原花青素对应激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表达的影响

魏　严　吴红芳　刘安丽　华春秀　王　静

(南阳医学高等专科学校病理学教研室，河南　南阳　473061)



原花青素对应激大鼠hs-CRP、TNF-α和h-FABP表达的影响

魏严吴红芳刘安丽华春秀王静

(南阳医学高等专科学校病理学教研室，河南南阳473061)

摘要〔〕目的探讨原花青素对应激大鼠超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和人心型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)表达的作用。方法选择Wistar雄性大鼠60只，根据随机数字表法分成对照组、模型组及原花青素组各20只。对模型组及原花青素组进行足底电刺激应激建模，对照组不进行建模，持续20 d；造模前对原花青素组胃灌注原花青素(100 mg·kg-1·d-1)，而对照组及模型组均胃灌注等剂量的生理盐水20 d。另选16只Wistar雄性大鼠进行亚组实验，根据随机数字表法分成A1、A2、A3、A4亚组，每组4只，均使用原花青素进行干预，其中A1组使用剂量为100 mg·kg-1·d-1；A2组为50 mg·kg-1·d-1，刺激时间均为20 d；A3和A4组使用剂量均为100 mg·kg-1·d-1，但A3组10 d，A4组的刺激时间为15 d。检测各组大鼠血浆中的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平以及心肌梗死范围；并采用多元线性回归方法分析影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相关因素。结果原花青素组及模型组的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均显著高于对照组，且原花青素组低于模型组(均P<0.05)；对照组大鼠未发现心肌梗死，原花青素组与模型组的心肌梗死范围显著高于对照组，且原花青素组低于模型组(P<0.05)；通过多元线性回归分析法分析可知，原花青素剂量、足底电刺激时间、灌胃时间及心肌梗死范围均为影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相关因素。结论原花青素能够明显降低应激大鼠的hs-CRP、TNF-α以及h-FABP等指标的表达，具有预防和治疗心脏损伤的作用，值得临床深入研究。

关键词〔〕原花青素；超敏C反应蛋白；肿瘤坏死因子；心型脂肪酸结合蛋白

第一作者：魏严(1982-)，女，硕士，讲师，主要从事病理学与病理生理学、心脏应激保护方面的研究。

近年来有报道发现原花青素具有清除氧自由基和抗感染性反应及抗纤维化等诸多作用，但关于其对于心脏损伤的影响作用却无相关报道〔1〕。超敏C反应蛋白(hs-CRP)是机体遭受微生物入侵亦或组织损伤等炎性刺激后肝细胞合成的一种急性时相蛋白，可作为心脏炎症反应的标志物；肿瘤坏死因子(TNF-α)是可直接杀伤机体内肿瘤细胞而对正常细胞并无明显影响的一种细胞因子，近年来研究显示二者水平均在心脏病变患者中存在较大变化，可作为患者心脏损伤的评价指标。人心型脂肪酸结合蛋白(h-PABP)在心脏细胞质内含量较高，可对心肌收缩供应能量，是一种新型的心脏损伤标志物。本研究旨在探索原花青素对心脏损伤的临床治疗效果及机制。

1资料和方法

1.1临床资料选择Wistar雄性大鼠60只(南阳医学高等专科学校病理学教研室提供)，8～10周龄，体重220～260 g，平均(250.4±13.5)g。根据随机数字表法分成对照组、模型组及原花青素组各20只。另选16只Wistar雄性大鼠进行亚组实验，8～10周龄，体重220～250 g，平均(248.6±12.6)g。根据随机数字表法分成A1、A2、A3、A44个亚组，每组4只。各组大鼠的周龄、体重差异无统计学意义(P>0.05)具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1基础实验对模型组及原花青素组大鼠制作足底电刺激应激模型，将大鼠于玻璃箱内固定30 min，后移至电足休克笼内进行足底电刺激30 min，持续20 d；对照组大鼠不进行足底电刺激。造模前对原花青素组大鼠行胃灌注原花青素，剂量为100 mg·kg-1·d-1，而对照组及模型组均胃灌注等剂量的生理盐水，各组灌胃时间均为20 d。

1.2.2原花青素延伸实验对另16只大鼠均按相同方法建立足底电刺激应激模型，并应用原花青素进行干预。其中A1和A2组刺激时间均为20 d，但A1组使用原花青素剂量为100 mg·kg-1·d-1；A2组为50 mg·kg-1·d-1。A3和A4组均使用剂量为100 mg·kg-1·d-1原花青素进行干预，但A3组的刺激时间为10 d，A4组的刺激时间为15 d。四组的其他处理方法相同。

1.3观察指标

1.3.1处死大鼠后剔出心房、右室和蓝染区域利用日立7600型全自动生化分析仪(日本日立公司生产)检测各组大鼠血浆的hs-CRP、TNF-α水平，试剂盒均来自北京科美东亚生物公司，严格依照说明书进行操作。

1.3.2冰冻切片后经TTC染色、分离、滤纸吸干利用德灵全自动生化免疫分析仪(德灵公司生产)检测h-FABP水平，试剂盒为仪器自配，检测方法采用双抗体夹心酶联免疫法。

1.3.3心肌梗死范围指标称重计算心肌梗死区质量在左心室质量中的比例(IW/WLV)以及缺血区质量在左心室质量中的比例(WR/WLV)。

1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行方差分析和SNK-q检验。相关因素分析使用多元线性回归分析法。

2结果

2.1各组大鼠血浆中hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平比较原花青素组及模型组的hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平均显著高于对照组，且原花青素组低于模型组(均P<0.05)。见表1。

2.2各组大鼠的心肌梗死范围情况比较对照组大鼠未发现心肌梗死，且原花青素组WR/WLV〔(33.7±2.2)%〕、IW/WLV〔(21.4±3.5)%〕低于模型组〔(45.2±7.9)%、(31.6±5.8)%〕(P<0.05)。

2.3影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相关因素分析hs-CRP、TNF-α及h-FABP三者之间的变化情况趋于一致，三者均呈现出共同上升(下降)的趋势，因此将其三者作为一个整体进行研究，将原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平作为因变量，将原花青素剂量、足底电刺激时间、灌胃时间、心肌梗死范围作为自变量，通过多元线性回归分析法分析可知，原花青素剂量、足底电刺激时间、灌胃时间及心肌梗死范围均为影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的相关因素(P<0.05)。见表2。

表1　各组大鼠血浆中hs-CRP、TNF-α及

与对照组比较:1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05

表2　影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平的

3讨论

为急性心肌梗死患者检测心肌损伤标志物具有一定的防治作用。hs-CRP、TNF-α作为心脏损伤的常用指标，近年来研究较多，而h-FABP作为一种新型心脏损伤标志物，则未受到足够关注，邱洁等〔2，3〕研究指出，h-FABP能在较大程度上反映患者的心脏损伤严重度，对其进行检查具有重要意义。Verardo等〔4〕报道，原花青素能较好地预防大鼠的心肌损伤，对有心肌梗死的大鼠具有较好的症状缓解作用。h-FABP作为心脏细胞质内含量较高的蛋白质，可对心肌收缩供应能量，若心肌细胞处于缺血状态，则其能够由心肌细胞释放进入血液，从而为心肌的收缩供应能量。代谢动力学实验结果显示，h-FABP的血浆含量水平在心肌梗死产生的3 h后即可上升至峰值，同时其在有不稳定心绞痛的患者群体中的水平亦有明显上升，即使是微小性心肌梗死，h-FABP水平也会上升〔5〕。hs-CRP是一类价值较高的心脏标志物，其在心肌梗死时的含量明显上升，同时在心肌缺血时亦有明显的上升趋势。同时心脏是形成内源性TNF-α的重要区域，TNF-α能够经过各类途径诱导炎症反应及细胞凋亡，因此上述三类指标均可用于评价心脏损伤的情况〔6〕。本研究结果提示足底电刺激能对大鼠产生应激反应，造成hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平显著增高；而原花青素干预能够有效改善其炎性症状，抑制心肌细胞的损伤，与Baselga-Escudero等〔7〕的报道结果相符合。同时，证实了原花青素能够明显改善大鼠的心肌损伤。此外，研究还提示，足底电刺激时间延长可能加重大鼠的心肌损伤，造成心肌梗死范围增大，从而使hs-CRP、TNF-α及h-FABP水平增高；而原花青素具有抗氧化作用及对心肌细胞的保护作用，剂量越高、灌胃时间越长，其作用效果越明显。因此原花青素剂量、灌胃时间、足底电刺激时间及心肌梗死范围均能在一定程度上影响原花青素组hs-CRP、TNF-α及h-FABP的水平变化。Zhang等〔8〕报道，原花青素的应用剂量为100 mg·kg-1·d-1时对心肌损伤的预防作用明显大于50 mg·kg-1·d-1时的剂量，这再次证实了本文的研究结果。

参考文献4

1Luiz RL，Vila TV，de Mello JC，etal.Proanthocyanidins polymeric tannin from Stryphnodendron adstringens are active against Candida albicans biofilms 〔J〕.BMC Complement Altern Med，2015；19(15)：68-9.

2邱洁，曹爱红，张萍，等.葡萄籽原花青素联合阿托伐他汀治疗老年颈动脉粥样硬化患者的观察〔J〕.中华老年医学杂志，2012；31(5)：371-5.

3钟书辉，张艳，李乐雯，等.原花青素对心肌缺血再灌注大鼠血清T-AOC、CRP及NO的影响〔J〕.中国生化药物杂志，2011；32(3)：228-9.

4Verardo V，Cevoli C，Pasini F，etal.Analysis of oligomer proanthocyanidins in different barley genotypes using high-performance liquid chromatography-fluorescence detection-mass spectrometry and near-infrared methodologies 〔J〕.J Agric Food Chem，2015；63(16)：4130-7.

5赵雅宁，曹书华，郭霞，等.葡萄籽原花青素对慢性间歇性低氧大鼠脑组织炎症反应及学习记忆能力的影响〔J〕.郑州大学学报(医学版)，2014；49(1)：29-32.

6苗智如，廖丽娜，张敏敏，等.原花青素及其组合物对泡沫细胞形成的影响〔J〕.浙江医学，2013；35(18)：1644-7.

7Baselga-Escudero L，Pascual-Serrano A，Ribas-Latre A，etal.Long-term supplementation with a low dose of proanthocyanidins normalized liver miR-33a and miR-122 levels in high-fat diet-induced obese rats 〔J〕.Nutr Res，2015；35(4)：337-45.

8Zhang H，Sun XQ，Cao JM，etal.Protective effect of epimedium combined with oligomeric proanthocyanidins on exercise-induced renal ischemia-reperfusion injury of rats 〔J〕.Int J Clin Exp Med，2014；7(12)：5730-6.

〔2015-05-11修回〕

(编辑袁左鸣/滕欣航)

基金项目：南阳市科技攻关计划项目(No.2014GG039)

中图分类号〔〕R541〔

文献标识码〕A〔

文章编号〕1005-9202(2016)01-0040-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.018