined by UPLC.Results：The spots of the TLC were clear and had no negative interference.The linear of the berberine hydrochloride was 0.995-1.194μg (r=0.9992).The Sample recovery rate was 96.1%，and RSD was 1.65%.Conclusion：The method is accurate，precise，and feasible.

Kechuan ointmen；quality standard；UPLC

2015-07-31)

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赵京春，主任药师，研究方向：中药调剂及经验鉴别；E-mail：xwzyyjk@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.5.021