双参活血胶囊中药成分鉴定与丹参酮ⅡA的测定

于天蔚

(河北省唐山市中医医院药剂科，河北 唐山 063000)

近年来，随着科学技术的发展及新的检验设备应用，尤其是高效液相色谱(HPLC)仪在药品检验方面的推广，提高了实验室的检测水平［1］。HPLC具有快速、灵敏的特点，能同时进行定性及定量的测定。中成药的检测较之西药更具有一定的难度与复杂性，特别是复方制剂［2］。双参活血胶囊为研发自制药，主要成分为人参、丹参及益母草。为了确保药品质量，本研究通过对其中人参、丹参及益母草采用薄层色谱(TLC)法对其进行鉴别，并采用HPLC法测定双参活血胶囊中丹参酮ⅡA的含量，结果如下。

1 材料

1.1 仪器 美国Waters公司2690 HPLC仪、双通道2487紫外检测器及Millennium32色谱数据工作站;日本岛津公司UV2401型紫外-可见分光光度计、CTO-10ASVP柱温箱及SPD-10Avp型紫外检测器;美国G1311A Agilent四元泵及G13222-脱气机;北京瑞邦兴业科技有限公司KQ-250DE台式数控超声波清洗器;上海天平仪器厂TG-332A微量天平。

1.2 药品及试剂 双参活血胶囊，中国药品生物检定所提供，批号:766200213;人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、丹参酮ⅡA、盐酸小苏碱及色谱纯，上海豪申化学试剂有限公司;灭菌蒸馏水，安徽双鹤药业有限责任公司;甲纯为色谱纯，其余均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参酮ⅡA的测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil G18(4.6 mm ×200.0 mm，10 μm);流动相:甲醇 - 水(80∶20);柱温:30℃;流量:1.0 mL/min;检测波长:268 nm;进样量:20 μL［3-4］。

2.1.2 溶液制备 双参活血胶囊内容物，研细，精密称取1 g置于50 mL容量瓶中，加入25 mL甲醇，超声处理15 min，摇匀，过滤，制成供试品溶液。另按处方比例称取处方量的人参及益母草等除丹参以外的药材，同工艺、同方法制成阴性对照品溶液。

2.1.3 制备标准曲线 首先取4 mg丹参酮ⅡA，置于10 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解并定容为0.40 mg/mL的对照品溶液，分别取 0.6、0.5、0.4、0.3、0.2 mL 的0.40 mg/mL对照品溶液置于10 mL容量瓶中，分别加入甲醇定容，摇匀后以0.45 μm微孔滤膜过滤，分别取20 μL进样。按样品处理标准操作，制备标准曲线，以待测物浓度C为纵坐标，待测物峰面积A为横坐标，回归方程:Y=1.424 ×105+4.107 ×104(r2=0.999 40)。计算出浓度为0.08 ～0.24 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

2.1.4 干扰试验 分别精密吸取20 μL丹参酮ⅡA对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，进样，测定。结果在供试品溶液色谱及对照品溶液色谱相应位置均有一保留时间相同的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间内无干扰。

2.1.5 精密度试验 精密吸取 20 μL 0.24 μg/mL 的丹参酮ⅡA对照品溶液，进样测定5次。测定结果相对标准差(RSD)=0.65%。

2.1.6 稳定性试验 首先取在室温下保存的丹参酮ⅡA 0.40 mg/mL 对照品溶液分别在第1、2、4、6、8 h 进样测定，测定结果显示丹参酮ⅡA峰面积的RSD为0.7%，显示该方法具有较好的稳定性。

2.1.7 重复性试验 取同一样品，精密称取5份，按1.3.2项方法制成供试品溶液，重复进样5次，平均每份含丹参酮ⅡA 0.220 g，RSD=0.56%。

2.1.8 样品含量测定 精密称取5份双参活血胶囊各1 g按 1.3.2 项方法制成供试品溶液，吸取 20 μL 24 μg/mL丹参酮ⅡA对照品溶液及供试品溶液，进样，分别对丹参酮ⅡA的峰面积进行测定，并用外标法对测定结果的含量进行计算，含量分别为 0.218、0.217、0.216、0.212、0.210 mg。

2.1.9 加样回收率实验 取5份已测含量的丹参酮ⅡA，分别加入丹参酮ⅡA 0.40 mg/mL对照品溶液，对回收率进行测定。样品测定丹参酮ⅡA平均回收率为97.6%，DRS=1.05%，符合规定。见表1。

表1 5份已测含量的丹参酮ⅡA加样回收率测定结果

2.2 中药成份鉴定

2.2.1 人参的鉴定

2.2.1.1 溶液制备 取双参活血胶囊10粒研匀，加乙醚30 mL，超声处理10 min后常规过滤，加入50 mL水饱和的正丁醇，超声处理30 min后过滤，加入0.5%氢氧化钠溶液洗涤后，将0.5%氢氧化钠溶液弃去，加入水饱和的正丁醇水洗至中性。取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。同时按照上述供试品溶液制备方法，精密称取人参1 g，制成对照药材溶液;另取人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1加入甲醇配制为1 mg/mL的混合对照品溶液。根据双参活血胶囊处方比例，称取丹参、益母草等除人参以外的药材，同工艺制成阴性成品，按照上述方法制备阴性对照溶液。

2.2.1.2 鉴定方法 分别吸取上述不同溶液各4～6 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以13∶7∶2的三氯甲烷-甲醇-水于10℃以下放置12 h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，双参活血胶囊各供试品在与对照品色谱相应的位置上，颜色斑点相同，在此位置上阴性对照无斑点显示(见图1)。

2.2.2 丹参的鉴定

2.2.2.1 溶液制备 取双参活血胶囊10粒研匀，加乙醚40 mL，超声处理30 min后常规过滤，残渣加乙酸乙酯1 mL溶解，作为供试品溶液。精密称取丹参1 g，加入75%乙醇30 mL，加热回流1 h，过滤并蒸干滤液，残渣加热水10 mL溶解，稀盐酸调节pH至2，后用乙醚振摇提取并合并乙醚液，蒸干，加入乙酸乙酯使残渣溶解，作为对照药材溶液。取丹参酮ⅡA对照品，加乙酸乙酯制成1 mg/mL的对照品溶液。根据双参活血胶囊处方比例，称取人参、益母草等除丹参以外的药材，同工艺制成阴性成品，按照上述方法制备阴性对照溶液。

2.2.2.2 鉴定方法 分别吸取上述不同溶液各10～15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，双参活血胶囊各供试品在与对照品色谱相应的位置上，颜色斑点相同，在此位置上阴性对照无斑点显示(见图1)。

2.2.3 益母草的鉴定

2.2.3.1 溶液制备 取双参活血胶囊30粒研匀，加80%乙醇50 mL，加热回流l h，过滤，滤液蒸干，残渣加l%盐酸5 mL溶解，过滤，由碳酸钠调节滤液滴pH至8，过滤，蒸干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。精密称取盐酸水苏碱对照品1 mg，制成1 mg/mL的对照品溶液。根据双参活血胶囊处方比例，称取人参、丹参等除益母草以外的药材，同工艺制成阴性成品，按照上述方法制备阴性对照溶液。

2.2.3.2 鉴定方法 分别吸取上述不同溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以比例为4∶1∶1的正丁醇-醋酸-水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，晾干。供试品色谱中，双参活血胶囊各供试品在与对照品色谱相应的位置上，颜色斑点相同，在此位置上阴性对照无斑点显示(见图1)。

3 讨论

双参活血胶囊是治疗心脑血管疾病、各种血栓症的复方纯中药制剂，具有通畅脉络、活血化瘀的作用。为了对双参活血胶囊的质量进行控制，本研究对制剂中的丹参、人参、益母草采用TCL定性鉴别，从鉴别结果显示，供试品色谱中，双参活血胶囊中人参、益母草及丹参各供试品在与对照品色谱及对照药材相应的位置上，颜色斑点相同，在此位置上阴性对照无斑点显示［5-7］。采用HPLC法对双参活血胶囊中的主要成分丹参酮ⅡA进行检测，显示5 份样品含量分别为 0.218、0.217、0.216、0.212、0.210 mg。本研究结果说明，TLC法可对双参活血胶囊中各中药材进行鉴定，丹参酮ⅡA是中药丹参的脂溶性有效成分，以此指标作为双参活血胶囊的质控指标可准确掌握每批药品的质量。

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