冠盖藤对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素E2含量及形态学的影响

秦莉花　李　晟　钟华美　陈晓阳,3　吴艳飞,3　黄　宽,3　秦莉峰

(湖南中医药大学药学院，湖南　长沙　410208)



冠盖藤对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素E2含量及形态学的影响

秦莉花1李晟钟华美2陈晓阳2,3吴艳飞2,3黄宽2,3秦莉峰4

(湖南中医药大学药学院，湖南长沙410208)

〔摘要〕目的探讨冠盖藤水提取物对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素E2(PGE2)含量及形态学的影响。方法采用弗氏完全佐剂制备骨性关节炎模型，将随机造模成功后大鼠随机分为模型组，雷公藤多甙片组，冠盖藤水提取物高、中、低剂量组。经药物干预28 d后，观察足趾组织形态学及检测组织PGE2含量。结果冠盖藤水提取物高、中剂量组大鼠膝关节软骨退变较模型组和冠盖藤水提取物低剂量组轻，仅软骨表面细胞轻度纤维化。与正常组比较，模型组大鼠PGE2含量升高，经冠盖藤水提取物治疗后PGE2含量明显降低，并且以高剂量组最明显。结论冠盖藤的抗炎镇痛机制之一可能通过降低组织中PGE2含量。

〔关键词〕冠盖藤；骨性关节炎；前列腺素E2；组织形态学

1湖南中医药大学护理学院

2湖南省教育厅中药现代化研究重点实验室

3国家中药管理局药性与药效研究三级实验室

4中南大学湘雅附二院骨科

第一作者：秦莉花(1980-)，女，副教授，博士，主要从事中医药防治更年期或老年疾病研究。

骨性关节炎是一种在骨外科常见的老年人慢性进行性骨关节病，该病是以关节软骨的退行性病变为主要病理特征，病因尚未明确，病理生理过程十分复杂。好发于手、足、膝，中期骨性关节炎在相当程度上影响患者的下肢运动功能。骨关节炎对患者生活质量和社会公共卫生事业的影响不可忽视。目前主要服用非甾体消炎药消炎止痛，但长期服用往往引起药物副作用，且治疗效果不理想。民间用冠盖藤治疗骨性关节炎，其疗效显著，课题组前期研究表明本课题所用的冠盖藤为柔毛冠盖藤〔1〕，但其具体机制尚未明确。本课题研究冠盖藤水提液对骨性关节炎大鼠足组织前列腺素E2(PGE2)含量及形态学的影响。

1材料与方法

1.1动物健康SD大鼠，雄性，SPF级，体重180~220 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK(湘)2009-0004。

1.2药物冠盖藤在湖南省怀化市沅陵采集，经湖南中医药大学药学院中药鉴定教研室鉴定为柔毛冠盖藤，制备成水煎液称取冠盖藤药材1 500 g，分3次提取，最后浓缩成1 g生药/ml的药液，备用；雷公藤多甙片(上海复旦复华药业有限公司，批号Z31020415)。以上药物用时均由生理盐水配成所需浓度。

1.3试剂及仪器二甲苯(天津市大茂化学试剂厂，批号：20080921)。角叉菜胶(Sigma 公司，批号：45F-0427)；冰醋酸(潍坊润洁化学有限公司)；弗氏完全佐剂F-5881(Sigma公司)；PGE2试剂盒(美国ADL公司)。

1.4方法

1.4.1骨性关节炎模型的建立取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮内注射FCA0.1 ml致炎〔2，3〕。原发病变表现为致炎侧的关节肿胀，致敏当天后即可出现；继发病变一般于致炎后12～18 d出现，表现为非致炎侧及双前肢的关节肿胀。

1.4.2分组造模成功后的50只SD大鼠随机分为5组：模型组，雷公藤组，冠盖藤水提取物高、中、低剂量组，每组10只。另外取10只健康SD大鼠作为正常组。造模后，雷公藤组给予雷公藤多甙片混悬液15.44 mg/kg；冠盖藤水提取物低、中、高剂量组分别给予冠盖藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生药/kg，正常组给予等容量蒸馏水。致炎当天，各组均采用灌胃方法给药，每天1次，给药时间28 d。

1.4.3PGE2含量的检测治疗28 d后用断头，取大鼠右后足取较上部位组织检测PGE2含量，组织剪碎后用生理盐水3 ml浸泡2 h后取出，3 000 r/min离心浸泡液5 min，吸取上清液0.5 ml，加入0.5 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液1 ml后，将试管置于50℃恒温水浴中异构化20 min,在278 nm出测定其光密度(OD)值，PGE2含量以每克炎性组织相当的吸收光密度值(A值)表示。

1.4.4形态学指标治疗28 d后用断头，取大鼠右后足，用10%甲醛固定，HE染色观察足趾组织形态学。

2结果

2.1冠盖藤水提取物对弗氏完全佐剂大鼠模型足组织PGE2的影响正常组PGE2含量为(3.96±0.19)，模型组为(12.87±0.65)，雷公藤组为(4.59±0.29)，冠盖藤水提物高剂量组为(4.38±0.18)，冠盖藤水提物中剂量组为(6.92±0.23)，冠盖藤水提物低剂量组(8.37±0.21)。模型组的PGE2含量与空白组比较明显升高(P=0.00)，说明造模成功。冠盖藤水提取物高、中、低剂量组PGE2含量均较模型组明显下降(P=0.01、0.00、0.00),并有一定的剂量依赖关系。

2.2各组大鼠右后足的形态学变化膝关节软骨足趾病变见图1。正常组软骨细胞排列规则，表面光滑；模型组和冠盖藤水提取物低剂量组大鼠膝关节软骨在光镜下可见软骨细胞大量纤维化，细胞数量明显减少，膝关节软骨表面的胶原纤维退化，软骨基质钙化区变薄；冠盖藤水提取物高、中剂量组大鼠膝关节软骨退变较模型组和冠盖藤水提取物低剂量组轻，仅软骨表面细胞轻度纤维化。

图1　冠盖藤水提取物对骨性关节炎大鼠足趾组织形态学的影响(HE，×400)

3讨论

目前认为，在骨性关节炎的发病过程中，PGE2能够促进骨吸收，参与软骨基质的破坏。同时前列腺素作为炎症介质，也参与炎症反应，组织在炎症期间，可测到其中有高浓度的前列腺素。PGE2是一种重要的细胞生长和调节因子。在体内水平过高时会引起发热反应。炎症发生时，PGE2可使血管扩张，水肿加剧并引起发热疼痛〔4〕。

文献报道，兔骨性关节炎模型组关节滑液中的PGE2含量比正常组有显著增高(P<0.01)〔5〕。本实验说明冠盖藤可以降低骨性关节炎大鼠的足组织中PGE2的含量，从而抑制炎症反应，改善关节周围组织的痛觉过敏状态，缓解疼痛，达到治疗骨性关节炎的效果。

4参考文献

1陈晓阳，钟华美，吴艳飞，等.冠盖藤药用部位的生药学研究〔J〕.时珍国医国药，2012；23(4)：900-1.

2徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法〔M〕.第2版.北京：人民卫生出版社，1991：723-4.

3马玉琛，段斐，孟明.改良弗氏完全佐剂制备大鼠类风湿性关节炎模型〔J〕.现代预防医学，2008；35(10)：1989-91.

4杨光华.病理学〔M〕.第5版.北京：人民卫生出版社，2001：59.

5王宇强，王小华，杨富国，等.仙仲注射液对兔早期膝骨性关节炎组织形态学改变及关节滑液白介素-β、炎前列腺素E2的影响〔J〕.天津中医药，2009；26(6):69-71.

〔2013-05-28修回〕

(编辑赵慧玲/曹梦园)

通讯作者：陈晓阳(1953-)，女，教授，主任医师，硕士，主要从事中药药性理论基础与应用的研究。

基金项目：湖南省中医药管理局项目(2009033，201232)；湖南省教育厅中药学重点学科项目

〔中图分类号〕R268

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202(2016)03-0568-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.03.023