免疫组化在肺小细胞癌活检诊断中的重要性

万辉??戴一菲

[摘要] 目的 通过肺穿刺及支气管镜获得的组织极易因挤压过甚而结构不清，使肺小细胞癌与低分化鳞癌、淋巴瘤间会出现形态学上的重叠，我们通过免疫组化探讨肺小细胞癌活检标本的诊断及鉴别诊断。 方法 收集肺穿刺及支气管镜活检病例46例，病理组织形态学均诊断为肺癌，倾向于肺小细胞癌，每个病例均进行CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA免疫组化诊断。 结果 46例诊断为肺癌，倾向于肺小细胞癌的活检标本经免疫组化证实：43例为肺小细胞癌、2例低分化鳞癌、1例非何杰金氏淋巴瘤。 结论 免疫组化在肺小细胞癌的诊断与鉴别诊断中具有十分重要的意义。

[关键词] 肺小细胞癌；支气管镜活检；免疫组化

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）04-151-04

An analysis on the significance of immunohistochemistry in the biopsy of small cell lung carcinoma

WAN Hui1 DAI Yifei2

1.Department of Pathology， Pu'ai Hospital of Anlu City，Anlu 432600，China；2.Department of Pathology， Central Hospital of Xiaogan，Xiaogan 432000，China

[Abstract] Objective To explore the diagnosis and differential diagnosis of biopsy specimens of small cell lung carcinoma via immunohistochemistry，considering the tissues acquired via pneumocentesis and bronchoscope are easily to be squeezed so much so that their structures become unclear， which lead to morphological overlaps between small cell lung carcinoma， poorly differentiated squamous carcinoma and lymphoma. Methods 46 patients who were received biopsy of pneumocentesis and bronchoscope were selected and were diagnosed of lung cancer both pathologically and morphologically.The diagnosed cancer tended to be small cell lung carcinoma.Each patients were received immunohistochemistry of CgA，Syn，Sclc，TTF-1， ki67，CK5/7，P63，34βE12 and LCA. Results Among the 46 patients diagnosed of lung cancer，biopsy specimens which tended to be small cell lung carcinoma were confirmed by immunohistochemistry： 43 patients were infected by small cell lung carcinoma，2 lower differentiated squamous carcinoma and 1 non-Hodgkin's lymphoma. Conclusion Immunohistochemistry is of great significance in the diagnosis and differential diagnosis of small cell lung carcinoma.

[Key words] Small cell lung carcinoma；Bronchoscopic biopsy；Immunohistochemistry

肺癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。其中，肺小细胞癌（small cell lung carcinoma，SCLC）占其15%～20%[1]，是肺癌中恶性程度最高的肿瘤。经临床实践证实，SCLC对放化疗敏感性比非小细胞癌高，手术不是其治疗的首选方案，因此治疗前的准确诊断是十分关键的。目前，肺穿刺及支气管镜活检是诊断肺肿瘤的主要手段。但是，由于它取材标本数量有限和易造成取材组织挤压的原因，单从组织形态上诊断SCLC是存在一定风险，本研究旨在探讨相关蛋白在其诊断及鉴别诊断中的表达特点，来反映免疫组化在SCLC活检诊断中的重要性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集孝感市中心医院病理科2005年3月～2013年10月肺穿刺及支气管镜活检病例46例，年龄为40～82岁，中位年龄61.3岁，男女比例约6∶1，病理组织形态学均诊断为肺癌，倾向于肺小细胞癌。每个病例均进行CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA免疫组化诊断。

1.2 方法

病理组织学检查方法 标本均用10%中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色，显微镜下根据形态学特征作出诊断。endprint

免疫组化方法 采用ElivisionTM super免疫组化二步法，切片厚3μm，pH（6.0±0.1）柠檬酸组织抗原修复液高压修复，DAB显色。试剂CgA（SP12）、Syn（SP11）、Sclc（123C3）、TTF-1（8G7G311）、ki67（MIB-1）、CK5/6（D5/16B4）、P63（4A4）、34βE12、LCA（PD7/26+2B11）由福州迈新生物技术开发有限公司提供。

免疫组化结果判断CgA、Syn、Sclc、CK5/6、34βE12、LCA以细胞浆/细胞膜中出现棕黄色颗粒为阳性表达；TTF-1、P63、ki67以细胞核中出现棕黄色颗粒为阳性表达。

2 结果

2.1 病理组织学结果

46例诊断为肺癌，倾向于肺小细胞癌的活检标本经免疫组化CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA蛋白标记证实：43例为SCLC、2例低分化鳞癌、1例非何杰金氏淋巴瘤。SCLC镜下形态：癌细胞呈片状、巢状、小梁状分布，细胞核呈圆形、卵圆形或梭形，核染色质呈细颗粒状，染色较深，核仁缺乏或不明显，胞浆稀少，细胞分界不清，和分裂象易见（图1）；低分化鳞癌镜下形态：癌细胞呈片状、巢状分布，细胞核呈卵圆形，染色质粗或泡状核，核仁较明显，胞浆少，和分裂象易见（图2）；非何杰金氏淋巴瘤镜下形态：肿瘤细胞排列较松散，细胞核呈圆形或卵圆形，染色质较粗（图3）。

图1 支气管镜活检倾向于肺小细胞癌，免疫组化证实为

肺小细胞癌 （HE×200）

图2 支气管镜活检倾向于肺小细胞癌，免疫组化证实为低分化鳞癌（HE×200）

图3 支气管镜活检倾向于肺小细胞癌，

免疫组化证实为淋巴瘤（HE×200）

2.2 免疫组化结果

43例SCLC病例中：Sclc的表达率为100%（43/43例）、TTF-1表达率为88.4%（38/43例）、CgA表达率为60.5%（26/43例）、Syn表达率为93.0%（40/43例）、CK5/6表达率为2.3%（1/43例），P63、34βE12、LCA均为阴性表达，ki67阳性表达>80%的占51.2%（22/43例），40%～80%的占48.8%（21/43例）（图4）；2例低分化鳞癌病例中：P63、34βE12、CK5/6均为阳性表达，Syn有1例灶状区表达阳性，CgA、TTF-1、Sclc、LCA均表达阴性（图5）；1例非何杰金氏淋巴瘤病例中：LCA阳性表达，Syn灶状区表达阳性，CgA、Sclc、CK5/6、34βE12、TTF-1、P63均阴性表达（图6）。

3 讨论

肺小细胞癌SCLC具有恶性程度高，生长迅速，转移发生早，手术切除效果差，对放化疗敏感的特点。因此，现在对其治疗不首选手术治疗，治疗前的诊断主要依靠肺穿刺和支气管镜活检的病理学诊断。但是，SCLC的病理学形态与不典型类癌是存在共性的，而且活检标本由于取材钳夹取力度的原因会造成组织挤压、变形，我们46例活检标本均存在不同程度的这种现象，而且这种挤压导致细胞核深染，结构不清，使得低分化鳞癌与淋巴瘤易误诊为SCLC，46例活检标本经免疫组化CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA蛋白标记证实其中2例为低分化鳞癌、1例为非何杰金氏淋巴瘤，并且SCLC、低分化鳞癌、淋巴瘤的临床治疗是不相同的。由此可见，仅从形态学诊断是很难以作出完全性诊断[2]，是存在一定风险的。

图4 肺小细胞癌的IHC结果（IHC×200）

A：Sclc阳性表达；B：Syn阳性表达；C：CgA阳性表达；D：TTF-1阳性表达；E：P63阴性表达；F：34βE12阴性表达；G：CK5/6阴性表达；H：LCA阴性表达；I：ki67高表达

图5 低分化鳞癌的IHC结果 （IHC×200）

A：34βE12阳性表达；B：P63阳性表达；C：CK5/6阳性表达；D：Sclc阴性表达；E： Syn阴性表达；F：CgA阴性表达；G：TTF-1阴性表达；H：LCA阴性表达

图6 淋巴瘤的IHC结果 （IHC×200）

A： LCA阳性表达；B：Syn灶状阳性表达；C：Sclc阴性表达；D：CgA阴性表达；E：TTF-1阴性表达；F：34βE12阴性表达；G：P63阴性表达；H：CK5/6阴性表达

突触素Syn最常用于诊断神经内分泌肿瘤的特异性标志物[3]，它几乎存在于所有的中枢及外周神经系统的神经末梢[4]，在我们研究的46例病例中，43例SCLC中Syn表达率为93.0%。SCLC抗体是一种神经粘附分子糖蛋白，主要用于肺小细胞癌和神经源性肿瘤的诊断，43例SCLC中Sclc抗体的表达率为100%。CgA是人类肾上腺髓质中含量最高的一种可溶性酸性蛋白，广泛存在于神经元及其神经内分泌细胞中，43例SCLC中CgA表达率为60.5%。TTF-1被Lazzaro等人于1991年发现除了存在于甲状腺滤泡上皮细胞中外，在肺组织吉发育中的中枢神经系统中也存在，而且它的基因扩增和蛋白水平的增高存在于多种肺癌中[5]，43例SCLC中TTF-1表达率为88.4%[6]。以上说明Syn、Sclc、CgA、TTF-1是诊断SCLC的可靠指标，这与高福平等人[7]及王银屏等人[8]的研究相一致，并且4种指标联合使用诊断的准确率更高。

低分化鳞癌虽然细胞核与SCLC存在区别，前者细胞核染色质粗糙或泡状，核仁明显，但由于活检标本组织被挤压，细胞核也会呈现与SCLC一样的浓染现象，导致部分病例在形态上有重叠[9]。但是，免疫组化标记物CgA、TTF-1、Sclc均表达阴性，Syn2例中有1例仅灶状区阳性表达，而P63、34βE12、CK5/6均为阳性表达，且这三种指标在43例SCLC中均阴性表达。由此可见，Syn、Sclc、CgA、TTF-1、P63、34βE12、CK5/6这几种免疫组化标记物联合使用可到达鉴别SCLC和低分化鳞癌的目的。endprint

肺淋巴瘤的发病率在肺恶性肿瘤中所占不到0.5%[10]，在活检标本中它的细胞形态由于取材原因与SCLC有重叠，但是白细胞共同抗原LCA是它的特异性标记物，在43例SCLC中它的表达均为阴性，在淋巴瘤中阳性表达。因此，LCA是鉴别SCLC与淋巴瘤的特异性指标。

综上所述，肺穿刺及支气管镜活检仅从形态学上诊断肺小细胞癌是很片面的，也存在风险，它需要与低分化鳞癌、不典型类癌及淋巴瘤相鉴别，而且这四种疾病的治疗方法是不同的。因此，免疫组化标记物CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA在其诊断与鉴别诊断中具有十分重要的意义。

[参考文献]

[1] Sing S，Parulekar W，Murray N，et al.Influence of sex on toxicity and treatment outcome in small-cell lung cancer[J].J Clin Oncol，2005，23（4）：850-856.

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[6] 彭光银，范钦和，陈炳宇.肺小细胞癌45例临床病理分析[J].中国误诊学杂志，2011，11（10）：2458-2459.

[7] 高福平，魏谨.Syn及CD56在肺小细胞癌中的表达及意义[J].临床肺科杂志，2012，17（5）：900-901.

[8] 王银萍，曲丽梅，郝玉丹.肺小细胞癌支气管镜活检的陷阱—附64例免疫组化研究[J].中国肺癌杂志，2009，12（8）：901-904.

[9] 牛春波，贾飞勇，辛华，等.免疫组化在肺小细胞癌支气管镜活检标本鉴别诊断中的应用[J].中国实验诊断学，2011，15（6）：1062-1063.

[10] Ferraro P，Trastek VF，Adlakha H，et al.Primary non-Hodgkin's lymphoma of lung[J].Ann Thorac Surg，2000，69（4）：993-997.

（收稿日期：2013-12-06）endprint

肺淋巴瘤的发病率在肺恶性肿瘤中所占不到0.5%[10]，在活检标本中它的细胞形态由于取材原因与SCLC有重叠，但是白细胞共同抗原LCA是它的特异性标记物，在43例SCLC中它的表达均为阴性，在淋巴瘤中阳性表达。因此，LCA是鉴别SCLC与淋巴瘤的特异性指标。

综上所述，肺穿刺及支气管镜活检仅从形态学上诊断肺小细胞癌是很片面的，也存在风险，它需要与低分化鳞癌、不典型类癌及淋巴瘤相鉴别，而且这四种疾病的治疗方法是不同的。因此，免疫组化标记物CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA在其诊断与鉴别诊断中具有十分重要的意义。

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（收稿日期：2013-12-06）endprint

肺淋巴瘤的发病率在肺恶性肿瘤中所占不到0.5%[10]，在活检标本中它的细胞形态由于取材原因与SCLC有重叠，但是白细胞共同抗原LCA是它的特异性标记物，在43例SCLC中它的表达均为阴性，在淋巴瘤中阳性表达。因此，LCA是鉴别SCLC与淋巴瘤的特异性指标。

综上所述，肺穿刺及支气管镜活检仅从形态学上诊断肺小细胞癌是很片面的，也存在风险，它需要与低分化鳞癌、不典型类癌及淋巴瘤相鉴别，而且这四种疾病的治疗方法是不同的。因此，免疫组化标记物CgA、Syn、Sclc、TTF-1、ki67、CK5/6、P63、34βE12、LCA在其诊断与鉴别诊断中具有十分重要的意义。

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[10] Ferraro P，Trastek VF，Adlakha H，et al.Primary non-Hodgkin's lymphoma of lung[J].Ann Thorac Surg，2000，69（4）：993-997.

（收稿日期：2013-12-06）endprint