萎胃汤对大鼠血清SOD活性、MDA、GAS的影响研究

★ 张伦 刘蔚 戈焰 荣尚一

（1.广东省第二中医院 广州 510095；2.南方医科大学公共卫生与热带医学学院 广州 510515）

慢性萎缩性胃炎属于中医学“胃脘痛”、“胃痞”等范畴[1]。中医学认为本病病因不外乎饮食不节、情志所伤与脾胃虚弱。慢性萎缩性胃炎患者久病脾虚，加之调养失当，外邪侵袭等因素，使中气更虚不足以行血，渐致壅滞成瘀。脾虚血瘀证是慢性萎缩性胃炎中医学临床最常见证型，萎胃汤验之临床屡获良效，本研究通过动物实验研究萎胃汤可能的作用机制，为今后更深一步的研究工作打下基础，现将动物实验研究报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 SPF级SD大鼠，雌雄各半，体重180-220g，由广东省医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2003-0002。动物饲养环境：广东省中医研究所SPF级实验室，实验动物使用许可证号：SCXK（粤）2005-0059，温度20℃-25℃，湿度60%-70%，SPF级大鼠饲料，饮用无菌水。

1.1.2 药品 试验药：萎胃汤（黄芪、党参、当归、白术、甘草、枳壳、石斛、鸡内金、山楂、三七、莪术），由广东省第二中医院中药房提供，单味颗粒剂由广东省一方制药厂生产；对照药：胃复春片（成分为红参、香茶菜、炒枳壳等），杭州胡庆余堂药业有限公司生产，国药准字：Z200040003，批号：090604。

1.2 方法

1.2.1 MNNG饮用液配制 用灭菌自来水将MNNG配制成10mg/L浓度的储存液，避光冷藏保存，用时将其配成1 500 μg/mL的饮用液，装入200mL的饮水瓶中，外贴黑色避光纸，整个配制过程全部避光操作。

1.2.2 剂量设置 以药品说明书标示临床日用量作为基础，参考《中药药理研究方法学》中的剂量换算方法“体表面积比”换算动物试验剂量作为临床等效剂量。换算后，胃复春片为0.54g/kg（2倍临床等效剂量），萎胃汤高剂量为20.8 g生药/kg、中剂量为10.4 g生药/kg、低剂量为5.2 g生药/kg（分别为4倍临床等效剂量、2倍临床等效剂量、临床等效剂量）。

1.2.3 动物造模 取SPF级SD大鼠70只，雌雄各半，常规喂养1周后，随机抽取雌雄各5只作为空白对照组，其余大鼠采用1 500 μg/mL的MNNG饮水加饥饱失常的方法复制CAG模型[2-3]，连续3个月。具体操作如下。

（1）MNNG溶液自由饮用：浓度为1 500 μg/mL的MNNG溶液，装入外涂黑色的饮水瓶中，每天更换并给足量，自由饮用。

（2）饥饱失常：2d足量喂食，1d停食，循环实施。

3个月后，随机抽取5只动物，脱颈椎处死动物，迅速取胃。经病理组织学检查，判断动物造模情况。造模成功标准：参照《中药（新药）临床研究指导原则》（2002）中GAG的病理诊断标准，经病理确诊：①固有腺体萎缩；②黏膜肌层增厚；③可有肠上皮化生或假幽门腺上皮化生；④固有膜炎症；⑤可有淋巴滤泡形成。

CAG动物模型复制成功后，称重，10只/组，将造模动物按体重随机均分为模型组、胃复春组（0.54g/kg）、萎胃汤高（20.8 g生药/kg）、中（10.4 g生药/kg）、低（5.2 g生药/kg）剂量组（分别为4、2、1倍临床等效剂量）。

1.2.4 给药方法 各组大鼠按剂量灌胃给药，10mL/kg，1次/d，空白对照组给予等体积蒸馏水。连续12周。

1.2.5 指标检测与标本采集 测定胃酸、血清SOD活性、MDA、胃泌素含量。

胃酸测定：于末次给药后，大鼠禁食24 h，禁水8 h，眼眶采血；用25%乌拉坦腹腔注射麻醉，剖腹，结扎幽门、贲门，取出全胃，沿胃大弯剖开胃腔，倾出内容物，用5.0 mL生理盐水冲洗，收集于冲洗液于离心管中，3 000 rpm离心20 min，吸取上清液1.0 mL，用PH计测量pH值，计算原胃液PH值；二步滴定法[4]测胃液总酸度。将血液于3 000rmp离心10min，吸取血清。严格按照试剂盒说明书，测定血清中的SOD活性、胃泌素、MDA含量。

1.3 统计方法

计量资料多组间均数的比较先采用单因素方差分析，方差齐时，以均值加减标准差（±s）表示，组间的均数两两比较用SNK法；方差不齐时，以平均秩次、下四分位数、中位数和上四分位数（P25，P50，P75）表示，多组间平均秩次比较用Kruskal-Wallis秩和检验，组间平均秩次的两两比较用Mann-Whitney U法。以上数据均由SPSS15.0完成，α=0.05。

2 研究结果

2.1 一般情况

CAG模型大鼠精神萎靡、眼睛无神、活动缓慢，毛发色泽枯稿、疏松粗糙、竖毛、易脱落，食量减少，常有便溏、形体偏小，耳色淡白，拱背，喜扎堆，消瘦、体重增加缓慢。治疗期间，空白组未发现上述表现，各治疗组大鼠经治疗后，其毛色、精神状态、食欲、大便、活动情况等均有不同程度的改善，而以萎胃汤高、中剂量组最好、萎胃汤低剂量组和胃复春组次之，模型组最差。

2.2 对CAG大鼠胃液PH值、胃泌素的影响

与空白对照组比较，各组大鼠胃液PH显著升高（均P＜0.01）；与模型组相比，胃复春组、萎胃汤高、中、低3个剂量组大鼠胃液PH均显著性降低（P＜0.01）；与胃复春组相比，萎胃汤高、中剂量组大鼠胃液PH有显著性降低（均P＜0.01），萎胃汤低剂量组大鼠胃液PH降低不明显（P＞0.05）。

与空白对照组相比较，模型组大鼠胃液总酸度和血清胃泌素含量显著降低（P＜0.01）；与模型组相比，萎胃汤高、中、低3个剂量组和胃复春组大鼠胃液总酸度和血清胃泌素含量显著升高（均P＜0.01）；与胃复春组相比，萎胃汤低剂量组大鼠胃液胃液总酸度无显著性差异（P＞0.05），萎胃汤低剂量组大鼠血清胃泌素含量有显著性升高（P＜0.01），萎胃汤高、中剂量组大鼠胃液胃液总酸度和血清胃泌素含量均显著性升高（均P＜0.01）。

表1 萎胃汤对CAG大鼠PH值、总酸度、胃泌素含量的影响（±s）

表1 萎胃汤对CAG大鼠PH值、总酸度、胃泌素含量的影响（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组#P＜0.05，##P＜0.01；与胃复春组比较，§P＜0.05，§§P＜0.01.

分组血清胃泌素/pg•mL-1 145.58±7.38##§§73.89±8.71**§§95.17±7.21**##129.85±5.27##§§120.53±13.18**##§§112.89±7.17**##§§空白组模型组胃复春组高剂量组中剂量组低剂量组胃液pH值2.11±0.52##§§5.17±0.52**§§4.48±0.45**##2.99±0.49**##§§3.43±0.43**##§§4.27±0.57**##总酸度/mmol•L-1 150.60±14.87##§§75.45±4.53**§§95.86±3.84**##132.56±12.92**##§§120.64±10.84**##§§105.45±8.90**##

2.3 对大鼠血清SOD（超氧化物歧化酶）活性和MDA（丙二醛）含量的影响

与空白对照组相比较，模型组CAG大鼠血清SOD活性显著降低（P＜0.01）；与模型组相比较，胃复春组和萎胃汤高、中、低3个剂量组SOD活性显著升高（均P＜0.01）；与胃复春组相比较，萎胃汤高剂量组SOD活性显著升高（P＜0.01），萎胃汤中、低剂量组SOD活性亦有升高但无统计学意义（P＞0.05）。

与空白对照组相比较，模型组CAG大鼠MDA显著升高（P＜0.01）；与模型组相比较，胃复春组和萎胃汤高、中、低3个剂量组MDA显著降低（均P＜0.01）；与胃复春组相比较，萎胃汤高剂量组MDA显著降低（P＜0.01），萎胃汤中、低剂量组MDA亦有降低但无统计学意义（P＞0.05）。

表2 萎胃汤对CAG大鼠血清SOD和MDA的影响（±s）

表2 萎胃汤对CAG大鼠血清SOD和MDA的影响（±s）

注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组#P＜0.05，##P＜0.01；与胃复春组比较，§P＜0.05，§§P＜0.01.

MDA/mmol•L-1 9.48±2.06##§§16.88±1.06**§§14.29±0.98**##10.96±1.61*##§§12.96±1.83**##13.58±1.50**##分组空白组模型组胃复春组高剂量组中剂量组低剂量组SOD/U•mL-1 152.61±10.37##§§97.84±9.95**§§132.93±11.49**##150.13±12.84##§§137.14±9.12**##137.53±6.68**##

2.4 不良事件发生率

2组大鼠于灌药期间均无出现死亡、消化道出血、血尿等的不良事件，提示萎胃汤为安全的药物。

3 讨论

本研究采用以MNNG为主的加饥饱失常法复制CAG大鼠模型。造模开始后6周大鼠即开始出现活动量、饮食量、体重、毛色、二便等方面的异常变化，至12周时上述改变更加明显，而且胃粘膜肉眼观和显微镜镜下观呈不同程度的萎缩、胃壁厚变薄、弹性降低、皱壁减少、黏膜色泽发白或变暗，有出血点等情况的发生，符合人类CAG的临床和病理特征。

近年来，超氧化物歧化酶（SOD）的防御和修复氧代谢产物的损伤作用得到了广泛的重视，测定SOD可在一定程度上反映机体清除自由基能力的大小。丙二醛（MDA）是脂质过氧化的最终分解产物，可与脂质过氧化中间产物自由基损伤膜结构，改变膜成分的活性及抗原性而影响膜的正常功能。因此，MDA水平是脂质过氧化物损伤效应的特征性指标。蒋时红等[5]在实验中发现，慢性萎缩性胃炎（CAG）大鼠模型血清和胃黏膜SOD水平明显下降，而MDA水平明显升高，表明CAG大鼠脂质过氧化反应增强，超出了抗氧化系统的抗氧化能力，使MDA增高，自由基代谢异常起着重要作用。

胃泌素主要由胃窦G细胞释放，除存在于血液和组织中，也存在于胃液内，具有刺激胃酸分泌，促使胃肠粘膜的蛋白质、RNA、DNA的合成，促使胃肠粘膜的生长与更新速度加快等作用。还能引起幽门括约肌松弛，胃窦肌收缩，加快胃排空。在CAG时由于腺体萎缩，肠上皮化生，G细胞数量减少，GAS分泌下降，由于失去了激素的营养作用，胃粘膜进一步萎缩，肠化加剧，形成恶性循环。因此，检测胃酸、胃蛋白酶活性及血清胃泌素含量对于CAG的诊断及药物疗效的判定，具有非常重要的意义。

本研究提示萎胃汤各剂量组均能改善CAG模型大鼠的生存质量：即大鼠的精神状况、饮食量、活动度、体重、毛色、二便等一般情况，且萎胃汤高、中剂量组较对照药胃复春为好。在改善胃液PH方面，萎胃汤高、中、低3个剂量组大鼠均显著性降低胃液PH值（P＜0.01），且萎胃汤高、中剂量组较胃复春组大鼠胃液PH值亦有显著性降低（均P＜0.01）。在胃酸分泌功能方面，萎胃汤高、中、低3个剂量组和胃复春组均升高了胃泌素的分泌情况（均有P＜0.01），且萎胃汤高、中剂量组较胃复春组大鼠胃泌素亦有显著性升高（均P＜0.01）。在抗氧化能力方面亦有改善，萎胃汤3个剂量组均显著升高了SOD活性（均P＜0.01），降低MDA的含量（均P＜0.01）。通过实验研究也可以看出，治疗作用中以萎胃汤高剂量效果最好；治疗剂量呈现了一定的剂量正相关关系。通过动物实验研究进一步阐明了萎胃汤治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制。

[1]白兆芝，张彦敏，张润顺，等.胃安泰胶囊治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变的临床研究[J].上海中医药杂志，2005，39（2）：16-17.

[2]陈云逸.胃癌动物模型研究进展[J].肿瘤基础与临床，2006，19（1）：751.

[3]雪辉，王建国.大鼠慢性萎缩性胃炎模型的建立[J].张家口医学院学报，2002，19（2）：11.

[4]陈奇.中药药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：859.

[5]蒋时红，刘旺根，王雪萍，等.黄芪建中汤对脾虚型慢性萎缩性胃炎大鼠血象、血液和胃黏膜生化指标的影响[J].中国中医基础医学杂志，2006，12（4）：279-281.