明胶海绵在尿液细胞块中的应用价值

刘军兰，丁丽华，石 磊（.甘肃省嘉峪关市第一人民医院病理科，甘肃 嘉峪关 7500；.甘肃省嘉峪关市第一人民医院超声科，甘肃 嘉峪关 7500；.甘肃省嘉峪关市第一人民医院泌尿外科，甘肃 嘉峪关 7500）

细胞块在细胞病理学中的地位日渐突出，大大提高细胞病理学诊断的敏感性和特异性。尿脱落细胞检查是膀胱癌诊断和随访的最重要和最可靠的方法[1]。但尿液送检样本多是清亮的样本，离心后沉淀很少，涂片后显微镜下常常没有细胞，阳性率很低，非常容易造成漏诊。细胞块制作就更困难，其应用价值尚不确定。采用明胶海绵作为细胞支架，操作简便有效，效果良好，能有效提高尿液细胞块的制作成功率，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选择2009年1月～2012年12月临床怀疑泌尿系肿瘤患者尿脱落细胞学标本178例。男116例，女62例，年龄23～78岁。所有研究对象均取第1次晨尿150～200 ml。

1.2 方法：①南昌享恩牌医用明胶海绵（规格60 mm×20 mm×5 mm）切成5 mm×5 mm×3 mm的小块放在干燥处备用。②取尿液标本2份，各15 ml，置于一次性尖底试管内，2 000 r/min离心5 min后弃去上清液（血性液需加入适量50%的乙醇溶解红细胞后再离心）。③传统涂片组：1份用试管吸取管底沉淀物直接涂片1～2张，置95%乙醇固定，HE染色。④细胞蜡块组：另1份用眼科镊钳取明胶海绵小块反复涂抹离心沉淀物，将形成的团块用擦净纸包裹，放入10%中性甲醛固定6～12 h后，同其他活检标本一同脱水、石蜡包埋及制片处理。

2 结果

178例尿标本中，用传统涂片检查出癌1例，可疑癌3例，核异质6例，阴性168例，而用细胞蜡块法处理的标本查出癌5例，可疑癌9例，核异质15例，阴性149例。两者之间差异有统计学意义（P＜0.01）。传统涂片组：细胞涂片细胞量少，分布不均匀，结构清晰，部分细胞肿胀，辨认困难，有重叠现象。细胞蜡块组：细胞块连续切片，HE染色后可使碎组织块及细胞结构清晰，着色好，易于镜下观察，并在一定程度保留了原有组织学结构，见图1。免疫组化Envisin法染色定位准确，见图2，试剂需要量少。

图1 明胶海绵为支架制备的细胞蜡块切片（HE×20）

图2 P53在尿细胞蜡块中的阳性表达（Envisin×20）

3 讨论

尿脱落细胞学对膀胱癌、肾盂、输尿管肿瘤的诊断或早期发现有重要意义，但特异性好但敏感性低。分析原因，传统离心涂片因含有大量的液体，涂片范围很大，在镜下观察时很容易漏看；再者采用湿固定法，直接将玻片放入95%乙醇内固定，会造成大多数细胞脱落，如果干燥后再固定，细胞又会严重褪变，细胞核模糊不清，造成误诊。随着免疫学及分子生物学技术的发展，许多膀胱肿瘤标志物渐被发现，其对膀胱癌的早期诊断和治疗，具有重要的临床应用价值[2]。细胞块技术在细胞病理学中的地位日渐突出。细胞块可以连续切片，染色后细胞结构清晰、漂亮，免疫组化染色定位准确，并在一定程度上保留了原有的组织学结构。现有的细胞块技术主要有组织胶水、琼脂包埋法、蛋清凝集法和滤膜法、脱脂棉包埋法等[3-4]。但这些方法通常操作复杂及成本较高，或只适用于细胞量多的材料，且制片和染色效果不稳定。那些清亮、细胞较少的尿液标本，常常无沉淀产生，制片多不成功，制备细胞蜡块的可能性就更小。

笔者针对此问题选择了医用明胶海绵作为尿液的细胞支架。明胶海绵是一种亲水性胶原蛋白制品，系质轻软而多孔的海绵状物，多用于局部止血。利用明胶海绵的多孔及渗透性较强的特点，直接吸附离心管底的液体，尿脱落细胞亦被网络其中不易丢失，起到了良好的细胞支架作用。明胶海绵弹性好，虽经较重的揉搓，不致崩脆，一次离心即可制成不易破碎的细胞模块，有利于快速包埋制片。用明胶海绵作支架处理的尿液细胞标本，HE染色结构清晰，红蓝分明，细胞量多，分布均匀，形态保存完好，重叠现象较少，免疫组化染色定位准确，对细胞特别是肿瘤细胞的识别更加准确。大大提高了细胞病理学诊断的敏感性和特异性。且采用明胶海绵作细胞支架可根据细胞量裁剪海绵大小，用量少，成本低廉，不需特殊防霉处理。本方法适用于各类浆膜腔积液，细胞量少的样本更具有优势，使细胞量少样本制备细胞蜡块的可能性及可靠性明显增加，具有临床应用价值。

[1] Brown FM.It is still the gold standard for screening[J].Urol Clin Noth Am,2000,27(1)：25.

[2] 杨 青,李 俊.膀胱癌尿脱落细胞学检查与尿液肿瘤标志物研究进展[J].安徽医药,2012,16(4)：528.

[3] Craiq F,Soma L,Melan M,et al.MUM1/IRF4 expression in the circulating compartment of chronic lymphocytic leukemia[J].Leuk Lymphoma,2008,49(2)：278.

[4] 龚 伟,朱忆凌,黎庆荣,等.推荐一种简便的细胞块制作方法[J].温州医学院学报,2011,41(4)：356.