肾综合征出血热患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及意义

王丽娜，　韩增磊，　李晓斐

(1.青岛市传染病医院，山东 青岛 266033；2. 青岛市市立医院，山东 青岛 266033)

肾综合征出血热患者外周血T淋巴细胞亚群的变化及意义

王丽娜1，韩增磊2，李晓斐1

(1.青岛市传染病医院，山东 青岛 266033；2. 青岛市市立医院，山东 青岛 266033)

摘要：目的研究肾综合征出血热(HFRS)患者淋巴细胞亚群绝对值及比率的变化，以探讨淋巴细胞亚群在疾病的分期、治疗和预后判断中的作用，为临床治疗提供实验依据。方法采用流式细胞仪检测95例HFRS患者及30名正常对照者外周血T淋巴细胞亚群绝对值及比率。结果在HFRS各病期之间，CD3+T淋巴细胞绝对值差异无统计学意义(P>0.05)，CD4+T细胞绝对值从轻型到危重型呈进行性下降，而CD8+T细胞绝对值升高；HFRS患者在发热期CD4+T细胞比率已显著下降，CD8+T细胞比率显著升高，CD4+/CD8+比值显著下降并倒置，与正常对照者比较差异有统计学意义(P<0.01)，至低血压期和少尿期达极值。结论HFRS患者各病期淋巴细胞亚群比例严重失衡，动态检测淋巴细胞亚群有助于疾病的分期、治疗和预后判断。

关键词：T淋巴细胞亚群；肾综合征出血热；流式细胞术

中图分类号：

文章编号：1673-8640(2015)01-0058-03R446.63

文献标志码：码：A

DOI：10.3969/j.issn.1673-8640.2015.01.014

作者简介：王丽娜，女，1978年生，硕士，主管技师，主要从事分子生物学及传染病临床检验研究。

通讯作者：李晓斐，联系电话：0532-81636139。

收稿日期：(2014-09-02)

肾综合征出血热( hemorrhagic fever with renal syndrome , HFRS)是由汉坦病毒引起的以鼠类为主要传染源的自然疫源性疾病。临床上以发热、出血、肾功能损害为主要表现[1]。严重者可导致多脏器功能损害，危及生命。其发病机制与机体免疫功能有关，因此机体免疫功能研究在汉坦病毒致病机制中的作用越来越受到重视，为探讨HFRS患者的免疫功能变化，我们对95例HFRS患者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞进行了研究。

材料和方法

一、研究对象

95例患者均为青岛市传染病医院2010年1月至2012年12月收入院患者，男76例，女19例，年龄 (43±12)岁。诊断标准：严格按国家卫生部1997年颁布的《流行性出血热防治方案》制定的诊断标准进行诊断分型。其中轻型16例、中型47例、重型22例、危重型3例、非典型7例。所有病例经特异性HFRS IgM、IgG检查均为阳性，临床表现典型。正常对照组30名为健康献血者，男20名，女10名，年龄 (29±10)岁。

二、方法

采静脉血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝后立即进行检测。采用美国BD公司CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数试剂盒对细胞作荧光标记，FACS Calibur流式细胞仪测定其绝对值及比率。

三、统计学方法

结果

一、CD3+T细胞在HFRS患者不同病期略有减低(P>0.05)；CD4+T细胞在各病期呈进行性减低，与正常对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01或0.05)，多尿期开始恢复；CD8+T细胞绝对值在各病期减少，而CD8+T细胞比率明显升高，CD4+/CD8+比值各期均显著下降，与正常对照组相比，差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。HFRS患者病程中CD3+T细胞基本保持不变是由CD8+T细胞升高引起，表现为T细胞亚群中CD8+T细胞比率升高，而CD4+T细胞数比率在各期有不同程度降低(P<0.01或P<0.05)。见表1。

二、不同临床病型HFRS患者除轻型外均存在不同程度的T淋巴细胞及亚群CD4+、CD8+T细胞绝对值的降低；随病型的加重，CD4+T细胞绝对值在危重型达最低值。危重型患者CD3+T细胞的回升是以CD8+T细胞为主。CD4+T细胞比率随病型的加重越来越低，而CD8+T细胞比率则显著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值愈低，病情愈重。见表2。

病期 例数CD3+T细胞绝对值(个/μL)CD4+T细胞绝对值(个/μL)比率CD8+T细胞绝对值(个/μL)比率CD4+/CD8+发热期301917.6±483.31035.5±257.6*0.29±0.10*864.8±291.7**0.34±0.17*0.89±0.15**低血压期181532.5±384.4642.4±284.5*0.21±0.20**907.3±128.3**0.39±0.15**0.46±0.20**少尿期191194.7±475.8363.8±113.5**0.25±0.11**975.8±101.5**0.40±0.21**0.54±0.23**多尿期181475.6±346.8401.4±193.4**0.33±0.22*1097.9±183.6*0.32±0.18*1.07±0.49*正常对照组302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：与正常对照组比较， *P<0.05、 **P<0.01

临床病型例数CD3+T细胞绝对值(个/μL)CD4+T细胞绝对值(个/μL)比率CD8+T细胞绝对值(个/μL)比率CD4+/CD8+轻型162035.6±352.71071.6±293.5 0.38±0.21*1085.6±289.4 0.32±0.20*1.10±0.33中型471786.1±513.5*829.7±271.4**0.25±0.15**975.3±225.9*0.37±0.18*0.71±0.20*重型221017.6±524.3**525.6±297.5**0.20±0.10**625.4±273.5**0.47±0.15**0.40±0.13**危重型3883.5±158.6**325.8±142.1**0.15±0.04**515.7±183.6**0.64±0.34**0.21±0.07**正常对照组302024.5±373.51328.5±353.60.42±0.191198.3±355.60.28±0.111.65±0.68

注：与正常对照组比较，*P<0.05、 **P<0.01

讨论

HFRS是由汉坦病毒引起的自然疫源性疾病,属于病毒性出血热中的HFRS，严重危害人类身体健康，病死率为3%～5%[2]。我国是世界上受汉坦病毒危害最为严重的国家[3]。HFRS的发病机制尚未完全阐明,多数研究资料提示该病的发生与病毒及机体的异常免疫反应有关。本研究结果表明，HFRS患者T淋巴细胞亚群比例失调，CD4+T细胞绝对值及比率进行性减少，CD8+T细胞比率相对升高，但绝对值减少(P<0.01)，与文献报道[4-5]结果一致。患者体内存在免疫反应紊乱,在出血热发病期内存在体液免疫和细胞免疫功能紊乱：(1)汉坦病毒感染后CD4+T细胞相对减少，并激活CD4+T细胞分泌Th2类细胞因子[白细胞介素6(interlenkin 6, IL-6)等[6]],从而促进B细胞的活化和增殖，引起体液免疫功能亢进及病理损伤：(2)病毒感染后CD8+T细胞增多,尤以发热期和低血压少尿期为甚，CD8+T细胞中的细胞毒性T细胞(cytotoxic T cell，CTL)直接作用于血管内皮细胞清除病毒,同时也破坏靶细胞造成免疫病理损伤,导致全身微小血管广泛损害,组织脏器充血、水肿、出血[7],尤其是肾脏的损伤最为严重。

各种T淋巴细胞亚群的比例失调与该病病情严重程度密切相关。动物实验证明，汉坦病毒感染可使CTL数量增多，活性增强，CD8+T细胞增加越多，病情越重，对机体造成的损害也越重。对患者T细胞(CD3+)及其亚群CD4+、CD8+T细胞的检测及分析CD4+/CD8+比值可反映机体细胞免疫的功能。本研究应用流式细胞仪检测T淋巴细胞及其亚群发现，CD3+T细胞中的2类亚群CD4+和CD8+T细胞的变化正好相反，CD4+T细胞百分比在发热期、低血压少尿期呈进行性降低，到低血压少尿期时只有正常的1/2左右；CD8+T细胞在发热期、低血压少尿期呈进行性升高,到低血压少尿期时达到顶峰,进而引起CD4+/CD8+比例减低甚至倒置。至多尿期淋巴细胞亚群各指标开始逐渐好转,但至恢复期仍未完全正常，表明HFRS患者有严重的细胞免疫功能紊乱。危重型患者CD3+T细胞的回升是以CD8+T细胞为主。CD4+T细胞百分比随病型加重越来越低，而CD8+T细胞百分比显著升高(P<0.01或P<0.05)，CD4+/CD8+比值越低，病情越重，提示HFRS患者病程中存在细胞免疫功能紊乱，特别是危重型患者细胞免疫功能严重紊乱，可能是致病情加重的原因之一。

综上所述,淋巴细胞亚群在HFRS患者各病期均存在紊乱,与病程的发生、发展及预后有明显的关系。因此外周血淋巴细胞亚群的检测有助于HFRS的分期、治疗和预后判断。

参考文献

[1]XIONG HR, LI Q, CHEN W, et al. Specific humoral reaction of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) patients in China to recombinant nucleocapsid proteins from European hantaviruses[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2011, 30(5): 645-651.

[2]彭文伟.传染病学[M].6版.北京:人民卫生出版社,2004：88-91.

[3]白雪帆，潘蕾，王贵强，等.第六次全国肾综合征出血热学术纪要[J].中华传染病学杂志, 2002, 20(1): 61.

[4]杨朝晖. 动态分析肾综合征出血热外周血T淋巴细胞亚群及其临床意义[J].中国实验诊断学,2009,13(11)：1587-1588.

[5]顾立志. 流行性出血热70例临床特点分析[J]. 医学理论与实践，2013，26(3)：328-329.

[6]DAI Y, LI XL, WANG L, et al. Change of plasma TH1/TH2 cytokines levels in patients with hemorrhagic fever with renal syndrome[J]. Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao, 2010, 32(1): 108-112.

[7]RASMUSON J, POURAZAR J, LINDERHOLM M, et al. Presence of activated airway T lymphocytes in human puumala hantavirus disease[J]. Chest, 2011, 140(3): 715-722.

(本文编辑：姜敏)