高效液相色谱法测定清热止泻片中黄芩苷含量

李玉英，彭海英

（1.广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000； 2.广东医学院，广东 东莞 523808）

清热止泻片由葛根、黄芩、甘草（炙）、鱼腥草、山芝麻、黄连6味中药组方，具有解肌清热、止泻止痢的作用，适用于泄泻痢疾、身热烦渴、下身臭秽等症，其现行质量标准中只有定性检查而无定量检测［广东省食品药品监督管理局《医疗机构制剂注册标准》（粤ZB2011097）］。为更好地控制和保证清热止泻片的质量，根据处方中黄芩含黄芩苷及其在280 nm波长处有吸收峰［1］，笔者建立了测定清热止泻片中黄芩苷含量的反相高效液相色谱法，用于控制产品质量。现报道如下。

1 仪器与试药

CP225D型电子天平（德国赛多利斯公司）；安捷伦1200型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；KQ-250D型超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）。清热止泻片（河源市中医院，批号分别为130501，130601，131001）；黄芩苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110715-201117）；甲醇（广州化学试剂厂）为分析纯；甲醇、磷酸（广州化学试剂厂，均为色谱纯），水（自制）为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent Eclipse plus C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -水 - 磷酸（45 ∶55 ∶0.2）；流速：1 mL ／min；检测波长：280 nm。

2.2 溶液制备

取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含25 μg的溶液，即得对照品溶液。取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，取约6片，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置20 mL量瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例和工艺，同法制成缺黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性对照试验：分别精密吸取2.2项下3种溶液各20 μL，注入液相色谱仪测定。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱相应位置处无干扰峰出现，说明处方中其他成分对测定结果无影响。色谱图见图1。

线性关系考察：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL约含0.5 mg的对照品贮备液，精密吸取上述贮备液，分别稀释成每 1 mL 含黄芩苷 7.5，15，30，60，90，120 μg 的溶液，即得对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标进行线性回归。得回归方程 Y＝3 087.2 X+25.652，r＝0.999 9（n ＝6）。结果表明，黄芩苷进样量在 0.077 ～1.220 μg范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验：取批号为130601的样品60片，研细，取约2，3，6片，各3份共9份，精密称定，分置具塞锥形瓶中，分别加入等量的黄芩苷对照品，按2.2项下供试品溶液制备方法制备所需溶液，按色谱条件测定黄芩苷的峰面积，按外标法计算。结果表1。

图1 高效液相色谱图

表1 黄芩苷加样回收试验结果（n＝9）

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，测定峰面积。结果的 RSD为0.5%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取批号为131001的样品50片，研细，取约6片，精密称定6份，分别置具塞锥形瓶中，按2.2项下方法制备供试品溶液，进样测定黄芩苷的峰面积并计算含量。结果每片平均含量为 0.80 mg，RSD 为 1.0%（n＝6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8，10，12，16 h时进样测定。结果的 RSD为1.5%（n＝8），表明供试品溶液在16 h内稳定。

2.4 样品含量测定

按拟订方法，测定3批样品，结果3批样品中黄芩苷的含量为每片 0.77，0.81，0.80 mg，平均 0.79 mg。

3 讨论

清热止泻片是疗效确切的医院制剂，但其质量标准一直只有简单的鉴别和检查项目，缺乏所含中药成分的定量方法。本研究所建立的测定清热止泻片中黄芩苷含量的高效液相色谱法，方法操作简单易行，具有准确、灵敏、重复性好、回收率高等优点，是清热止泻片质量控制的有效方法。

参考文献：

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：282-283.