丙型肝炎病毒感染者病毒载量与血脂代谢指标的相关性分析

宋培新, 李　雷, 陶　月, 董必晟, 郑　楠

(1. 南京大学医学院附属鼓楼医院, 江苏 南京, 210008;

2. 南京大学医学院 公共健康研究中心, 江苏 南京, 210093)

丙型肝炎病毒感染者病毒载量与血脂代谢指标的相关性分析

宋培新1, 李雷1, 陶月1, 董必晟2, 郑楠2

(1. 南京大学医学院附属鼓楼医院, 江苏 南京, 210008;

2. 南京大学医学院 公共健康研究中心, 江苏 南京, 210093)

摘要:目的探讨丙型肝炎病毒感染者血脂代谢状况及与外周血病毒载量的相关性。方法75例丙型肝炎病毒感染者分为HCV RNA高复制组、低复制组及阴性组。利用荧光定量PCR方法检测外周血HCV RNA水平，应用全自动生化分析仪检测患者TG、CHO、ApoA1、ApoB、HDL-C、LDL-C等血脂代谢指标。结果 甘油三酯(TG)、脂蛋白ApoB和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)在HCV RNA阴性组和高复制组有显著差异，上述3个指标均与HCV RNA呈正相关。结论慢性丙型肝炎病毒感染伴随着TG、ApoB、LDL-C水平的上升，且与病毒载量呈正相关关系，并提示通过有效的抗病毒治疗可能有助于血脂代谢紊乱的纠正。

关键词:丙型肝炎病毒; 血脂指标; 相关性

Analysis in correlation between serum hepatitis

C virus load and lipid metabolic components in

慢性丙型肝炎是一个具有全球影响的公共健康问题，共感染了约1.7亿人，是肝硬化及原发性肝癌的常见病因之一。由于缺乏有效的疫苗，其感染趋势未得到有效控制。通过抗病毒治疗虽然可以延缓部分患者的病情进展，但目前治疗方法单一，主要给予α干扰素及利巴韦林治疗，副作用较大，且治疗费用高昂，部分患者由于不能承受而终止治疗。虽然近年来在丙型肝炎的抗病毒治疗方面取得了一些进展，如蛋白酶抑制剂，仍然存在上述的问题。近年来部分学者观察到慢性丙型肝炎患者存在脂代谢紊乱的现象，并可增加心血管事件的发生率。作者认为由于LDL、ApoB等血脂代谢指标自身受到患者年龄、性别等诸多因素影响，故本研究采用设置年龄、性别等干扰因素分布特征相同的对照组进行对比研究，以进一步明确慢性丙型肝炎患者血脂代谢指标与病毒载量的相关性[1]。

1资料与方法

1.1　研究对象

收集2012年1月—2013年12月就诊南京大学医学院附属鼓楼医院的慢性HCV感染者，诊断标准符合2010年中华医学会肝病学分会公布的《丙型肝炎防治指南》[1]。本研究均选择40周岁以下、未给予抗病毒治疗且无其他慢性基础病患者。研究对象共分为3组，分别是HCV RNA阴性组(抗HCV阳性)，HCV低复制组(HCV RNA 103～105copies/mL)，HCV高复制组(HCV RNA >105copies/mL)。标本量分别为25例、24例、26例，平均年龄分别为(31.5±4.6)岁、(32.3±3.2)岁、(34.7±5.8)岁，性别构成(男/女)分别为13/12、13/11、12/14。

1.2　方法

HCV抗体检测：北京万泰生物药业股份有限公司的丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒，检测步骤及阳性判别标准参照产品说明书。检测仪器为Tecan Freedom全自动酶免分析一体机。

HCV RNA定量检测：采用中山大学达安基因股份有限公司的丙型肝炎病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)，检测仪器为Agilment Technologies公司的Stratagene Mx3000P。既往研究[2]曾取HCV RNA>107copies/mL为高复制组，但本院HCV RNA定量检测结果中HCV RNA>107copies/mL占阳性结果的比例仅为5%～6%，故本研究以105copies/mL划分为低复制组和高复制组。

生化分析：检测仪器为Beckman Coulter全自动生化分析仪，检测指标包括甘油三酯

(TG)、胆固醇(CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A1(ApoA1)、载脂蛋白B(ApoB)。

1.3　统计学处理

采用SPSS17.0统计软件进行数据的统计分析。计量数据采用均数±标准差表示, 多组间均数的多重比较采用单因素方差分析及最小显著差异LSD-t检验，对LSD-t检验有显著性差异的指标再进行Dunnett-t检验进一步验证，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

3组血脂指标的描述性统计结果见表1～3。

表1　3组人群血脂指标比较

表2　3组血脂指标单因素方差分析最小显著差异LSD-t检验的多重比较结果

组1、组2、组3分别代表HCV RNA阴性组、低复制组和高复制组，*P<0.05。

表3　3组患者TG、ApoB、HDL-C、LDL-C水平

组1、组2、组3分别代表HCV RNA阴性组、

低复制组和高复制组，*P<0.05。

对HCV RNA阳性患者(包括低复制组和高复制组)的TG、ApoB、LDL-C等指标与HCV RNA定量log值进行Pearson相关分析，其相关系数及显著性结果见表4。

表4　TG、ApoB、LDL-C与HCV RNA定量的相关性分析

*P<0.05，**P<0.01。

3结论

近年来，关于慢性丙型肝炎和脂代谢的研究吸引了较多学者的关注，其内容主要集中于以下3个方面: ① 第一个方面是关于载脂蛋白参与丙型肝炎病毒感染肝细胞的生命周期的机制研究。和其他黄病毒成员一样，丙肝病毒在外周血中主要以与低密度脂蛋白(LDL)结合的方式存在，LDL在病毒入侵过程中与肝细胞表面的LDL受体结合，从而起到了辅助受体的作用[3]。Sabina W等通过实验发现LDL主要与HCV的包膜糖蛋白E2结合，并促进了病毒入胞，该组学者还通过临床样本的对照研究发现，慢性HCV感染者的血清游离LDL水平显著低于未感染者[4]。除了最早发现的LDL外，Carmine M等[5]通过蛋白质组学方法，发现载脂蛋白ApoA1也参与了HCV的生命周期。该研究首先发现HCV感染者外周血LDL中的ApoA1明显下降，进一步的HCVcc感染细胞模型发现HCV的非结构蛋白可以诱导ApoA1发生结构性修饰。此外，通过小干扰RNA方法(siRNA)下调细胞内ApoA1的表达可减少培养上清中病毒颗粒和HCV RNA拷贝数的数量; ② 第二个方面，HCV在肝细胞复制、包装过程中可以引起细胞内脂质代谢的显著异常。Castera L等[6]研究发现HCV感染者的肝细胞存在普遍的脂肪变性。Andreas M等[7]将经过修饰的毒株Jc1E2FLAG感染Huh7.5细胞，产生了具有感染性的病毒颗粒，成分分析发现其脂质成分中主要为VLDL和LDL，这与在感染HCV之前宿主细胞内自身的脂质成分有很大不同，提示肝细胞内脂蛋白的合成代谢受到了显著的干扰。有趣的是，有学者[8-9]研究发现，他汀类药物可以降低慢性丙型肝炎病人外周血中HCV RNA的含量，具体机制尚不明确，推测可能与他汀类药物调节肝细胞脂质代谢有关; ③ 第三个方面，近年来曾有学者分析了慢性丙型肝炎患者外周血脂类代谢指标以及与病毒载量和肝细胞损伤之间的关系。如中国学者李蕴铷等[2]发现外周血HCV病毒载量与LDL、ApoB的水平呈负相关，与TG、CHO、HDL、ApoA1等其他指标关联性不大，巩雪俐等[10]研究结果与其类似。

尽管关于丙肝病毒感染引起宿主脂质代谢异常的现象已经在临床和基础研究中被广泛观察到，但是各种脂类成分在HCV感染中所起的作用和其在被感染者外周血中的水平变化仍存在较多争议。如前所述，LDL既可以作为HCV病毒颗粒入胞辅助受体的配体促进病毒感染细胞的过程，又可以与HCV入胞进行竞争从而干扰其感染过程[11]。除了LDL外，HDL中的主要脂蛋白成分ApoA1也在HCV的复制过程中发挥着重要的作用。这种机制上的复杂现象就给HCV感染者外周血脂类代谢指标的变化带来了较多的影响因素。比如国内的相关研究发现，慢性丙型肝炎患者外周血HCV RNA水平越高，其LDL和ApoB的水平越低，这与本文作者在临床上的观察和一些基础研究的结果存在矛盾，如Castera L等发现肝细胞中产生的HCV病毒颗粒中含有大量的VLDL和LDL成分，从这一方面考虑，当外周血HCV RNA显著升高时，LDL及其主要的脂蛋白成分ApoB的水平可能也会出现相应的升高。

由于脂质代谢状况受到患者年龄、性别、有无高血压、糖尿病等基础疾病以及是否饮酒等诸多因素有关，因此给从临床上观察HCV感染者脂质代谢指标的变化规律带了许多感染，因此很容易得出不稳定的观察结果。本研究为了排除上述的一些常见感染因素，选择了没有其他基础疾病、年龄构成比相似的较年轻人群(所有入选者均小于40岁)作为研究对象，来观察HCV病毒水平与脂质代谢状况的关系，并同时设计了多种统计方法以加强研究结果的可靠性。

本研究结果显示，在血脂指标受其他因素干扰较少的HCV感染的年轻人群中，通过LSD-t和Dunnett-t检验发现甘油三酯(TG)、脂蛋白ApoB和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)等三个指标在HCV RNA阴性组和高复制组间有显著统计学差异，但在阴性组和低复制组，以及低复制组和高复制组间差异不显著，此结果提示TG、ApoB、LDL-C的水平与HCV RNA的水平存在显著关联性。为进一步明确两者的相关关系，直线回归分析结果提示上述3个指标均与HCV RNA呈正相关关系，其中LDL-C与HCV RNA滴度的相关系数最高(r=0.624,P<0.001)。对上述指标统计结果的理论解释如下: ① 跟大部分其他病毒不同，丙肝病毒在外周血中的存在及循环形式是与脂蛋白结合、形成病毒-脂蛋白颗粒(LVP), 结合的脂蛋白主要为低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)，在LDL和VLDL中以ApoB和TG为主要成分。因此，可以解释当外周血中存在高滴度病毒时伴随LDL-C、ApoB、TG水平明显上升; ② 在与HCV RNA水平存在相关关系的3个指标中，以LDL-C的相关系数最高，而ApoB的相关系数明显弱于LDL-C，提示在LDL-C中除了ApoB可能还存在其他脂蛋白成分如ApoE参与了病毒-脂蛋白颗粒形成，这与 Bridge.S等[12]的研究结果一致。

既往研究已明确, LDL-C、ApoB、TG等血脂代谢指标的升高是心血管疾病及代谢疾病的危险因素，同时一系列研究也观察到，慢性丙型肝炎患者的代谢性疾病如代谢综合征、脂肪肝等发病率显著上升。本研究发现在慢性丙肝疾病进展过程中，监测并控制LDL-C、ApoB、TG等血脂指标非常重要，并提示通过有效的抗病毒治疗可能有助于纠正慢性丙型肝炎患者血脂代谢异常。

参考文献

[1]中华医学会肝病学分会, 中华医学会传染病与寄生虫病学分会. 丙型肝炎防治指南[J]. 中华内科杂志, 2004, 43(7): 551.

[2]李蕴铷, 凌伟, 陈凤欣, 等. 慢性丙型肝炎患者脂类代谢与丙型肝炎病毒复制以及肝脏病理的关系[J]. 世界华人消化杂志, 2010, 18(17): 1820.

[3]Victoria C. Edwards, Alexander W. Tarr, Richard A, et al. The role of neutralizing antibodies in hepatitis C virus infection[J]. J. General Virology, 2012, 93: 1.

[4]Sabina Wunschmann, Hubert M. Muller, Christopher S. Stipp, et al. In Vitro Interaction between Hepatitis C Virus(HCV) Envelope Glycoprotein E2 and SerumLipoproteins (LPs) Results in Enhanced CellularBinding of Both HCV E2 and LPs[J]. J Infectious Disease, 2006, 194: 1058.

[5]Carmine Mancone,Corinna Steindler, Laura Santangelo, et al. Hepatitis C virus production requires apolipoprotein A-I and affects its association with nascent low-density lipoproteins[J]. Gut, 2011, 60: 378.

[6]Castera L, Chouteau P, Hezode C, et al. Hepatitis C virus-induced hepatocellular steatosis[J]. Am J Gastroenterol, 2005, 100: 711.

[7]Andreas Merz, Gang Long, Marie-SophieHiet, et al. Biochemical and Morphological Propertiesof Hepatitis C Virus Particles andDetermination of Their Lipidome [J]. J Biological chemistry, 2011, 286: 3018.

[8]潘闻, 鲍旭丽, 王金环, 等. 氟伐他汀对合并高胆固醇血症的慢性丙型肝炎的抗病毒疗效的影响[J]. 中华临床医师杂志: 电子版, 2013, 7(18): 8206.

[9]魏显招, 祁敏, 郭惠. 他汀类药物治疗丙型肝炎的研究进展[J]. 国际病毒学杂志, 2009, 16(6): 179.

[10]巩雪俐, 张前, 凌伟, 等. 慢性丙型肝炎患者伴发代谢综合征的危险因素[J]. 中国肝脏病杂志: 电子版, 2010, 2(1): 10.

[11]Michela E. Burlone, Agata Budkowska. Hepatitis C virus cell entry: role of lipoproteins and cellular receptors[J]. Journal of General Virology, 2009, 90: 1055.

chronic hepatitis C patients

SONG Peixin1, LI Lei1, TAO Yue1, DONG Bisheng2, ZHENG Nan2

1.NanjingDrumTowerHospitalAffiliatedtoMedicalCollegeofNanjingUniversity,

Nanjing,Jiangsu, 210008;2.CenterofPublicHealthResearch,MedicalCollegeofNanjing

University,Nanjing,Jiangsu, 210093

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the correlation between lipid metabolism status and serum viral load in chronic hepatitis C patients. Methods A total of 75 HCV infected patients were divided into three group, including high level of viral replication group, lower level of viral replication group and HCV RNA negative group. Serum HCV level was measured by real-time quantitative PCR, and lipid metabolic components were detected by biochemistry auto-analyzer. ResultsThe levels of triglyceridemia(TG),apolipoprotein B(Apo B)and low density lipoprotein-cholesterol(LDL-C)had significant differences between HCV RNA negative group and high level of viral replication group, and these three indicators were positively correlated with HCV RNA. ConclusionThe levels of TG, ApoB and LDL-C are elevated in chronic hepatitis C patients, and have a positive relationship with serum viral load, which suggesting that anti-viral therapy would probably correct the disorder of lipid metabolism of hepatitis C patients.

KEYWORDS:hepatitis C; lipid metabolic component; relationship

通信作者:郑楠, E-mail:nanzheng@nju.edu.cn

基金项目:江苏省自然科学基金(BK2013059); 南京大学博士点基金(2013009112)

收稿日期:2015-03-03

中图分类号:R 512.6

文献标志码:A

文章编号:1672-2353(2015)11-032-04

DOI:10.7619/jcmp.201511010