甲氨蝶呤片对正常大鼠血液生化指标的影响*

热比姑丽·伊斯拉木，尤力都孜·买买提，买合素提·卡德尔，伊力亚尔·斯玛依，斯拉甫·艾白

（1.新疆医科大学基础医学院药理教研室，新疆 乌鲁木齐 830054； 2.新疆维吾尔医方剂学实验室，新疆乌鲁木齐 830049； 3.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所，新疆 乌鲁木齐 830049）

银屑病又名牛皮癣，是一种常见且易复发的慢性炎症性皮肤病。甲氨蝶呤［1-2］为叶酸盐类似物，自20世纪50年代始被用于治疗恶性肿瘤，同时也成为治疗免疫性疾病的广谱药物，包括类风湿关节炎和银屑病。本研究中探讨了甲氨蝶呤片对正常大鼠一般状况、体重、脏器系数及血液生化指标的影响，便于该药在试验研究中合理使用。

1 材料与方法

1.1 仪器、试药与动物

仪器设备：7100型全自动生化分析仪（日立公司）；TGL-5-A型低速大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）；BS110S型电子精密天平（北京赛多利斯天平有限公司）。

药品与试剂：甲氨蝶呤片（上海信宜药厂有限公司，国药准字H31020644，批号为 20130403）；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，天津市光复精细化工研究所，批号为 20100409）；戊巴比妥钠（Pentpbarbital Sodium Salt，Sigma 公司，批号为 20130115）。丙氨酸氨基转移酶（ALT，批号为140113030），天门冬氨酸氨基转移酶（AST，批 号 为 140213028），碱 性 磷 酸 酶 （ALP，批 号 为140313015），磷酸肌酸激酶（CK，批号为 142513011），总胆红素（TBIL，批号为 140613025），总蛋白（TP，批号为 140813019），白蛋白（ALB，批号为 140913022），葡萄糖（GLU，批号为 141513033），尿素氮（BUN，批号为 141313032），肌酐（Cr，批号为 141013021），总 胆 固 醇 （TC，批 号 为 141613026），三 酰 甘 油 （TG，批 号 为141713021），以上试剂均由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司生产。

试验动物：健康 SD 大鼠，50只，雌（♀）、雄（♂）各半，SPF级，体重180～220 g，由新疆医科大学实验动物中心提供，质量合格证号XJMUSYDW2013000047，试验动物生产许可证号SCXK（新）2011-0004。试验动物使用许可证号 SYXK（新）2011-0006，新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所药物安全性评价中心SPF级动物房提供。

1.2 试验方法

将50只大鼠适应性饲养5 d，检疫合格后，取40只大鼠，雌、雄各半，按体重随机分为两组，即溶剂对照组（A组）、甲氨蝶呤组（B组，给药剂量为1.05 mg／kg，根据成人临床拟用药量、笔者前期已做的小鼠药效学试验用药剂量，折算并确定大鼠剂量），各20只，雌、雄各半。A组给予 0.5%CMC-Na灌胃，B组给予甲氨蝶呤灌胃，均以每100 g体重1 mL体积给药，每天1次，连续65 d。连续观察大鼠的一般状况，每周称1次体重。第66天，用0.5%戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉采血，处死大鼠。用BS110S型电子精密天平称大鼠脑、肝、心脏、肺脏、胸腺、脾脏、肾脏、肾上腺、睾丸、附睾、子宫、卵巢的质量，计算脏器系数。用TGL-5-A型低速大容量离心机离心血清，用7100型全自动生化分析仪，检测大鼠血液生化指标。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 体重

与A组比较，第5周开始，B组个别大鼠出现轻微腹泻。两组大鼠体重变化比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表1。

表1 两组大鼠体重变化比较（ ± s，g，n ＝10）

表1 两组大鼠体重变化比较（ ± s，g，n ＝10）

时间第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第9周第10周雄性 雌性A组B组A组B组255.48 ± 8.78 292.40 ± 10.75 321.93 ± 15.82 386.75 ± 6.26 413.18 ± 10.05 438.82 ± 14.91 456.35 ± 17.57 476.47 ± 15.23 490.62 ± 20.35 513.92 ± 23.32 254.53 ± 17.95 278.67 ± 52.33 335.02 ± 52.31 377.07 ± 42.66 406.85 ± 42.02 438.53 ± 47.77 457.62 ± 53.17 462.68 ± 55.33 450.18 ± 50.57 440.85 ± 59.91 251.17 ± 5.15 258.63 ± 13.39 285.42 ± 41.15 280.03 ± 19.94 288.38 ± 21.03 296.05 ± 19.24 297.75 ± 26.48 303.30 ± 25.63 310.32 ± 20.86 313.05 ± 19.79 250.05 ± 12.35 258.60 ± 14.65 259.12 ± 36.05 287.33 ± 3.89 294.95 ± 13.56 300.02 ± 8.15 311.72 ± 10.82 314.12 ± 12.83 310.97 ± 17.41 306.67 ± 15.53

2.2 脏器系数

与A组比较，B组雄性大鼠心脏、肺脏、胸腺、肾脏系数升高（P＜0.05），雌性大鼠肝脏、脾脏、肾脏系数升高而胸腺、脑系数降低（P＜0.05）。药物对其余脏器系数的影响不显著（P＞0.05）。详见表2。

2.3 血液生化指标

与A组比较，B组雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低（P＜0.05），雌性大鼠血清 TG 升高，AST，ALP，CK 降低（P＜0.01）。药物对其余指标影响不显著（P＞0.05）。详见表 3。

表2 两组大鼠脏器系数变化比较（ ± s，n＝10）

表2 两组大鼠脏器系数变化比较（ ± s，n＝10）

注：与 A 组比较，*P ＜0.01，△P ＜0.05。表 3同。

脏器 雄性 雌性A组B组A组B组脑肝脏心脏肺脏胸腺脾脏肾脏肾上腺睾丸子宫附睾卵巢0.405 6 ±0.055 0 2.914 7 ±0.158 5 0.331 2 ±0.438 0 0.438 0 ±0.054 5 0.069 7 ±0.015 8 0.190 0 ±0.017 9 0.684 1 ±0.052 1 0.015 8 ±0.001 1 0.787 5 ±0.031 4 0.474 5 ± 0.080 9 3.420 5 ± 0.167 5 0.426 2 ± 0.094 8*0.586 7 ± 0.138 3*0.092 7 ± 0.008 8*0.756 3 ± 0.501 9*0.795 4 ± 0.173 8*0.019 8 ± 0.012 6 0.818 1 ± 0.114 6 0.716 1 ±0.015 3 2.927 3 ±0.215 3 0.380 9 ±0.035 7 0.525 4 ±0.069 7 0.161 0 ±0.028 8 0.280 9 ±0.032 3 0.687 6 ±0.053 5 0.032 0 ±0.008 1 0.627 3 ± 0.052 1*3.554 5 ± 0.600 7*0.400 4 ± 0.052 1 0.673 1 ± 0.160 6 0.068 5 ± 0.022 6△0.768 9 ± 0.367 5△0.729 0 ± 0.117 0 0.032 1 ± 0.007 6 0.259 5 ±0.055 60.229 1 ± 0.084 1 0.313 5 ±0.067 70.322 0 ± 0.066 5 0.061 1 ±0.016 50.053 2 ± 0.009 2

表3 两组大鼠血液生化指标变化比较（ ± s，n＝10）

表3 两组大鼠血液生化指标变化比较（ ± s，n＝10）

雄性 雌性指标A组B组A组B组55.2 ± 10.19△21.0 ± 3.68 22.0 ± 7.82△107.3 ± 43.37△0.30 ± 0.13 5.43 ± 0.45 16.42 ± 7.65 4.78 ± 1.16 1.13 ± 0.24 0.58 ± 0.34△25.60 ± 6.83 13.91 ± 4.17 AST（U ／L）ALT（U ／L）ALP（U ／L）CK（U ／L）TBIL（μmol／L）GLU（mmol／L）Cr（μmol／L）BUN（mmol／L）TC（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）ALB（g／L）89.5 ±30.41 33.0 ±13.70 71.5 ±17.16 282.4 ±147.51 0.16 ±0.07 4.26 ±1.02 8.21 ±5.96 4.28 ±0.59 1.05 ±0.17 0.59 ±0.20 27.67 ±6.25 15.32 ±3.29 104.2 ± 44.24 35.2 ±11.17 26.4 ±9.53△244.4 ± 147.00 0.30 ±0.22*4.00 ±0.90 11.04 ± 6.49 5.71 ±1.38 1.01 ±0.19 0.60 ±0.27 26.33 ± 8.29 14.39 ± 4.94 99.8 ±37.26 18.4 ±2.63 48.6 ±24.61 523.1 ± 212.20 0.30 ±0.15 4.70 ±0.46 7.99 ±4.24 5.33 ±0.60 1.27 ±0.23 0.43 ±0.08 31.42 ± 6.89 17.79 ± 3.31

3 讨论

甲氨蝶呤为叶酸还原酶抑制剂［1］，可阻止表皮细胞增殖时DNA合成，抑制细胞核的有丝分裂。甲氨蝶呤可抑制体内被激活的淋巴细胞增殖和减弱CD8细胞的功能并抑制中性粒细胞的趋化性。甲氨蝶呤是全身治疗银屑病的标准用药，但其治疗量和中毒量很接近，长期用药会引起肝脏广泛性纤维化和肝硬化，故在应用时需注意安全，严格选择适应证，有肝肾功能异常、妊娠或哺乳、严重贫血、白细胞减少、活动性消化道溃疡、活动性感染性疾病、酗酒、免疫缺陷及其他严重疾病时不宜使用，治疗前和治疗期间均应定期检查肝肾功能及血、尿常规。

甲氨蝶呤片是目前我国银屑病试验研究中仍选用的阳性对照药物［3-4］。笔者曾通过建立银屑病模型，探讨了维吾尔医经典方剂的抗小鼠银屑病作用，发现甲氨蝶呤片疗效较好，且对小鼠无明显不良反应［5］。本试验结果表明，甲氨蝶呤能引起个别大鼠腹泻，且明显无性别差异；对大鼠肾脏、肝脏、心脏、肺脏、胸腺、脾脏、脑系数有一定影响；同时，能使雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低，雌性大鼠血清TG升高而AST，ALP，CK降低。故初步认为，对于甲氨蝶呤片，大鼠比小鼠敏感，能刺激大鼠胃肠道引起腹泻，提示此反应具有动物种属差异；对大鼠肝功能有一定影响，引起上述血液生化指标发生变化，这些不良反应均与甲氨蝶呤片临床报道相似［6-12］。对大鼠肾脏、心脏、肺脏、胸腺、脾脏、脑系数的影响，需通过该脏器的组织病理学检查作进一步判断。

综上所述，选择甲氨蝶呤片用于试验研究，必须慎重选择动物种属、用药剂量、用药时间等，否则可能会蓄积药物毒性，引起动物死亡，导致试验失败。

参考文献：

［1］赵 辨.中国临床皮肤病学（下册）［M］.南京：江苏科学技术出版社，2013：1 008-1 025.

［2］杜军华.药理学原理——药物治疗学的病理生理基础［M］.第2版.北京：人民卫生出版社，2009：690.

［3］郭 顺，时 乐，闫小兵，等.麻桂汤对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损的干预研究［J］.中药材，2014，37（6）：1 066-1 069.

［4］赵京霞，底婷婷，王 燕，等.5种常用药物对咪喹莫特诱导小鼠银屑病样皮损模型形成的影响［J］.中国皮肤性病学杂志，2014，28（3）：234-238.

［5］热比姑丽·伊斯拉木，尤力都孜·买买提，伊力亚尔·斯玛依，等.异常粘液质成熟剂（Munziq Balgam）对银屑病小鼠模型的作用［J］.中国比较医学，2014，24（8）：27-31.

［6］龙 亭.甲氨蝶呤治疗银屑病临床观察［J］.中国实用医药，2014，9（4）：161-162.

［7］顾 敏，李 爽，郝良纯，等.大剂量甲氨蝶呤治疗儿童急性淋巴细胞白血病的血药浓度及影响因素分析［J］.中国医科大学学报，2013，42（6）：566-569.

［8］靳培英，徐文严.甲氨蝶呤治疗银屑病的再评价［J］.国外医学：皮肤性病学分册，1999，25（1）：3-6.

［9］孟桂平，刘卫静.大剂量甲氨蝶呤不良反应分析及防治［J］.中国药业，2014，23（6）：45-46.

［10］张 毅，郭 澄.对短期小剂量甲氨蝶呤致不良反应病例的治疗与思考［J］.中国药业，2011，20（19）：80-81.

［11］李子雄，林 梅.大剂量甲氨蝶呤治疗小儿急性淋巴细胞白血病的不良反应观察［J］.山西医药杂志，2014，43（10）：1 193-1 194.

［12］王 捷，王建华，赵 军.SLC19A1遗传多态性与大剂量甲氨蝶呤化疗不良反应相关性的研究［J］.中国临床药理学杂志，2013，29（6）：406-409.