鸦胆子油乳诱导宫颈癌SiHa细胞的凋亡

刘博宇 金海国 李 忠 (吉林省肿瘤医院放疗研究室，吉林 长春 130012)

宫颈癌是严重威胁妇女健康的一种疾病，也是最多见的恶性肿瘤之一，居我国妇女恶性肿瘤的首位〔1〕。目前临床上主要采用手术、放疗及化疗等方法对宫颈癌进行综合治疗，但临床上缺乏不良反应小的辅助治疗药物。鸦胆子油乳属植物的种子，其主要成分为油酸和亚油酸。在临床上广泛应用于对消化道肿瘤、肺癌、肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤的辅助治疗〔2～4〕，在抗肿瘤的同时还具有提高机体免疫力作用〔5〕，但是目前尚未见用该药治疗宫颈癌的临床报道。本研究通过观察鸦胆子油乳对体外宫颈癌SiHa细胞的抑制，阐明其对诱导SiHa细胞凋亡的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料 鸦胆子油乳(10 ml/支)由沈阳药科大学制药厂生产。宫颈癌SiHa细胞购自美国ATCC细胞库。

1.2 细胞培养 选用人宫颈癌细胞系SiHa在含10%小牛血清、青霉素100 IU/ml、链霉素100 μg/ml中，在恒温培养箱中以37℃、5%CO2条件下培养。每2天换液1次，当细胞80%融合时用不含0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)的0.25%胰蛋白酶消化传代。

1.3 增殖抑制实验 鸦胆子油乳稀释成3个不同质量浓度实验组，另设1个不加药物的空白对照组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率。将Hela细胞转移在96孔细胞培养板中，每个孔内加入细胞悬液200 μl，在恒温培养箱中以37℃、5%CO2条件下继续培养24 h。将药物分别加入实验孔中，设6个复孔，分别在24、48、72 h 后取出一个培养板，每孔加入 MTT 40 μl，孵育4 h后去上清。每个孔内加入150 μl DMSO，振荡10 min左右。然后用酶标仪在550 nm处测定光密度值(D)。细胞生长抑制率(IR)=(实验组D/对照组D)×100%。

1.4 流式细胞仪分析 取对数生长的SiHa细胞，将其接种于培养瓶中，分为不加药物的空白对照组和3个实验组。实验组稀释药物浓度为10、30、50 μg/ml，继续培养48 h后收集不同药物浓度处理的Hela细胞，制成单细胞悬液，调细胞数 ＞1×106/ml，冰PBS洗两遍，70%冰乙醇固定过夜，加RNA酶及PI，避光染色30 min，流式细胞术检测细胞凋亡。

1.5 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件进行F检验。

2 结果

2.1 宫颈癌SiHa细胞的增殖抑制实验结果 随着鸦胆子油乳浓度的增加，宫颈癌SiHa细胞抑制率逐渐增高。在同一药物浓度作用下，随着作用时间的延长，抑制率也随着增高(P＜0.01)。见表1。

表1 鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制作用(± s，n=6)

表1 鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制作用(± s，n=6)

鸦胆子油乳24 h 48 h 72 h 10 μg/ml 33.15±0.96 63.67±0.31 85.33±1.21 30 μg/ml 37.43±1.62 68.32±0.26 88.57±2.04 50 μg/ml 42.76±4.21 70.43±1.28 90.74±0.92 F/P值83.88/＜0.01 165.3/＜0.01 201.31/＜0.01

2.2 宫颈癌SiHa细胞凋亡结果 鸦胆子油乳作用48 h后，同时G0/G1期比例显著降低，S期比例显著增高，G2/M期比例也有所增高。鸦胆子油乳10、30、50 μg/ml组作用48 h后凋亡率分别为(15.06±4.45)%、(46.42±6.21)%、(82.03±8.94)%，空白对照组细胞凋亡率仅为(0.87±0.56)%，实验组的细胞凋亡率与空白对照组比较具有显著差异(P＜0.01)。

3 讨论

宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒(HPV)的感染、原癌基因的激活、p53抑癌基因分子突变、一些化学致癌物等多种因素有关〔6〕。有研究结果发现，在90%以上的人宫颈癌标本中检测出 HPV DNA〔7〕，其中以 HPV16 型最突出〔8〕。目前放疗及化疗已在临床上广泛应用于治疗此类宫颈癌，并且疗效已得到认可，但其对机体的毒副作用也较大，往往影响患者的生存质量。

鸦胆子油乳是一种抗癌药物，其成分中所包含的鸦胆亭、鸦胆子苦酸等均对癌细胞的DNA、RNA以及蛋白质合成具有抑制作用〔9～11〕。我国于1978年开始研制鸦胆子油静脉乳剂〔12〕，并在临床上主要用于食管癌、肠癌、肝癌、肺癌、脑转移癌等的治疗。该药物与放疗、化疗相比具有毒副作用小，疗效好等优势〔13〕。但目前对鸦胆子油乳治疗HPV相关的宫颈癌的临床报道罕见。本研究结果表明，鸦胆子油乳可明显抑制SiHa细胞的生长，其抑制程度随药物浓度及药物作用时间的增加而增加。在相同作用时间下，随着药物浓度的增加SiHa细胞凋亡率明显增加。这一结果与王晓娜等〔14〕的结果相似。

1 谷铣之，殷蔚伯，余子豪，等.肿瘤放射治疗学〔M〕.第4版.北京:中国协和大学出版社，2008:1007-49.

2 Tibaldi C，Ricci S，Russo F，et al.Increased dose-intensity of gemcitabine in advanced non small cell lung cancer(NSCLC):a multicenter phaseⅡstudy in elderly patients from the“polmone toscano group”(POLTO)〔J〕.Lung Cancer，2005;48(1):121-7.

3 丁新梅，武长军，王鹤鹏，等.TACE联合鸦胆子油乳注射液治疗原发性肝癌的疗效观察〔J〕.中国误诊学杂志，2008;8(14):3314-5.

4 Kato H，Tachimofi Y，Watanabe H，et al.Recurrent esophageal carcinoma after esophagectomy with three-field lymph node dissection〔J〕.J Surg Oncol，1996;61(4):267-72.

5 张宏胜.鸦胆子油乳注射液联合化疗对食管癌术后患者免疫功能的影响〔J〕.海军医学杂志，2007;28(1):31-3.

6 Dellas A，Scheetheiss E，Almendral A，et al.Altered expres-sion of MDM2 and its association with p53 protein status，tu-mor-cell-proliferation rate and prognosis in cervical neoplasia〔J〕.Cancer，1997;74(9):42125.

7 李 力.宫颈癌与人乳头瘤病毒感染〔J〕.中国实用妇科与产科杂志，2006;22(1):13-5.

8 Muoz N，Bosch FX，de Sanjosé S，et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer〔J〕.N Eng J Med，2003;348(6):518-27.

9 陈晓萍.鸦胆子油乳剂治疗肺癌胸水疗效观察〔J〕.中国基层医药，2006;13(2):193-4.

10 林宏英.鸦胆子油的研究进展〔J〕.中国实验方剂学杂志，2006;12(4):65-9.

11 毛建林.鸦胆子油乳剂治疗恶性胸腔积液25例临床分析〔J〕.实用肿瘤杂志，2004;19(2):158-9.

12 吴松昌，林震琼，曹毓芬，等.术前静脉滴注鸦胆子油乳剂治疗肺癌的临床病理研究〔J〕.上海医学，1991;14(5):271-3.

13 崔勇志，张玲华，陆景明.中药鸦胆子油乳剂对人卵巢癌细胞株CAov3的毒性作用〔J〕.中国医科大学学报，1997;26(1):82.

14 王晓娜，马 力，安春丽，等.鸦胆子油乳对宫颈癌SiHa细胞的抑制〔J〕.中国肿瘤生物治疗杂志，2009;16(5):497-7.