时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较

罗 惟，张 杰

（凉山州彝族自治州第一人民医院检验科，四川 615000）

时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的比较

罗 惟，张 杰

（凉山州彝族自治州第一人民医院检验科，四川 615000）

目的探讨时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床价值。方法选取该院检验科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清标本250份，分别采用时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法进行检测，比较2种方法对乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清标志物阳性检出率。结果时间分辨免疫荧光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg检测阳性率均明显高于酶联免疫吸附法，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论相较于酶联免疫吸附法，时间分辨荧光免疫法用于乙型肝炎患者可显著提高病毒血清标志物阳性检出率，具有临床应用价值。

荧光免疫测定； 酶联免疫吸附测定； 乙型肝炎病毒血清标志物； 肝炎，乙型，慢性

乙型肝炎病毒血清标志物是目前公认的乙型病毒性肝炎诊断“金标准”，也是乙型肝炎病毒感染重要病原学依据及病情进展预后评估最关键指标[1]。目前临床乙型肝炎病毒血清标志物常规采用酶联免疫吸附法，其具有操作简便、检测迅速及价格低廉等等优势，但大量临床研究证实，酶联免疫吸附法检测灵敏度较低、漏诊率较高、钩状效应明显，且无法提供乙型肝炎病毒血清标志物的具体含量[2-3]，无法满足临床需要。作为一种新型临床免疫检验技术，时间分辨荧光免疫法开始在乙型肝炎病毒血清标志物检测中得到广泛应用。本次研究选取本院检验科近期收取的乙型肝炎患者血清标本250份，分别采用时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法进行检测，比较2种方法对于乙型肝炎病毒表面抗原（HB-sAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）及乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）等乙型肝炎病毒血清标志物阳性检出率，探讨时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法用于乙型肝炎病毒血清标志物检测的临床价值差异。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院检验科2013年6～12月收取的乙型肝炎患者血清标本共250份，均符合中华医学会《病毒性肝炎防治方案》慢性乙型病毒性肝炎诊断标准[4]。入选患者中男157例，女93例，年龄30～57岁，平均（42.67±5.20）岁。

1.2 方法

1.2.1 检测方法 抽取乙型肝炎患者清晨空腹静脉血5～10 mL，放入真空管中，37℃恒温凝血分离血清，并于血清分离后1 h进行检测。（1）时间分辨荧光免疫法：时间分辨荧光免疫法属于定量检测方法，以超过正常参考范围上限判读为阳性，对于指标判读为弱阳性标本，应重新设立双阳性对照重复检测，如再次判读为阳性即可认定；检测仪器采用上海新波时间分辨荧光免疫分析仪，并选择同公司配套试剂盒，操作过程中严格按照试剂盒说明书要求进行。（2）酶联免疫吸附法：酶联免疫吸附法属于定性检测方法，以酶标仪显示结果进行阳性判读，对于指标判读为弱阳性标本，应重新设立双阳性对照重复检测，如再次判读为阳性即可认定；检测仪器采用汇松MB-580型。

1.2.2 观察指标 记录乙型肝炎病毒血清标志物检测阳性例数，计算阳性率；乙型肝炎病毒血清标志物指标包括HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg；以超过正常参考范围值上限判定为阳性，其中HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg正常参考范围分别为0.0～0.5 ng/mL、0.0～0.2 PEU/mL、0.0～0.9 PEU/mL、0～10 mU/mL、0.0～0.5 PEU/mL；检出阳性率=（检出阳性例数/总例数）×100.00%。

1.3 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

时间分辨免疫荧光法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg检测阳性率均明显高于酶联免疫吸附法，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 2种方法对于乙型肝炎病毒血清标志物阳性检出率比较[n（%）]

3 讨 论

流行病学研究显示，在全球范围内我国属于乙型肝炎病毒感染高发地区，超过1亿人携带HBsAg。乙型肝炎病毒血清标志物检测是进行乙型肝炎病毒感染判定最主要的方式；其中肝癌患者HBeAb感染检出率显著高于慢性乙型感染和肝硬化，而HBcAb水平与患者病情进展即病毒增殖水平和肝细胞损伤具有相关性；而HBcAb则是乙型肝炎病毒感染后血清中最早出现抗体指标，因其具有高效价、长持续时间等优势，被作为流行病学乙型肝炎病毒感染首选观察指标。

目前，临床HBV感染后血清学检测检测常用方法包括酶联免疫吸附法、时间分辨荧光免疫法及聚合酶链反应法，其中酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法主要用来检测乙型肝炎病毒抗原或抗体，而聚合酶链反应法则主要用来检测乙型肝炎病毒DNA。酶联免疫吸附法是目前最为常用乙型肝炎病毒免疫检测技术，可通过对抗体抗原进行酶标记进行病毒检测，但其仅能够完成病毒定性分析，无法进行患者体内病毒血清标志物定量计算及动态监测[5]，故乙型肝炎病毒血清标志物感染检测灵敏性较为低下，无法满足临床对于乙型肝炎病毒复制水平及感染情况判读需求。已有研究结果显示，酶联免疫吸附法检测乙型肝炎血清标志物最低限为0.5 ng/mL，故乙型肝炎病毒低水平感染人群漏检更高；同时酶联免疫吸附法检测对于操作熟练度、污染及判读方面要求较高，也限制其临床应用[6-7]。聚合酶链反应法可通过检测标本中乙型肝炎病毒DNA表达确定有无病毒感染，但其对于设备、人员技术水平要求较高，无法在基层医院广泛应用[9]。

时间分辨荧光免疫技术是近年来出现的一种乙型肝炎病毒血清标志物定性定量检测手段，主要检测机制为以镧系稀土元素螯合物作为二抗进行示踪标记病毒血清标志物，进而发生荧光免疫反应[10]，经放大器扩大检测信号，并经标准曲线分析数据得到确定病毒血清标志物含量。相对于其他乙型肝炎病毒血清标志物检测方法，时间分辨免疫荧光法具有可多次重复检测、测量值范围广、无衰变及检测稳定性高等优势[11-12]；同时整个检测过程均有全自动荧光满意检测仪完成，有效避免因操作技术差异引起的检测误差，有助于提高检测数据可靠性[13]。

本研究结果显示，时间分辨荧光免疫法用于乙型肝炎患者HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb及HBeAg检测阳性率均明显高于酶联免疫吸附法，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示时间分辨荧光免疫法在提高乙型肝炎患者病毒血清标志物检出敏感性方面优势明显，更具临床应用价值。

综上所述，相较于酶联免疫吸附法，时间分辨荧光免疫法用于乙型肝炎患者可显著提高病毒血清标志物检出阳性率，具有临床应用价值；但鉴于研究入选样本量少、技术人员操作水平等因素制约，所得结论还有待进一步临床试验确证。

[1]段正军，徐杰，田鹏飞.两种方法对比检测乙型肝炎病毒血清标志物[J].检验医学与临床，2007，4（7）：636-637.

[2]张小平，王延青.时间分辨荧光免疫分析技术在HBV-M检测中的应用[J].实用医技杂志，2006，13（12）：2037-2038.

[3]陈瑜，夏宁邵，李兰娟.病毒性肝炎病原学实验室诊断研究进展[J].中华检验医学杂志，2009，32（9）：971-977.

[4]徐杰，段正军，田鹏飞.时间分辨荧光免疫测定技术在乙肝两对半定量检测中的临床意义以及酶联免疫法与时间分辨法的比较分析[J].中国中西医综合临床杂志，2007，2（6）：1024.

[5]龙波，陈铁奇，徐金平.时间分辨荧光免疫分析与酶联免疫吸附分析检测血清甲胎蛋白的比较[J].国际检验医学杂志，2007，28（11）：1041-1042.

[6]丁凤兴.时间分辨荧光免疫技术在乙肝病毒标志物定量检测中的临床应用[J].实用医技杂志，2006，13（22）：3946-3947.

[7]贾继东，李海.HBsAg和HBV e抗原定量检测的临床意义[J].中华检验医学杂志，2009，32（9）：965-966.

[8]李艳霞.时间分辨荧光免疫分析和酶联免疫吸附实验检测乙型肝炎病毒血清标志物结果分析[J].国际检验医学杂志，2011，31（11）：1218-1219.

[9]胡晓燕，吴明辉.重视血清乙肝标志物少见模式的临床意义[J].临床和医药实践杂志，2009，8（8）：127-128.

[10]贾继东，李海.HBsAg和HBV e抗原定量检测的临床意义[J].中华检验医学杂志，2009，32（9）：965-966.

[11]吴正林，何英，叶军，等.电化学发光法和ELISA法检测乙肝血清标志物结果对比分析[J].现代检验医学杂志，2010，25（4）：103-l04.

[12]肖义森，潘国基，徐丽洁，等.TRFIA和ELISA检测乙型肝炎血清学标志物的比较[J].实验与检验医学，2010，28（1）：53-54.

[13]覃小梅，曾显媛，秦丽容.时间分辨荧光免疫法定量检测乙肝病毒血清标志物的临床意义[J].临床和实验医学杂志，2011，10（10）：775-776.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.12.040

:B

:1009-5519（2015）12-1855-02

2015-02-03）

罗惟（1983-），女，四川西昌人，主管检验师，主要从事医学临床检验相关的研究；E-mail：1829029918@qq.com。