妇科标本脱水试剂最佳轮换时间的探讨

马邦磊 蒋丽娟 钱宁

[摘要] 目的 探索妇科标本脱水试剂最佳轮换时间。 方法 选取我科2019年4月1日～11月30日期间每日取材的222个蜡块，用7种不同更轮换试剂方法对其进行脱水效果观察，并根据每次观察情况进行改进以找出最佳更换方案，设为试验组。选取同期每日取材的另外222蜡块，用日常工作更换试剂方案对其进行脱水处理，连续观察42个工作日，设为对照组。再用该最佳更换方案与对照组进行对比，观察前者的脱水效果。 结果 （1）“10%中性福尔马林和75%乙醇实行第12个工作日全更换，梯度乙醇和3道二甲苯实行第12个工作日轮换法，3道石蜡按第15工作日轮换”是最佳脱水试剂更换方法。（2）在对组织的脱水效果方面，该最佳方案和对照组更换方案之间差异无统计学意义（P>0.05）。（3）在节省脱水试剂方面该最佳方案和对照组更换方案之间差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 在保证诊断准确性的前提下，酒精、二甲苯以及石蜡错开时间更换是最经济并能最大程度减少环境污染的一种新的脱水试剂更换方法。

[关键词] 脱水试剂;妇科标本;轮换时间;蜡块;乙醇;二甲苯;石蜡

[中图分类号] R361.2          [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2020）24-0135-04

[Abstract] Objective To explore the best rotation time of dehydration reagents for gynecological specimens. Methods 222 wax blocks taken daily from April 1 to November 30， 2019 were selected， and observed the dehydration effect with 7 different rotating reagent methods， and improved according to each observation to find the best replacement program， which was set as the test group. The other 222 wax blocks that were taken daily from the same period were selected for dehydration treatment with the daily work replacement reagent program， and were observed continuously for 42 working days， which was set as the control group. Then the best replacement program between the observation group and the control group was compared and the dehydration effect of the former was observed. Results （1）"10% neutral formalin and 75% ethanol were replaced on the 12th working day， gradient ethanol and 3 xylenes were rotated on the 12th working day， and 3 paraffins rotated on the 15th working day was the best method for dehydration reagent replacement. （2）In terms of the dehydration effect on tissues， there was no statistically significant difference in the best replacement plan between the test group and the control group（P>0.05）.  （3） There was a statistically significant difference between the test group and the control group in terms of saving dehydration reagents（P<0.05）. Conclusion Under the premise of ensuring the accuracy of diagnosis， the staggered time replacement of alcohol， xylene and paraffin is the most economical and a new method of replacing dehydration reagents that can minimize environmental pollution.

[Key words] Dehydration reagent; Gynecological specimen; Rotation time; Wax block; Ethanol; Xylene; Paraffin

隨着病理学的发展，临床病理技术在医疗过程中起着举足轻重的作用，而病理技术中的组织脱水对病理诊断有着决定性的影响[1]。一张病理切片HE染色质量的好坏除了取决于脱水机的性能，还取决于离体组织是否及时固定，取材组织块的厚薄，脱水试剂的浓度以及脱水试剂的及时更换。全自动组织脱水机的问世，结束了传统的手工脱水，极大地节省了人力，在脱水质量上也得到了很好的保障[2]，又因其处理标本多、稳定性好及安全佳一直倍受各医院病理科和科研机构的青睐[3]。由于每个试剂筒容量大，耗费试剂量大，被广大基层病理科所诟病，本文旨在找出一种既能保证脱水质量又能节省试剂并减少环境污染的新脱水试剂更换法，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我科2019年4月1日～11月30日期间每日取材的222个蜡块，用7种不同更轮换试剂方法对其进行脱水效果观察，并根据每次观察情况进行改进以找出最佳更换方案，设为试验组。选取同期每日取材的另外222蜡块，用日常工作更换试剂方案对其进行脱水处理，连续观察42个工作日，设为对照组。纳入标准：①妇科手术标本。②乳腺手术标本。③按《临床技术操作规范-病理学分册》取材标准进行取材的组织。排除标准：①活检、诊刮等小组织。②非妇科手术标本。对照组和实验组研究组织类型相同、研究对象的取材标准相同以及相同试剂均为同一家生产企业所生产。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器  Thermo Excersior AS全封闭式全自动脱水机，Thermo Histostar包埋机，Leica2235切片机，羽毛一次性刀片，丹麦Dako牌Coverstainer CS-10637 V2.0.0全自动染色封片一体机。

1.2.2 试剂  10%中性缓冲福尔马林，75%、85%、95%及100%乙醇，二甲苯，石蜡，丹麦Dako牌 Hematoxylin（Code CS700）和Eosin（Code CS701）。

1.3 方法

1.3.1 共同方法  ①组织处理方法：所有标本经10%中性缓冲福尔马林固定，按《临床技术操作规范-病理学分册》取材标准进行取材，放入Thermo Excersior AS全封闭式全自动脱水机里进行脱水，第2天进行包埋，切片和H&E染色。②试剂更换方法-轮换法：同一种试剂废弃第一道，后面依次前移，最后一道添加全新试剂。③终止延长试剂更换时间（试剂使用时间最大限度）原则：组织出现脱水欠佳，影响病理诊断准确性时立即终止，当天取材組织进入脱水机之前更换脱水试剂。④脱水欠佳评判标准：组织干枯变硬、脆性大、难以切成片[4]或发软导致切片不全、折叠及漂片时易散开;镜下出现细胞打滚，呈梯田状[5]。⑤染色欠佳评判标准：镜下出现透明度差、组织结构模糊，细胞核着色灰淡或过蓝，核浆染色对比不清晰[6]。

1.3.2 对照组  脱水试剂实行第8个工作日更换法，即10%中性缓冲甲醛和75%乙醇全换新的试剂，梯度乙醇、3道二甲苯和3道石蜡采用轮换法。连续观察42个工作日。

1.3.3 试验组  对试验组脱水试剂的更换采用以下7种方法。①方法1：石蜡按第9～19个工作日轮换，其他试剂均实行第8个工作日更换法（表1-1）。②方法2：二甲苯按第9～15个工作日轮换，其他试剂均实行8个工作日更换法（表1-2）。③方法3：梯度乙醇按第9～15个工作日轮换，其他试剂均实行第8个工作日更换法（表1-3）。④方法4：10%中性缓冲福尔马林和75%乙醇实行第8个工作日全更换，梯度乙醇和3道二甲苯实行第11个工作日轮换法，石蜡按11～18个工作日轮换法（表1-4）。⑤方法5：梯度乙醇和3道二甲苯及3道石蜡实行第11个工作日轮换法，10%中性缓冲福尔马林和75%乙醇实行第9～15个工作日全更换（表1-5）。⑥方法6：10%中性缓冲福尔马林和75%乙醇实行第12个工作日全更换，梯度乙醇和3道二甲苯实行第12个工作日轮换法，石蜡按第12-18工作日轮换（表1-6）。⑦方法7：10%中性缓冲福尔马林和75%乙醇实行第12个工作日全更换，梯度乙醇和3道二甲苯实行第12个工作日轮换法，3道石蜡按第15工作日轮换（表1～7）。

1.4 观察指标

观察组织的质地和染色情况，一旦出现脱水或染色欠佳，立即停止试验并更换试剂，得出组织脱水或染色欠佳的蜡块个数和试剂的总消耗量。质地情况是由我科3位主管技师共同观察后得出，染色情况由我科有5年以上诊断经验的诊断医生镜下观察后得出。

1.5 统计学方法

应用SPSS 23.0统计学软件分析，采用四格表χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组（日常工作）

运行42个工作日，研究9324个蜡块，有25个脂肪组织的蜡块出现脱水或染色不良的情况。

2.2 试验组7种方法之间的比较

方法1试行到第18个工作日时，研究了3774个蜡块，有13个脂肪组织的蜡块出现了脱水欠佳的情况;方法2试行到第14个工作日时，有10个脂肪组织的蜡块出现脱水欠佳的情况;方法3试行到第14个工作日时，有11个淋巴结组织的蜡块出现脱水和染色欠佳的情况;方法4试行到第17个工作日时，有13个淋巴结组织的蜡块出现脱水和染色欠佳的情况;方法5试行到第14个工作日，有10个脂肪组织蜡块出现脱水欠佳的情况;方法6试行到第16个工作日时，有11个脂肪组织蜡块出现脱水欠佳的情况;方法7试行了42个工作日时，有31个脂肪组织蜡块出现脱水欠佳的情况。通过该研究结果，发现方法6和方法7是试验组中不良率和日均耗费试剂量最小的2个方法。欠佳率之间的比较（P=0.985>0.05）和日均耗费试剂量之间的比较（P=0.991>0.05），差异均无统计学意义。方法6研究的蜡块比方法7少的多，方法7为最佳试剂更换方法。见表1、表2及封三图3～10。

2.3 方法7同对照组（日常工作）之间差异的比较

方法7同对照组之间脱水欠佳率之间的比较差异无统计学意义（P=0.423>0.05），日均耗费试剂量之间的比较差异有统计学意义（P=0.000<0.05）。见表3。

3 讨论

3.1 关于纳入及排除标准

病理标本处理周期较长，包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、制片程序。根据标本种类、大小的不同，液体穿透组织的时间也大不相同[1]，由此可见在保证脱水质量的前提下相同浓度的脱水试剂可能会使小标本过度脱水，为了实验结果的可靠性和科学性，本实验把活检及诊刮等标本排除在实验之外。