接骨七厘胶囊质量标准研究＊

蔡步林，龙甜甜，郑金凤，李文莉

(湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙 410000)

接骨七厘胶囊由乳香、没药、当归、土鳖虫、骨碎补、硼砂、龙血竭、自然铜和大黄9味中药组成，具活血化瘀、接骨止痛的作用。现行质量标准中已有硼砂、大黄、龙血竭的薄层色谱鉴别，而乳香等君药没有质控指标[1]。采用薄层色谱法对乳香进行了定性鉴别，并采用高效液相色谱法测定骨碎补中柚皮苷的含量，为该制剂的质量控制提供了快速、准确的测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型series高效液相色谱仪;CG300型超声仪。乳香对照药材(供鉴别用，批号为0970-200202)，柚皮苷对照品(供含量测定用，批号为110722-200610)，均购自中国药品生物制品检定所;接骨七厘胶囊由企业提供(规格每粒0．26 g)，阴性样品按处方自制;甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 乳香薄层色谱鉴别[2-3]

取本品内容物1 g，研细，加乙醇50 mL，回流提取1 h，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，作为供试品溶液。按处方称取缺乳香的其他药材，制成缺乳香的阴性对照样品，同供试品溶液制备方法制成缺乳香的阴性对照品溶液。另取乳香对照药材0．2 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条斑，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，放置2 h后，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同的斑点，缺乳香的阴性对照品溶液色谱中有部分斑点与对照药材溶液色谱一致，但未见对照药材溶液色谱中的黄绿色斑点(图1)，故可作为质量控制指标，并规定“供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上，应显相同的黄绿色斑点”。

2．2 柚皮苷含量测定[4-5]

2．2．1 色谱条件

色谱柱:Agilent TC C18柱(250 mm × 4．6 mm，5 μm);流动相:甲醇 -0．1%磷酸(30 ∶70);流速:0．8 mL/min;检测波长:283 nm;柱温:35 ℃;进样量:10 μL。

2．2．2 溶液制备

取柚皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品内容物(批号为110903)，研细，取约1 g，精密称定，加水80 mL，置70℃热水中保温2 h，离心，取上清液减压浓缩至约10 mL，转移至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得供试品溶液。按处方取除骨碎补外的其余药材，制成缺骨碎补阴性样品，照供试品溶液制备方法同法制成缺骨碎补阴性对照品溶液。

2．2．3 方法学考察

系统适用性试验:分别吸取柚皮苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图2。供试品溶液中柚皮苷能基线分离，分离度大于2．0，理论板数按柚皮苷峰计算不低于3 000，阴性对照品溶液在对照品色谱峰相应位置无色谱峰出现，表明样品中其他成分对柚皮苷测定无干扰。

线性关系考察:精密吸取对照品溶液(21．92 μg/mL)1，2，5，10 μL 和对照品溶液(219．2 μg/mL)1，2，5，10 μL，注入液相色谱仪测定，以峰面积积分值为纵坐标、进样量为(μg)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为 Y=2．298 2X＋0．940 7，r=0．999 9(n=6)。结果表明，柚皮苷对照品进样量在0．021 92～2．192 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一供对照溶液，依法测定6次。结果峰面积的 RSD为0．8%(n=6)，表明仪器精密度良好。

图1 乳香薄层色谱图

图2 高效液相色谱图

重复性试验:取同一批号样品(批号为110903)，依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果平均含量为0．226 mg/粒，RSD为0．9%，重复性好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液(批号为110903)，分别于配制后的 0，2，4，6，8，10，12，24 h 时，精密吸取 10 μL，注入液相色谱仪，测定。结果柚皮苷峰面积 RSD为0．5%(n=8)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:取装量差异项下已知含量的样品(批号为110903)，研细，取约0．5 g(共6份)，精密称定，精密加入柚皮苷对照品适量，依法制备供试品溶液，测定并计算。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2．2．4 样品含量测定

取3批样品，分别制备供试品溶液，依法测定并计算含量。结果批号为110901，110902，110903的样品中每粒含柚皮苷0．25，0．23，0．22 mg。

3 讨论

经过不断摸索试验，制订了乳香的鉴别方法。该方法特征斑点明显，色谱分离清晰，可用作接骨七厘胶囊中乳香的专属性鉴别。取对照品溶液，照紫外分光光度法在200～390 nm波长范围内扫描，结果在283．1 nm波长处有最大吸收，并参考2010年版《中国药典(一部)》骨碎补含量测定项，选择283 nm作为检测波长。分别采用甲醇-水(30∶70)、甲醇-0．1%磷酸(30∶70)、乙腈 -水(25∶75)作为流动相，结果表明，甲醇-0．1%磷酸(30∶70)流动相可用于接骨七厘胶囊中柚皮苷的含量测定。

[1]WS3-424(Z-72)-2010Z，国家食品药品监督管理局国家药品标准[S]．

[2]范 彬．归附调经颗粒的质量标准研究[J]．中国中医药信息杂志2011，18(11):55-58．

[3]孙 磊．乳香基原的本草学、植物学和成分分析研究[J]．中国中药杂志，2011，2(36):112-116．

[4]程东岩．HPLC法测定结肠炎奇效颗粒中柚皮苷的含量[J]．中国药师，2011，14(11):1 620-1 621．

[5]马才敬．炮制骨碎补的提取及其柚皮苷的纯化研究[J]．中国药业，2012，2(21):43-44．