探讨蜡块脱钙法在常规病理技术制片中的应用

程宇

（浙江大学医学院附属第二医院，浙江 杭州 310008）

0 引言

骨组织中钙盐成分非常丰富，且具有坚硬的特质，所以常规病理技术制片时，往往会出现脱钙不全的情况，使切片不完整，切痕明显，染色不均，大量空洞，给医生工作带来不便，影响诊断结果[1]。因此，需对其采取特殊的方法，使其彻底脱去钙质，按照固定、脱钙、中和、清洗等步骤将蜡块处理好后，严格执行切片措施，结合临床迅速完成病理报告，但这种方法存在一定的缺点，可能会出现切片不够完整、不合格等情况。为探讨分析蜡块脱钙法在常规病理技术制片中的应用，将我院病理科从2018 年5 月至2019 年5 月收集的850 块脱钙不足、钙化灶、砂砾体的蜡块作为研究样本，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择我院病理科从2018 年5 月至2019 年5月收集的850 块脱钙不足、钙化灶、砂砾体的蜡块，选择随机分配法，将蜡块分为对照组和观察组两组，每组各425 块；观察组采取蜡块脱钙法，而对照组采取常规脱钙法。选择全自动染色机（Thermo）、全自动脱水机（Thermo）、全自动石蜡包埋机（Thermo）、轮转式石蜡切片机（Leica2235）等。

1.2 方法

两组均配置50%甲醛乙酸脱钙液；对照组采取常规脱钙法，直接将蜡块进行切片处理；观察组采取蜡块脱钙法，首先把蜡块上多余的蜡清理掉，然后将蜡块最大的切面呈现出来，在这之后将蜡块放置进脱钙液中，使其与脱钙液充分接触，浸泡1 h 后将其取出，最后用清水清洗干净[2]。将两组蜡块固定脱水[全自动脱水机（Thermo）]以后制成病理切片（Leica2235），利用全自动染色机（Thermo）进行染色处理，经过全自动封片机封固后，利用光学显微镜对蜡块进行观察，需要注意的是，在封固期间需要将中性树胶的作用充分发挥出来。

1.3 观察指标

比较两组蜡块的组织结构完整性和染色效果，对比两组蜡块的切片合格情况。蜡块的组织结构完整性表现为切片无切痕，外观平整无空洞；染色效果满意表现为着色清晰分明；切片合格表现为切片完整，厚薄均匀，染色清晰，透明性好，无褶皱、无污染，核质较分明，玻片整洁。

1.4 统计学分析

数据采用SPSS 19.0 统计学软件统计处理，计数资料用率（%）表示，采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较两组蜡块的制片效果

观察组蜡块切片后的组织结构完整的有411 块，完整率达到96.71 %，且切片后颜色十分均匀，所有蜡块染色均令人满意，染色满意率高达100.00 %；对照组蜡块切片后的组织结构大多有残缺现象，只有107 块较完整，完整率只有25.18 %，经过切片后，蜡块颜色较杂，不均匀，且蜡块染色质量也不高，仅有94 块蜡块染色效果较好，满意率仅为22.12 %；比较两组蜡块组织结构完整率χ2=107.481，P=0.000；对比蜡块染色满意率χ2=127.547，P=0.000。两组蜡块组织结构完整与满意情况差异较大，P＜0.05，有统计学意义。

2.2 对比两组蜡块的切片合格情况

观察组蜡块切片合格率（100.00 %）高于对照组（24.00 %），差异显著，P＜0.05，有统计学意义，见表1。

表1 对比两组蜡块的切片合格情况[n(%)]

3 讨论

骨组织属于结缔组织，由细胞间质、纤维与数种细胞构成，钙化的细胞间质是骨组织的基础，它也叫做骨基质，骨基质包括有机成分与无机成分，这两种化学成分结合紧密，从而让骨质变得坚硬，导致切片困难[3]。在常规病理技术制片时，因骨组织中存在丰富的钙盐沉淀，使骨组织十分坚硬，难以切片，此时必须采取脱钙处理，需要注意脱钙彻底，否则会导致切片碎裂，破坏切片的完整性[4]。若要利用常规病理制片处理含钙组织必须先进行固定，使细胞保持生前的状态，然后进行脱钙，采取对组织伤害小且适合染色的脱钙液将钙盐从含钙组织中的胶原纤维分离出来[5]。脱钙液一般选择一定浓度的硝酸或者盐酸（本院脱钙液为50 %甲醛乙酸），其脱钙效果好，对切片质量也有一定的提升[6]。

国内临床常采取脱钙液进行脱钙，将选好的组织块放进脱钙液中稀释脱钙，脱钙时间长，不同的脱钙液有不同的脱钙时间，至少需要2 d，最长7 d才能脱钙，对骨组织的研究带来了巨大的影响[7]。同时会出现脱钙不足、钙化灶、砂砾体的情况，如果直接切片，会导致切片合格率低，即使切片合格，还会出现切片完整性不高、染色不均等情况，使诊断的准确性受到严重的影响[8]。因此，需要寻求一种有效可行的脱钙方法，既需要保障切片的完整性和染色效果，又要使抗原与超微结构能够被完整保存[9]。而蜡块脱钙法对常规病理技术制片的效果非常不错，能使组织结构保持完整性，没有切片痕迹，且切片染色均匀，提高了诊断的准确性。蜡块脱钙法可使骨组织里的钙质彻底清理掉，且在脱钙期间无需更换脱钙液，此外，0.5～1 h 就能完成脱钙，能有效提高工作效率[10]。

本研究显示，使用常规脱钙法的蜡块组织结构完整性为25.18 %，染色满意度为22.12 %，蜡块切片合格率为24.00 %；使用蜡块脱钙法的蜡块组织结构完整性为96.71 %，染色满意度为100.00 %，蜡块切片合格率为100.00 %；结果显示，蜡块脱钙法的脱钙效果比常规脱钙法好，差异显著，P＜0.05，有统计学意义。

综上所述，在常规病理技术制片中使用蜡块脱钙法可保持蜡块组织结构完整性，提高染色满意率和蜡块切片合格率，除此之外，蜡块脱钙法具有较高的安全性，操作时间短，值得临床使用。