联合检测ANA、抗SSA和抗SSB对原发性干燥综合征诊断的临床意义

祝忠良　　庞珍珍　　刘津麟　　卢文静　　周永列▲1.浙江中医药大学生命科学院，浙江杭州　310053；.浙江省人民医院检验科，浙江杭州　310014



联合检测ANA、抗SSA和抗SSB对原发性干燥综合征诊断的临床意义

祝忠良1,2庞珍珍2刘津麟2卢文静2周永列1,2▲
1.浙江中医药大学生命科学院，浙江杭州310053；2.浙江省人民医院检验科，浙江杭州310014

［摘要］目的调查浙江地区原发性干燥综合征患者的抗核抗体及抗核抗体谱阳性分布特点及临床意义。方法采用间接免疫荧光法和欧蒙线性免疫印迹法，回顾性分析2012年6月～2015年6月我院就诊的162例临床确诊原发性干燥综合征患者血清中抗核抗体及其抗核抗体检测谱的结果。结果162例研究对象中抗核抗体阳性149例（占92.0%）。男7例，女155例。抗SSA阳性118例（占72.8%）；抗SSB阳性72例（占44.4%）；抗Ro52阳性119例（占73.4%）；三者阳性检出率显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。其他自身抗体检出率均较低。ANA分别与抗SSA、抗SSB、抗Ro52联合检测的阳性率为87.6%、65.9%、83.2%。联合检测抗SSA、抗SSB具有相对较好的特异性为57%。 结论ANA阳性患者，联合抗SSA、抗SSB判断有助于提高原发性干燥综合征诊断的特异性。

［关键词］抗核抗体；干燥综合征；抗SSA；抗SSB

原发性干燥综合征（primary sjögren's syndrome，pSS）是一个主要累及外分泌腺体的慢性炎症性自身免疫病，临床表现除了常见的唾液腺和泪腺功能受损外，还会有其他器官的受累而出现多系统损害的症状，如皮肤、肾、肺、神经系统、消化系统等［1，2］。本病大多起病隐匿，大多数患者难以判断明确的起病时间，临床表现也多种多样，病情进展轻重个体差异性较大。近年来对原发性干燥综合征患者起病原因分析显示与遗传因素、EB病毒感染、免疫异常、环境因素高度相关。而抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）一直作为筛选自身免疫性疾病（autoimmune diseases，AID）的重要标志物，敏感性好，在AID的初步诊断、疾病进展、治疗效果和预后判断等方面具有明显的优势［3］。另外，免疫印迹法对抗核抗体谱检测具有特异性强、自动化程度高的特点，但不足的是针对的抗原谱较窄。而在临床中，对于原发性干燥综合征的诊断依赖于病变腺体的病理学诊断［4］，对于患者具有创伤性，敏感性一般，可行性不佳，且只在国内少数大型医院才进行。因此，对寻找简便易行的提高原发性干燥综合征的诊断敏感性和特异性的血清学指标具有重要临床意义。本文通过回顾性分析浙江地区162例原发性干燥综合征病人抗核抗体及抗核抗体谱的特点，旨在寻找并验证提高敏感性和特异性的血清学指标，现报道如下。

▲通讯作者

1　资料与方法

1.1一般资料

162例原发性干燥综合征患者均选自2012年6月～2015年6月我院住院患者，患者来自省内各个县市，患者之前未经专科治疗。所有研究对象均通过医院伦理委员会备案审核。162例研究对象中，男7例，女155例，平均年龄（49±11）岁，均符合2012年美国风湿病学会原发性干燥综合征分类标准。健康对照组为我院2012年6月～2015年6月体检者120例，男10例，女110例，平均年龄（47±10）岁。两组之间性别、年龄等方面资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。所有标本均使用BD公司的真空负压采血管，采取清晨空腹不抗凝肘静脉血约3～4 mL，用离心机2000 g，离心10 min，分离血清，立即检测或放入-80℃保存待测。

1.2检测方法

用间接免疫荧光法（IIF）检测抗核抗体（ANA），试剂盒购自欧蒙公司；用线性免疫印迹法（LIA）检测抗核抗体谱，向欧蒙公司购得抗核抗体谱（IgG）试剂盒（欧蒙印迹法）。免疫印迹仪为欧蒙公司EUROBlot-MasterⅡ，荧光显微镜为尼康80i型荧光显微镜。间接免疫荧光法检测抗核抗体，被测抗体血清标本的稀释度分别为1∶100、1∶320、1∶1000、1∶3200，抗体效价≥1∶100即抗核抗体阳性。线性免疫印迹法检测抗核抗体谱，膜条的显色位置与标准谱对照，对应抗体有一种及以上的抗体阳性，即视为阳性。操作方法和结果判读均严格按照实验室的标准操作规程和厂家提供的说明书执行。

1.3统计学方法

采用SPSS17.0统计学软件对数据进行分析。其中，计数资料以百分比表示，组间比较采用Χ2检验，计量资料行t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1原发性干燥综合征组各型阳性率与对照组比较

162例原发性干燥综合征患者中抗核抗体（ANA）检测结果阳性为149例，阳性检出率为92%（149/162）；而抗核抗体谱的检出率差异较显著，阳性检出率较高的分别是抗Ro52、抗SSA、抗SSB，其检测结果阳性119例（119/162，73%）、118例（118/162，73%）、72例（72/162，44%），其他自身多肽抗体谱的检出率均普遍较低或未检测出。120例健康对照组检出ANA阳性为6例占5%（6/120），抗SSA阳性3例占2.5%（3/120），抗Ro52阳性2例占1.7%（2/120），抗SSB阳性1例占0.83%（1/120），其他项目几乎无阳性检出。原发性干燥综合征组各型阳性率与对照组比较，除PM-Scl、Jo-1、dsDNA外，检出率均显著高于对照组（P＜0.05）。见表1。

2.2联合检测自身抗体诊断敏感性和特异性的比较

抗核抗体及抗核抗体谱联合检测的敏感性结果：抗SSB+抗Ro52组合为93.0%，抗SSA+抗SSB组合为97.2%，ANA+抗SSA、ANA+抗SSB、ANA+抗Ro52组合均为100.0%；特异性方面：ANA+抗SSB组合为14.4%（最低），ANA+抗SSA组合为29.5%，ANA+抗RO52组合为30.2%，抗SSB+抗Ro52组合为42.2%，抗SSA+抗SSB组合为57.0%（最高）。敏感性=真阳性人数/（真阳性人数+假阴性人数）×100%。特异性=真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%。联合检测自身抗体诊断敏感性和特异性的比较结果见表2。

表1　pSS患者与健康对照组抗核抗体谱检测结果［n（%）］

3　讨论

原发性干燥综合征是最常见的自身免疫性疾病之一，广泛分布于全球，我国人群的患病率为0.29%～0.70%，在老年人群中患病率为3%～4%。本病女性患者远大于男性患者，男女比为1：9～1：20。本研究中发病年龄多在40～50岁，显示女性患者大多处于更年期附近，雌激素水平波动较大，可能是原发性干燥综合征发病的诱因之一，与之前雌激素对原发性干燥综合征有相关性的报道相符合。怀疑本病时要检测抗核抗体和特异性抗核抗体谱以及口干眼干等情况，确诊原发性干燥综合征需要与其他抗核抗体相关性疾病相鉴别。目前，对原发性干燥综合征的治疗以缓解患者症状为主，激素、免疫抑制剂、干扰素等对于缓解眼口干效果有限，除对症治疗外，系统用药可改变原发性干燥综合征的免疫病理进程，可减缓疾病的进展和延长患者的生存期，尚未报道可以根治疾病的方法。近年来临床检测指标与诊断方法有所改进［5，6］，但由于其临床表现多种多样，容易漏诊或误诊。因此，早期诊断和特异性诊断很有必要。原发性干燥综合征的免疫学血清标志物中则有多种特异性自身抗体和高滴度的免疫球蛋白存在，这些对本病的诊断具有重要意义［7］。

本研究回顾性分析162例原发性干燥综合征患者血清中的自身抗体及其自身抗体检测谱［8］，发现患者抗核抗体的阳性率为92.0%，抗核抗体谱中以抗SSA、抗 SSB、抗Ro52等阳性为主，阳性检出率分别为72.8%、44.4%、73.4%，其他自身抗体检出率均较低或没有检测到。表1显示，健康对照组会极少量地检测到自身抗体，但是滴度都很低，与原发性干燥综合征有显著性差异。研究表明，自身抗体阳性是干燥综合征的重要特征之一，与疾病的发生发展密切相关［9］。而本次研究中所有抗核抗体阳性患者都是初诊患者，部分原发性干燥综合征患者临床症状出现比较轻或者没有，文献报道，原发性干燥综合征患者临床症状出现前平均4～6年检测到相关自身抗体是被低估了的结果，实际情况应更早检测到自身抗体［6］。对于一部分抗体持续性阳性、高滴度的患者，很有可能发展为自身免疫性疾病，具体会发展成哪一类的自身免疫性疾病还未明确，因此采用单独的ANA检测具有敏感性高而特异性不强的缺点。然而，具有互补性很强的自身抗体谱能有助于疾病的分类，本研究中抗SSA、抗SSB的阳性检出率相对较高（包含叠加综合征），具有诊断的特异性。同时这些抗核抗体谱的阳性检出患者甚至可以在临床症状出现前预测是否将发展为高危患者，尤其是出现严重脏器病变或并发肺纤维化、中枢神经系损害、预后较差的患者有重要意义。但是这种临床症状出现前检测到的自身抗体对疾病预后和治疗效果的相关性还没有深入报道［10～12］。

抗SSA、抗SSB阳性（高滴度更有诊断意义）是指南中诊断原发性干燥综合征的指标之一［13，14］，是体外诊断pSS的标志性抗体。文献报道［15，16］，抗SSA的敏感性高，抗SSB抗体特异性相对较高，患者在临床症状出现前检测到相关自身抗体主要是ANA，其次为抗SSA和抗SSB，其中，在临床症状出现前18年检测到ANA，平均6年检测到抗SSA抗体，平均4年检测到抗SSB抗体。抗SSA抗体和抗SSB抗体阳性是发展成为原发性干燥综合征的危险因素。

本研究以ANA、抗SSA、抗Ro52和抗SSB的联合检测，分析对原发性干燥综合征诊断的敏感性和特异性。表2中各组之间的比较显示敏感性都比较高，最高达100.0%。值得注意的是其特异性不理想，最低的仅14.4%。联合检测研究组中特异性最高的组合能达到57.0%。综合分析表2各组合，我们认为抗SSA+ 抗SSB组合有较好的临床意义［17，18］，其敏感性为97.2%，特异性为57.0%。由此分析可见，抗核抗体联合抗核抗体谱可以作为很好的疾病筛选指标，而对疾病的诊断方面，抗SSA+抗SSB双阳性能大幅提高对原发性干燥综合征的诊断价值。因此，鼓励各医院积极开展自身免疫性疾病的筛查，尤其是要注重联合检测，特别是联合检测的组合选择和结果分析［19，20］，本文对近年来的临床资料进行分析，研究结果显示在原发性干燥综合征患者临床症状出现前检测到相关自身抗体是被低估了的结果，实际情况应更早检测到自身抗体，为临床提供流行病学依据，更好地为患者服务。同时，我们也应该综合选择其他检查，如眼睛和口腔的活检（敏感性为63.9%）、影像学（敏感性为77.8%）和生物化学检测，对发现有相应的系统性病变的患者早诊断早治疗。本研究中也存在研究数量较少和未能有效区分少数的重叠综合征的病例［21，22］，也有文献报道系统性红斑狼疮［23，24］（SLE）等患者中也会出现低频率抗SSA和抗SSB阳性，今后将进一步完善数据。

总之，联合检测和综合分析对疾病的诊断和转归有重要的临床意义，值得临床推广。

表2　联合检测自身抗体的诊断敏感性与特异性比较（%）

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［中图分类号］R593.2

［文献标识码］B

［文章编号］1673-9701（2016）13-0125-04

［基金项目］浙江省自然科学基金资助项目（LQ14H100001）

收稿日期：（2015-12-10）

Combination of ANA，anti-SSA and anti-SSB detection in the clinical diagnosis of primary Sjögren's syndrome patients

ZHU Zhongliang1,2PANG Zhenzhen2LIU Jinlin2LU Wenjing2ZHOU Yonglie1,2
1.College of Life Science，Zhejiang University of Traditional Chinese Medical，Hangzhou310053，China；2.Department of Clinical Laboratory，Zhejiang Provincial People's Hospital，Hangzhou310014，China

［Abstract］Objective To study the distribution characteristics and clinical value of antinuclear antibodies（ANA）and ANAs spectrum of the primary sjögren's syndrome（pSS）patients in Zhejiang province.Methods Indirect fluorescence （IIF）and Euroline ANA Profile methods were used to detect the 162 serum specimens of pSS patients in Zhejiang Provincial People's Hospital from June 2012 to June 2015，then analyzed the data.Results Among the 162 pSS patients，which including 7males and 155 females.The ANA of the 149 pSS patients were positive（92.0%）.The positive rate of SSA，SSB and Ro52 antibodies were 118（72.8%），72（44.4%）and 119（73.4%）respectively.The three kinds of antibodies were significantly higher than control group（P＜0.05）.The positive rate of ANA combine detection of SSA，SSB and Ro52 were 87.6%、65.9%and 83.2%respectively.The specificity of combined detection of SSA and SSB was 57%.Conclusion In the ANA positive specimens，combined detection of SSA and SSB will improve the specificity of the pSS patients.

［Key words］Antinuclear antibody；Primary sjögren's syndrome；Anti-SSA antibody；Anti-SSB antibody