冻融胚胎复苏后生长情况和移植数对妊娠率的影响

刘晓景，祁秀娟，吕映频，刘海宁，刘建新，汤秀明

(青岛大学附属医院生殖科，山东 青岛 266003)



冻融胚胎复苏后生长情况和移植数对妊娠率的影响

刘晓景，祁秀娟，吕映频，刘海宁，刘建新，汤秀明

(青岛大学附属医院生殖科，山东 青岛 266003)

目的 探讨冻融胚胎复苏后的生长情况和移植胚胎数对临床妊娠率的影响。方法 选择2012年6月—2013年6月行冻融胚胎移植的病人193例，根据移植胚胎数和进一步生长胚胎个数分组，移植2枚胚胎组(A组)分为A0组(无胚胎生长)、A1组(有1枚胚胎生长)、A2组(有2枚胚胎生长)，移植3枚胚胎组(B组)分为B0组(无胚胎生长)、B1组(有1枚胚胎生长)、B2组(有2枚胚胎生长)、B3组(有3枚胚胎生长)，比较两组间及组内胚胎种植率和妊娠率等。结果 A组胚胎种植率和妊娠率与B组比较差异无显著性(P>0.05)；两组组内种植率和妊娠率比较，差异有显著性(χ2=4.34～4.59，P<0.05)。结论 移植2或3枚胚胎对冻融胚胎移植周期的妊娠结局并无影响，但随着生长胚胎个数的增长，种植率和妊娠率有所增加。因此，可以根据复苏后胚胎生长情况选择胚胎移植，进而提高冻融胚胎移植周期的妊娠率。

胚胎；胚胎移植；妊娠率

自1984年人类第一例冻融胚胎移植(FET)婴儿出生后[1]，FET日趋广泛地应用于临床，已成为人类辅助生殖技术(ART)不可或缺的一部分。它一方面冻存新鲜周期剩余的可用胚胎，另一方面将由于各种因素未能行新鲜周期移植的胚胎进行冻存，之后选择恰当的移植时间进行FET，可以减少反复控制性超促排卵带来的经济负担，减轻病人的痛苦，增加周期的累积妊娠率。本研究对我科收治的193例病人的FET周期进行分析，旨在探讨冷冻移植胚数和胚胎复苏后生长情况对妊娠结局的影响。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料

2012年6月—2013年6月，在青岛大学附属医院生殖科行FET的病人193例，年龄22～38岁。所有胚胎均过夜培养。不孕因素包括输卵管因素、排卵障碍、男方因素、不明原因性不孕等，排除有子宫结构异常、既往有子宫手术史以及子宫内膜异常的病人。根据移植胚胎数目分为A组(移植2枚胚胎)和B组(移植3枚胚胎)两组，再根据两组内移植胚胎复苏后是否生长分为A0组(无胚胎生长)、A1组(有1枚胚胎生长)、A2组(有2枚胚胎生长)和B0组(无胚胎生长)、B1组(有1枚胚胎生长)、B2组(有2枚胚胎生长)、B3组(有3枚胚胎生长)。两组病人组间及组内年龄、不孕类型、不孕年限、胚胎培养时间、移植日内膜厚度比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1～3。

表1 A与B组一般情况比较

表2 A组内各组间一般情况比较

表3 B组内各组间一般情况比较

1.2研究方法

1.2.1冷冻胚胎选择 选择受精后第3天细胞数≥6的胚胎进行冷冻保存。

1.2.2胚胎冷冻与复苏 采用玻璃化冷冻和快速解冻的方法进行胚胎冷冻与复苏。

1.2.3子宫内膜移植前准备 所有FET周期内膜准备方案均为人工周期。于月经周期第2～4天起口服戊酸雌二醇)4～8 mg/d，7～8 d后B超监测子宫内膜厚度,根据内膜厚度调整戊酸雌二醇用量,当内膜的厚度≥0.8 cm时,加用孕激素,4 d后选择胚胎进行移植。

1.2.4妊娠率和种植率的测定 FET后第35天超声检查子宫内见孕囊为临床妊娠,并计算种植率(种植率=孕囊数/移植冻胚总数×100%)、妊娠率(妊娠率=妊娠数/周期总数×100%)和多胎妊娠率(多胎妊娠率=多胎妊娠数/妊娠总数×100%)[2]。

1.3统计学方法

采用SPSS 19.0及PPMS 1.5[3]软件进行统计分析,计数资料结果以率表示， 组间及组内比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有显著性。

2 结 果

2.1移植胚胎个数对妊娠率的影响

A组胚胎复苏率、种植率、妊娠率和多胎妊娠率与B组比较，差异均无显著性(P>0.05)。见表4。

2.2胚胎生长情况对妊娠率的影响

A0、A1和A2组胚胎复苏率比较差异无显著性(P>0.05)；A0组和A1组种植率比较差异无显著性(P>0.05)，妊娠率比较差异有显著性(χ2=4.34，P<0.05)；A0组和A2组种植率和妊娠率比较差异均有显著意义(χ2=8.59、6.99，P<0.05)；A1组和A2组种植率和妊娠率比较差异均无显著意义(P>0.05)。见表5。

B0、B1、B2和B3组胚胎复苏率比较，差异无显著性(P>0.05)；B0组和B1组种植率和妊娠率比较，差异均无显著性(P>0.05)；B0组和B2、B3组种植率和妊娠率比较，差异均有显著意义(χ2=3.98～13.58，P<0.01)；B1组和B2组种植率和妊娠率比较，差异均无显著性(P>0.05)；B1组和B3组种植率和妊娠率比较，差异均有显著性(χ2=8.25、7.77，P<0.01)；B2组和B3组种植率比较，差异有显著性(χ2=4.59，P<0.05)，妊娠率比较差异无显著性(P>0.05)。见表6。

表4 A与B组胚胎复苏率、种植率和妊娠率比较(χ/%)

表5 A组组内胚胎复苏率、种植率和妊娠率比较(χ/%)

表6 B组组内胚胎复苏率、种植率和妊娠率比较(χ/%)

组别n复苏率种植率妊娠率B0组2194.13.29.5B1组2297.17.618.2B2组3395.213.133.3B3组2098.426.760.0

3 讨 论

ART的迅速发展使其成为治疗不孕症的重要手段之一，FET是ART的重要组成部分，可以预防控制性超促排卵过程中卵巢过度刺激综合征的发生，减轻鲜胚移植病人的精神压力，降低经济负担，增加累积妊娠率。因此，如何提高FET周期的妊娠率尤为重要。

影响FET的因素包括病人的年龄、子宫内膜容受性、子宫内膜与胚胎同步性以及胚胎质量等。本研究结果显示，移植2枚胚胎与移植3枚胚胎的妊娠结局无明显差异。刘军霞等[4]的研究结果显示，移植2枚胚胎与移植3枚胚胎的妊娠率差异无显著性，但与胚胎质量有关。宋韬等[5]的研究显示，移植胚胎数量、质量与FET周期的妊娠率和多胎妊娠率之间关系密切。JOSHI等[6]研究结果显示，在胚胎质量相同情况下移植3枚胚胎的妊娠率显著高于移植2枚胚胎。龚绍琼[7]研究认为，胚胎的冷冻和复苏可能会造成部分卵裂球坏死，卵裂球的坏死可直接减少移植时胚胎的细胞数，同时坏死的卵裂球会释放有害物质间接影响胚胎的发育潜能，进而影响FET周期的妊娠率。RIENZI等[8]的研究结果表明，去除坏死的卵裂球，可以提高FET周期的妊娠率。而ALIKANI等[9]的研究结果显示，通过显微操作将鼠胚胎中的部分卵裂球损伤后，囊胚孵出率明显降低。陆湘等[10]的研究结果也显示，冻融胚胎复苏后部分卵裂球有破损的胚胎，若培养后能继续生长，种植率仍较高，提示部分卵裂球破损的胚胎仍有种植潜能。本研究在排除年龄、子宫内膜以及胚胎质量等因素的情况下，观察了胚胎复苏后胚胎生长情况对临床妊娠率的影响，研究结果显示，随着有生长的胚胎数目的增多，种植率和妊娠率均明显增高。VAN DENELST等[11]的研究提示，冻融胚胎复苏后卵裂球进一步生长可能使着床时胚胎与子宫内膜更同步。此外，LAVERGE等[12]对60个冻融胚胎复苏后卵裂球未生长的胚胎进行针对X、Y和1号染色体的荧光原位杂交显示，这种胚胎常常伴有染色体异常，如单倍体、多倍体、非整倍体甚至是嵌合体的发生，其中仅仅20%左右的胚胎染色体正常，因此，可推断即使是这种胚胎着床了,由于染色体异常大多数也会发生早期流产。因此，建议FET周期中选择移植复苏后有进一步生长的胚胎。

综上所述,移植2或3枚胚胎对冻融胚胎移植周期的妊娠结局并无影响，但随着生长胚胎个数的增多，种植率和妊娠率有所增加。因此，可以根据复苏后胚胎生长情况选择胚胎移植，进而提高冻融胚胎移植周期的妊娠率。

[1] ZEILMAKER G H, ALBERDA A T, VAN GENT I, et al. Two pregnancies following transfer of intact frozen-thawed embryos[J]. Fertil Steril, 1984,42(2):293-296.

[2] 赵频,祁秀娟,汤秀明,等. 不同促性腺激素促排卵对IVF-ET结局的影响[J]. 齐鲁医学杂志, 2012,27(2):133-135,138.

[3] 周晓彬. 医用统计学软件PPMS 1.5在医学科学研究中的应用价值[J]. 青岛大学医学院学报, 2011,47(6):504-506.

[4] 刘军霞,韩伟,张孝东,等. 影响冻融胚胎临床结局的因素分析[J]. 中国优生与遗传杂志, 2012,20(1):94-96.

[5] 宋韬,周枫,刘柳,等. 冻融胚胎移植周期最佳胚胎移植策略的研究[J]. 中华医学杂志, 2009,89(31):2188-2191.

[6] JOSHI B V, BANKER M R, PATEL P M, et al. Transfer of human frozen-thawed embryos with further cleavage during culture increases pregnancy rates[J]. J Hum Reprod Sci, 2010,3(2):76-79.

[7] 龚绍琼. 移植复苏后进一步卵裂胚胎可提高冻融胚胎移植临床妊娠率[J]. 现代医院, 2012,12(7):11-13.

[8] RIENZI L, UBALDI F, IACOBELLI M, et al. Developmental potential of fully intact and partially damaged cryopreserved embryos after laser-assisted removal of necrotic blastomeres and post-thaw culture selection[J]. Fertil Steril, 2005,84(4):888-894.

[9] ALIKANI M, OLIVENNES F, COHEN J. Microsurgical correction of partially degenerate mouse embryos promotes hat-ching and restores their viability[J]. Hum Reprod, 1993,8(10):1723-1728.

[10]陆湘,李路,高晓红,等. 卵裂球的完整性和生长与否对冻融胚胎移植妊娠结局的影响[J]. 生殖与避孕, 2007,27(8):518-521.

[11]VAN DER ELST J, VAN DEN ABBEEL E, VITRIER S, et al. Selective transfer of cryopreserved human embryos with further cleavage after thawing increases delivery and implantation rates[J]. Hum Reprod, 1997,12(7):1513-1521.

[12]LAVERGE H, VAN DER ELST J, DE SUTTER P, et al. Fluorescent in-situ hybridization on human embryos showing cleavage arrest after freezing and thawing[J]. Hum Reprod, 1998,13(2):425-429.

(本文编辑 厉建强)

THE INFLUENCE OF EMBRYO CONDITION AFTER RESUSCITATION OF FROZEN EMBRYO TRANSFER ON PREGNANCY RATE

LIUXiaojing,QIXiujuan,LÜYingpin,LIUHaining,LIUJianxin,TANGXiuming

(Reproductive Branch, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo investigate the influence of embryo condition after resuscitation and transplanted embryonic number on clinical pregnancy rate.MethodsAn analysis of 193 cases of frozen embryo transfer cycles was done. All were divi-ded into groups according to the number of transferred embryo and the further growth condition of resuscitated embryo. Two-embryo array (group A) was divided into group A0(none growth embryo), group A1(one growth embryo), group A2(two growth embryos), and three-embryo array (B group) was divided into group B0(none growth embryo), group B1(one growth embryo), group B2(two growth embryos) and group B3(three growth embryos), the implantation rate, pregnancy rate and other indicators were compared among them.ResultsThe difference of embryo implantation rate and clinical pregnancy rate between group A and group B was not significant (P>0.05). The differences within each group of groups A and B were significant in regard to implantation and clinical pregnancy rate (χ2=4.34-4.59,P<0.05).ConclusionTwo-or three-embryo transfer does not affect the clinical pregnancy rate of frozen embryo transfer cycle. But with the growing number of embryo, the implantation rate and clinical pregnancy rate increase, and, thus, the choice of embryo transfer can be made according to the growth of the embryo after resuscitation so as to increase the pregnancy rate of frozen embryo transfer cycle.

embryo; embryo transfer; pregnancy rate

2014-06-26;

2014-10-16

刘晓景(1988-)，女，硕士研究生。

祁秀娟(1963-)，女，硕士，主任医师，硕士生导师。

R715.2

A

1008-0341(2015)02-0161-03