鸦胆子油亚纳米乳注射液安全性试验

★ 崔明超 卢欢 欧阳强 潘金火

（1.浙江医药高等专科学校 宁波 315100；2.江西中医学院 南昌 330004；3.南京苏中药物研究有限公司 南京 210016；4.南京中医药大学 南京 210046）

鸦胆子油亚纳米乳注射液作为注射剂应用于临床，为了保证注射剂的质量、确保用药安全，除进行必要的理化研究之外，还需要从药理学研究的角度对制剂进行质量检查，保证某些有害的物质和某些不良反应的强度不超过规定的限度。这些试验统称为制剂的安全性限度试验。通常包括热原检查、刺激性试验、过敏性试验、溶血性试验和安全性检查限度等项目。本文主要对制剂溶血性试验、过敏试验、热原试验、局部血管刺激性试验进行考察。

1 仪器与试药

1.1 动物

日本大耳白兔，南京医科大学实验动物中心提供，证号：12102；NIH小鼠，19-22g，雌雄各半，南京医科大学实验动物中心提供，合格证号：12102；7月龄Beagle狗4只，体重6.8-7.8kg，♂♀各半。购于上海市新冈实验动物场，合格证号：沪动合证字11219号（上海市实验动物管理委员会，2012年7月6日颁发），常规饲料喂养，动物室室温22℃-25℃，相对湿度75%。

1.2 试药

鸦胆子油亚纳米乳注射液由江苏苏中药业提供，批号120418，包装规格100mL/瓶，含量90mg/mL。对照物为脂肪乳注射液（商品名：英脱利匹特，华瑞制药有限公司生产）批号：1204150-2B。生理盐水，蒸馏水，消毒酒精。

1.3 仪器

兔夹，红外灯，剪毛刀，刀片，脱脂棉，离心管，竹签，80-2离心机（上海手术器械厂）；KQ-5OB型超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）。

2 方法和结果

2.1 溶血性试验

2.1.1 试验方法 取兔血用3.8%枸橼酸钠抗凝，用生理盐水洗3次，配成2%红细胞生理盐水溶液。取试管9支，在试管中放入2%红细胞生理盐水5mL，然后每3管各加蒸馏水、生理盐水、鸦胆子油亚纳米乳注射液1mL，混匀，37℃水浴孵育30min，离心，去上清。每管沉淀的红细胞用1mL生理盐水稀释，吸取该液20μL加红细胞稀释液2mL，计数红细胞[1]。

2.1.2 结果 鸦胆子油亚纳米乳注射液组红细胞数与生理盐水组相比较无差异，说明鸦胆子油亚纳米乳注射液对兔红细胞无溶血现象。蒸馏水组红细胞数比生理盐水组低，表明有溶血现象（详见表1）。

2.1.3 结论 鸦胆子油亚纳米乳注射液对家兔红细胞无溶血反应。

表1 鸦胆子油亚纳米乳注射液溶血试验

2.2 过敏试验

2.2.1 机制 速发型过敏反应的机制是在抗原型物质刺激下机体产生以免疫球蛋白（IgE）为主的相应抗体，当IgE与肥大细胞及嗜碱性细胞表面受体结合而使机体处于过敏状态。当再次接触相应的抗原性物质时，细胞表面的IgE受体被激活，使肥大细胞和嗜碱性细胞脱颗粒，释放出组胺、慢反应物质、前列腺素等，导致平滑肌痉挛，毛细血管扩张，通透性增加，动物出现呼吸困难，发绀，抽搐等症状，甚至死亡。

2.2.2 试验方法 豚鼠体重270±30g，鸦胆子油亚纳米乳注射液组每只间日腹腔注射鸦胆子油亚纳米乳注射液0.5mL；卵白蛋白（OA）组每只每日腹腔注射5%卵白蛋白生理盐水溶液0.5mL，连续3次。于第1次注射后第14d及第21d各取豚鼠3只，戊巴比妥钠麻醉，鸦胆子油亚纳米乳注射液组静脉注射鸦胆子油亚纳米乳注射液1mL，卵白蛋白组静脉注射0.05%卵白蛋白1ml攻击，观察是否出现过敏反应或死亡[2]。

2.2.3 结果 卵白蛋白致敏的豚鼠在致敏第14d及第21d进行攻击，在抗原攻击后0.5-2min出现呼吸困难、发绀、抽搐，在15min内6只豚鼠3只死亡。鸦胆子油亚纳米乳注射液致敏的豚鼠在致敏第14d及第21d进行攻击，均未发生速发型过敏反应。

2.2.4 结论 鸦胆子油亚纳米乳注射液重复注射不会引起豚鼠致敏，不会发生速发型过敏反应（详见表2）。

表2 鸦胆子油亚纳米乳注射液的豚鼠速发型过敏反应情况

2.3 热原试验

2.3.1 试验方法 健康兔2.15-2.35kg 3只（2♂1♀），预检合格。室温25-28℃。试验前1h停止供食，测定其正常体温后，自耳静脉缓缓注入鸦胆子油亚纳米乳注射液10mL，然后每隔1h测体温1次，共3次[3]。

2.3.2 结果 见表3。

表3 鸦胆子油亚纳米乳注射液热原试验

2.3.3 结论 热原试验结果表明鸦胆子油亚纳米乳注射液热原限度符合中华人民共和国药典规定。

2.4 局部血管刺激性试验

2.4.1 方法 将4只狗分成2组，1组为鸦胆子油亚纳米乳注射液，另一组为英脱利匹特。每组2只狗，♂♀各一只。用75%乙醇消毒狗右耳缘，用消毒针筒抽取药液，用一次性硅胶管针插入耳缘静脉，静脉注射鸦胆子油亚纳米乳注射液或英脱利匹特10mL/kg/d，每次注射10min，连续7d左耳静脉不注射，作对照观察。停药后3d处死动物，取二侧耳缘作病理切片检查[4]。

2.4.2 结果 肉眼观察：第1次注射24h后，4只狗被注射的耳缘静脉局部未见明显红肿，第3次注射24h后，2组中各有1只狗稍有红肿，第7次注射24h后，2组中各有1只狗明显红肿、用手触摸血管有明显的硬化感，另各有1只稍有红肿，48h后红肿均有明显消退，72h后红肿基本消退，但血管硬化感仍存在。

2.4.3 病理切片观察 鸦胆子油亚纳米乳组2只狗和英脱利匹特对照组2只狗的左耳静脉镜检均未见病理变化。鸦胆子油亚纳米乳组和英脱利匹特对照组各有1只。狗的右耳缘静脉镜检有明显血管壁损伤和急性炎症反应，而2组的另1只狗又耳缘静脉管壁内的病理变化兼于急性和慢性之间，除了又急性炎症现象，还有管内血栓形成，机化等病理变化，比较2组狗的病理变化，完全相同。图1显示鸦胆子油亚纳米乳注射液1号狗的急性炎症变化；图2显示鸦胆子油亚纳米乳注射液3号狗慢性炎症的病理变化。

2.4.4 结论 鸦胆子油亚纳米乳注射液和对照药英脱利匹特给狗耳缘静脉注射的局部血管均有轻度刺激反应，但对照左耳静脉无明显血管刺激反应，表明该刺激反应属于油乳剂共有的刺激反应，并非鸦胆子油亚纳米乳注射液特有，此外也不能排除注射针头局部性的损伤引起的炎症反应。

图1 鸦胆子油亚纳米乳注射液组1号狗病理变化

图2 鸦胆子油亚纳米乳注射液组3号狗病理变化

3 小结与讨论

通过对家兔的刺激性试验、溶血性试验，豚鼠速发型过敏反应未见有异常反应出现，说明本品不会引起溶血、刺激反应，不引起速发型过敏反应。鸦胆子油亚纳米乳注射液热原试验，血管刺激反应性均符合规定。表明该制剂静注给药是比较安全可靠的。给狗耳缘静脉注射的局部血管均有轻度刺激反应，但对照左耳静脉无明显血管刺激反应，表明该刺激反应属于油乳剂共有的刺激反应，并非鸦胆子油亚纳米乳注射液特有，此外也不能排除注射针头局部性的损伤引起的炎症反应，在临床使用中应注意。

[1]袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京：军事医学科学出版社，1997：29-30．

[2]国家食品药品监督管理局.药物研究技术指导原则（中药、天然药物免疫毒性过敏性、光变态反应研究技术指导原则）[M].北京：中国医药科技出版社，2005：3．

[3]陈奇.中药药理试验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：163，168．

[4]何晓静，刘玉兰.注射用头孢替坦钠的安全性再评价[J].中国抗生素杂志，2007，1：59-62．