移植早期卵裂胚胎对IVF-ET妊娠结局的影响研究

金良

移植早期卵裂胚胎对IVF-ET妊娠结局的影响研究

金良

早期卵裂胚胎；体外受精-胚胎移植；临床妊娠率

高质量、具有发育潜能的受精卵是体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）治疗周期成功的先决条件之一。如何选择出这样的受精卵是辅助生殖技术领域研究的重点。对胚胎早期卵裂情况进行观察早在2001年即被认为是选择卵裂第3天（D3）移植胚胎的有效方法。Fisch等[1]在 2003年提出了改进的胚胎评分标准（GES），首次将早期卵裂的观察方法系统地应用于胚胎评分中，以此预测胚胎的发育潜力，在D3选择出最优秀的胚胎进行移植，并得到了较好的结果。本文回顾性分析本中心2127个鲜胚周期移植的胚胎质量情况，分析移植早期卵裂胚胎对IVF-ET妊娠结局的影响，探讨观察胚胎早期卵裂情况是否能够有效指导临床，得到较高的妊娠率。

1 资料与方法

1.1 研究对象 本研究对象包括2012年8月—2014年1月期间在本中心进行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）和胞浆内单精子注射（ICSI）共2127个周期鲜胚移植的不孕症患者。异常受精的卵母细胞（多原核或单原核）和取卵失败以及取消移植的周期，均未纳入本研究。

1.2 方 法

1.2.1 超促排卵 采用本生殖中心常规超排卵方案，当主导卵泡直径达18mm时，肌注人绒毛膜促性腺激素（hCG）5000～10 000U，36h后经阴道B超介导下取卵。

1.2.2 授精、早期卵裂观察 取卵后培养3～5h（HCG注射39～41h）后根据指征进行常规体外授精（IVF）或胞浆内单精子注射（ICSI），授精后18～20h观察受精情况，观察到2PN为正常受精。将正常受精的卵子转移至微滴单独培养，于取卵后26～28h观察记录微滴内受精卵的早期卵裂现象。卵裂良好评估标准：两个卵裂球大小均匀，相差＜20%，无碎片或碎片较少，无多核现象。直接分裂成≥3细胞的胚胎染色体异常可能大者，也应标记注明，避免移植。

1.2.3 胚胎选择和移植移植后处理 取卵后第3天进行胚胎移植。于取卵后67～69h进行胚胎评级，根据临床方案挑选相应个数胚胎进行移植。年龄＜35岁，最多移植2个胚胎，年龄≥35岁，或治疗2个周期以上的，最多可移植3个胚胎。依照伊斯坦布尔共识进行胚胎评级，标准如下：I级胚胎：细胞数7～9个，大小均匀，碎片＜10%，无多核现象；II级胚胎：细胞数6～9个，大小基本均匀，碎片10%～25%，无多核现象；III级胚胎：细胞数＜6个或＞9个，碎片＞25%，或有多核现象；其中I级、II级胚胎定义为优质胚胎。同等质量胚胎中，优先选择有早期卵裂的胚胎进行移植。移植后予黄体酮或HCG维持黄体水平。于移植后2周检测血HCG，阳性者为成功种植，记录胚胎种植率。移植后4～5周行B超检查妊娠囊数和胎心搏动，以妊娠囊内见到胚芽和原始心管搏动判为临床妊娠，仅有1个妊娠囊为单胎妊娠，有2个或以上妊娠囊为多胎妊娠。

1.3 统计学方法 使用SPSS13.0软件进行统计分析，采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

共统计2127个鲜胚周期，4898个移植胚胎，其中早期卵裂组780周期，无早期卵裂组1347周期，两组移植患者在平均年龄、不孕年数、平均取卵个数及移植胚胎个数上组间差异均无统计学意义（P＞0.05），见表1。相比无早期卵裂组，移植有早期卵裂胚胎获得了较高的临床妊娠率，差异有统计学意义（P＜0.01）；在种植率上早期卵裂组稍高于无早期卵裂组，但差异无统计学意义（P＞0.05）；早期卵裂组多胎率也高于无早期卵裂组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。两组卵子受精率和优质胚胎率差异无统计学意义（P＞0.05）。

具体统计有早期卵裂组880例移植胚胎中早期卵裂胚胎个数发现，移植1个早期卵裂胚胎者临床妊娠率显著低于移植2个早期卵裂胚胎者（52.62% VS 61.04%）（P＜0.05），也低于与移植3个早期卵裂胚胎者的57.69%，但差异无统计学意义（P＞0.05）；移植早期卵裂胚胎数与妊娠结果及多胎数关系见表3。

表1 两组基本情况比较（±s）

表1 两组基本情况比较（±s）

组别早期卵裂组无早期卵裂组例数780 1347平均年龄（岁）32.43±3.41 32.78±3.33平均不孕时间（年）3.63±1.67 3.78±1.34平均取卵数（个）11.89±2.32 10.78±3.07平均移植胚胎数（个）2.03±0.24 2.11±0.32

表2 移植早期卵裂胚胎与胚胎发育及妊娠结局的比较（%）

表3 移植早期卵裂胚胎个数与妊娠结局关系［例（%）］

3 讨论

辅助生殖技术发展的方向在于提高临床妊娠率的同时降低多胎的发生，选择移植具有发育潜能的胚胎是关键。胚胎发育是一个动态过程，受精卵的形态、胚胎形态、发育速度都是相对独立又密切相关，虽然静态评估某一阶段的形态不能准确地预测胚胎进一步发育的潜能，但Van Montfoort等[2]发现，早期卵裂胚胎的囊胚形成率显著高于非早期卵裂胚，并且选择性早期卵裂单胚胎移植临床妊娠率显著高于非早期卵裂胚，认为早期卵裂是影响妊娠率和囊胚形成率的一个独立因素，本研究的统计结果也证实了移植早期卵裂胚胎能够获得更高的临床妊娠率、种植率和多胎率。此外，方丛等[3]观察了移植早期卵裂胚胎对IVF-ET结局的影响，认为移植早期卵裂胚胎可以提高IVF-ET成功率，并随着移植早期卵裂胚胎数量的增加，妊娠率、多胎妊娠率均有增高趋势。本研究也得出了同样的结论，植入有2～3个早期卵裂胚胎者较植入仅有1个早期卵裂胚胎者有更高的临床妊娠率及多胎率，提示植入有早期卵裂胚胎作为筛选胚胎的一个参数，可以有效提高临床妊娠率[4]，同时根据调整植入早期卵裂的优质胚胎数量可以为临床降低多胎妊娠提供有效的参考[5]，以期达到单胚胎移植的目的。

总之，胚胎早期卵裂的观察可以有效预见胚胎的发育潜力，同时排除一些首次分裂＞2个细胞的异常胚胎，当然在挑选植入胚胎时有无早期卵裂不能作为单独标准，还应结合D3胚胎细胞数目及碎片比例等综合因素[6]。本研究中早期卵裂组种植率虽然稍高于无早期卵裂组，但无显著差异，证实决定临床种植率最具实际意义的指标仍然是优质胚胎。因此，作为辅助标准，在同等质量胚胎中优先挑选有早期卵裂的胚胎进行移植，对提高临床植入率有重要意义，加之观察早期卵裂方法快速、简便，不受观察者主观影响，非侵入性[7]，易于实施，作为辅助生殖技术实验室常规步骤，在IVF-ET治疗中有较好应用价值。

［1］Fisch JD，Sher G，Adamoviczm，et al.The graduated embryo Score predicts the outcome of assisted reproductive technologies better than a single day 3 evaluation and achieves results associated with blastocyst transfer from day 3 embryo transfer［J］.Fertil Steril，2003，80：1352-1358.

［2］ Van Montfoort AP，Dumoulin JC，Kester AD，et al.Early cleavage is a valuable addition to existing embryo selection parameters：a study using single embryo transfers［J］.Hum Reprod，2004，19（9）：2103-2108.

［3］方丛，庄广伦，钟依平，等.移植人类早期卵裂胚胎对1VFET结局的影响［J］.中山大学学报（医学科学版），2004，25（3）：99-100.

［4］刁英，杨智敏，谭兵兵.观察早期卵裂和原核消失在体外受精-胚胎移植周期中的应用价值［J］.中国计划生育学杂志，2008，10（156）：618-620.

［5］贺平，刘海鹏，彭妹明，等.移植早期卵裂胚胎对促性腺激素释放激素拮抗剂方案结局影响分析［J］.生殖医学杂志2014，23（1）：20-23.

［6］谭兵兵，杨智敏，刁英.早期卵裂与胚胎形态学和生长速率联合评分预测胚胎发育潜能［J］.中国妇幼保健，2007，22：2670-2672.

［7］王娴静.早期原核分裂对于胚胎发育潜能预测的研究［J］.同济大学学报（医学版），2013，34（1）：77-80.

（收稿：2014-12-19 修回：2015-02-15）

浙江大学医学院附属妇产科医院生殖中心（杭州 310000）

金良，Tel：13868027272