复方鼻炎宁滴鼻剂的质量控制

卢金凤，蒲旭峰

(1．成都中医药大学药学院，四川 成都 610072;2．四川省成都市药品检验所，四川 成都 610045)

复方鼻炎宁滴鼻剂由辛夷、甘草等组方，具有通鼻窍、清肝润肺、解毒宣肺、发散风寒的功效，主要用于急性鼻炎和慢性鼻炎急性发作。辛夷为木兰科植物望春花、玉兰或武当玉兰的干燥花蕾[1]，活性成分木兰脂素[2]有抗炎[3]、镇痛、抗过敏反应[4]及抗血小板活性因子的活性作用[5]。甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根及根茎，三萜皂苷(甘草酸)和黄酮类是其主要活性成分[6]。甘草酸主要有抗菌、抗病毒[7]、抗炎[8]、抗变态反应作用，并能增强巨噬细胞吞噬功能和细胞免疫功能[9]，因此，采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中甘草酸、木兰脂素含量，可作为复方鼻炎宁滴鼻剂的质量控制方法。

1 仪器与试药

岛津LC-10AT型液相色谱仪;SPD-10A型UV检测器;Shimadzu Lcsolution色谱工作站;超声波处理器。甘草酸单铵盐对照品(批号为110723-200609，供含量检测用)，木兰脂素对照品(批号为110801-200724，供含量检测用)，由中国药品生物制品检定所提供;乙腈、四氢呋喃为色谱纯，水为高纯水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2．1 甘草酸

2．1．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Inertsil ODS-3 柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈 -0．01 mol/L 磷酸(36∶64);流速:1．0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:252 nm;进样量:10 μL。系统适用性试验结果表明，对照品溶液和供试品溶液均有相应的峰出现，在甘草酸相应的保留时间处阴性对照品溶液无吸收峰，处方中的其他成分不影响甘草酸的含量测定(见图1)。

图1 高效液相色谱图

2．1．2 溶液制备

取甘草酸单铵盐对照品10 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含甘草酸单铵盐对照品0．2 mg，折合甘草酸为0．195 9 mg)。取本品2 mL，加甲醇约45 mL，超声处理30 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例根据本品制备工艺，制备不含甘草的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。

2．1．3 方法学考察

线性关系考察:精密称取甘草酸单铵盐对照品8．66 mg，置25 mL容量瓶中，加适量甲醇超声使溶解，放冷后加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品储备液。用甲醇分别稀释至质量浓度为83．136，166．272，249．408，332．544，415．68 μg/mL。精密吸取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，以峰面积为纵坐标(Y)、进样量(μg)为横坐标(X)绘制标准曲线，回归方程 Y=548 141 X ＋52 851，r=0．999 1(n=5)。结果表明，甘草酸单铵盐质量浓度在83．136～415．68 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果甘草酸峰面积的 RSD为0．74%，表明方法精密度良好。

重现性试验:取同批样品，按供试品溶液制备方法制备6份溶液，按上述色谱条件进样测定。结果甘草酸含量的 RSD为0．26%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h时进样10 μL。结果甘草酸峰面积的 RSD为0．24%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密量取2 mL已知含量的复方鼻炎宁滴鼻剂 9 份，分别加入甘草酸单铵盐对照品 0．8，1．0，1．2 mL，按供试品溶液方法制备，在上述条件下进行含量测定，进样量10 μL，计算回收率。结果平均回收率99．44%，RSD为0．61%(n=9)。

2．1．4 样品含量测定

照拟订的含量测定方法，对3批样品进行含量测定，结果见表1。以3批样品平均含量80%作为本品含量的下限，即每1 mL含甘草酸不得低于2．03 mg。

表1 样品含量测定结果(g/L，n=2)

2．2 木兰脂素

2．2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil(钻石)C18柱(200 mm ×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈-四氢呋喃-水(39∶1∶60);流速:1．0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:278 nm;进样量:10 μL。试验结果表明，对照品溶液和供试品溶液均有相应的峰出现，在木兰脂素相应的保留时间处阴性对照品溶液无吸收峰，处方中的其他成分不影响木兰脂素的含量测定(见图2)。

2．2．2 溶液制备

取木兰脂素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含木兰脂素对照品16 μg的溶液，即得对照品溶液。精密吸取本品5 mL，置25 mL容量瓶中，加入乙酸乙酯约20 mL，超声处理30 min，取出，放冷，再加入乙酸乙酯至刻度，摇匀，萃取，取上层5 mL加入中性氧化铝柱(100～200目，2 g，内径9 mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5 mL预洗)，用甲醇15 mL洗脱，收集洗脱液，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。按处方比例根据本品制备工艺，制备不含辛夷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。

图2 高效液相色谱图

2．2．3 方法学考察

线性关系考察:精密称取木兰脂素对照品8．40 mg，置l0 mL容量瓶中，加适量甲醇超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。用甲醇分别稀释至质量浓度为:1．68，3．36，8．4，16．8，33．6 μg/mL。精密吸取对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进样分析，测定峰面积，回归方程为 Y=0．000 2 X-0．007 9，r=0．999 7(n=5)。结果表明，木兰脂素质量浓度在1．68～33．6 μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果木兰脂素峰面积 RSD为0．49%(n=6)，表明方法精密度良好。

重现性试验:取同批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备6份溶液，按上述色谱条件进样测定。结果木兰脂素含量的RSD为1．11%，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 时进样10 μL。结果木兰脂素峰面积 RSD为0．35%(n=5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

加样回收试验:精密量取2 mL已知含量的复方鼻炎宁滴鼻剂 9 份，分别加入木兰脂素对照品 0．8，1．0，1．2 mL，按供试品溶液方法制备，在上述条件下进行含量测定，进样量10 μL，计算回收率。结果平均回收率100．95%，RSD为0．83%(n=9)。

2．2．4 样品含量测定

按拟订的含量测定方法，对3批样品进行含量测定，结果见表1。以3批样品平均含量的80%作为本品含量的下限，即每1 mL含木兰脂素不得低于0．334 mg。

3 讨论

在制备供试品溶液时，对甘草酸、木兰脂素的提取溶剂、提取时间、提取方法均进行了考察，优选出最佳制备方法，根据二极管列阵检测器检测结果，并参照2010年版《中华人民共和国药典(一部)》辛夷项下木兰脂素的测定方法及相关文献资料[1，10]，选择278 nm作为检测波长。并对流动相、色谱柱进行选择，使保留时间、分离度和理论塔板数达到要求。方法学考察结果表明，方法简便可行，专属性好，检测结果可靠。

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