百眼藤抗炎镇痛作用有效部位的筛选

肖静，朱梦军，肖晖 （武汉市第三医院药学部，湖北 武汉430060）

百眼藤来源于双子叶植物茜草科巴戟天属植物百眼藤MorindaparvifoliaBartl．ex DC．的干燥藤茎，俗称咸鱼头、五眼子、小叶羊角藤等［1－2］。本品味微甘，性凉，具有清热解暑，祛风活络，消肿止痛、化痰止咳的功效，主要用于肢体筋骨酸痛，风湿痹痛，跌打损伤，感冒咳嗽，肺炎等。本品主要分布于我国南部广东、广西、福建等地区，为两广地区习用药材，广东全省各地均产，资源非常丰富，收载于《广东省药材标准》［1］，为了明确该药的作用特点，本研究对其抗炎镇痛作用及有效部位进行比较研究，以期为其临床应用提供实验依据。

1 材料

YLS－6A智能热板仪（山东省医学科学院设备站）；紫外可见光分光光度计（美国Agilent－8453E型）；德国Sartorius BP211D电子分析天平（d＝0．00001 g）；XS225A型分析天平（d＝0．0001g）；DFY－200型粉碎机（浙江温岭市大德中药机械有限公司）；HH－4型数显恒温水浴锅（上海浦东物理光学仪器厂）；KQ－500型超声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司，工作频率：40 kHz；超声电功率：500 W）。

百眼藤植物购自广东省德庆市高粱镇，经武汉市第三人民医院药学部陈永刚副主任中药师鉴定为巴戟天属植物百眼藤MorindaparvifoliaBartl．ex DC．的干燥藤茎。百眼藤水提取物的制备：取干燥药材，按10倍量加水浸泡30 min，加热煮沸45 min，滤过，滤渣加8倍量水再提取1次，合并滤液并减压浓缩至适当体积，制得百眼藤水提物浓缩液，置4℃冰箱保存备用，用前用纯化水适当稀释至所需浓度；百眼藤70%醇提物的制备：取干燥药材，按10倍量加70%乙醇浸泡30 min，加热回流提取45 min，滤过，滤渣加8倍量70%乙醇再提取1次，合并滤液并减压浓缩至无乙醇味，制得百眼藤醇提物浓浸膏，置4℃冰箱保存备用，用前用纯化水适当稀释至所需浓度。

吲哚美辛（广东华南药业集团有限公司，批号121101）；依文思蓝（国药集团化学试剂有限公司，批号20110626）；二甲苯、冰醋酸、氯仿、乙醇、醋酸乙酯、石油醚等试剂均为分析纯。

昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18～22 g，购自广州中医药大学实验动物中心。许可证号：SCXK（粤）2008－0020。正常饲养3 d后供试。

2 方法

2．1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响［3－4］取小 鼠 80只，随机分成空白对照组、吲哚美辛组、百眼藤水提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1）、百眼藤醇提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1），共8组，每组10只，分组及给药剂量见表1，连续给药5 d。于末次给药60 min后，取二甲苯30μL均匀涂在各小鼠右耳的内外两面致炎，左耳做对照。30 min后将小鼠脱颈椎处死，剪下小鼠的左右耳，用7 mm打孔器分别在两耳同一部位打下圆形耳片，再用精密电子天平称取左右耳片的质量并计算差异，以此作为各小鼠的耳肿胀程度。

2．2 对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响［3，5］取小鼠80只，随机分成空白对照组、吲哚美幸组、百眼藤水提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1）、百眼藤醇提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1），共8组，每组10只，分组及给药剂量见表1，连续给药5 d。末次给药45 min后，小鼠尾静脉注射0．5%伊文思蓝生理盐水溶液10 mL·kg－1，随即腹腔注射0．6%冰醋酸0．2 mL／只。20 min后处死小鼠，腹腔内注入生理盐水6 mL，使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀，然后吸取腹腔洗液以3 000 r·min－1离心15 min，取上清液于波长590 nm处，测定吸光度值（A值）。

2．3 对醋酸所致小鼠扭体反应的影响［3，5］取小鼠80只，随机分成空白对照组、吲哚美幸组、百眼藤水提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1）、百眼藤醇提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1），共8组，分组及给药剂量见表1和表2，连续给药5 d。于末次给药后45 min给每只小鼠腹腔注射0．7%冰醋酸10 mL·kg－1，观察小鼠15 min内的扭体次数。

2．4 对热刺激所致小鼠疼痛反应的影响［3，6］取雌性小鼠80只，先用智能热板仪筛选合格小鼠，取给药前痛阈值在5～30 s内的合格小鼠随机分成空白对照组、吲哚美幸组、百眼藤水提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1）、百眼藤醇提物高、中、低3个剂量组（剂量均按生药量计，分别为20，10，5 g·kg－1），共8组，分组及给药剂量见表1，连续给药5 d。于末次给药45，90 min后分别记录小鼠给药后痛阈值，计算痛阈值提高百分率。

2．5 有效部位筛选 根据“2．1～2．4”项下实验所得结果，选效果较佳溶剂，照“1．1”项下样品制备方法，加10倍量溶剂加热提取两次，合并提取液减压浓缩至干，残渣混悬于水溶液中，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯萃取，与水层物得到4个不同极性部位，减压回收溶剂至干，混悬于适当体积纯化水中，备用。照“2．1～2．4”方法，剂量均按生药量计，灌胃给予10 g·kg－1，连续5 d，比较各萃取部位的抗炎镇痛效果，进一步筛选百眼藤抗炎镇痛活性部位。

2．6 统计学处理 采用SPSS16．0统计分析软件进行统计处理，数据用±s表示，以P＜0．05为差异有统计学意义。

3 结果

3．1 百眼藤水提物和醇提物的抗炎镇痛作用比较 如表1所示，实验结果表明，百眼藤水提物和醇提物能显著抑制二甲苯引起的耳肿胀和醋酸引起的毛细血管通透性增加，明显减轻醋酸引起的扭体疼痛反应，在一定程度上降低小鼠热刺激痛阈值，提示百眼藤具有较明显的抗炎镇痛作用，且同等生药浓度剂量下70%醇提物优于水提物。

3．2 百眼藤不同极性溶剂萃取物的抗炎镇痛作用 如表2所示，结果表明，与空白组比较，百眼藤氯仿萃取物能显著减轻耳肿胀程度（P＜0．01），明显减轻扭体疼痛反应（P＜0．01），降低小鼠45 min热刺激痛阈值（P＜0．05）；醋酸乙酯部位亦能明显减轻耳肿胀程度（P＜0．01），明显减轻扭体疼痛反应（P＜0．01），降低小鼠45 min热刺激痛阈值（P＜0．05）；石油醚部位和水层物作用不明显；氯仿和醋酸乙酯部位两者的相互比较，氯仿更佳，且差异具有统计学意义（P＜0．05）。提示百眼藤中中等极性部位具有抗炎镇痛作用，即氯仿萃取物是抗炎镇痛活性部位。

表1 百眼藤水提物和醇提物的抗炎镇痛作用比较（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of the anti－inflammatory and analgesic effects between water and alcohol extracts of Morinda parvifolia（±s，n＝10）

表1 百眼藤水提物和醇提物的抗炎镇痛作用比较（±s，n＝10）Tab 1 Comparison of the anti－inflammatory and analgesic effects between water and alcohol extracts of Morinda parvifolia（±s，n＝10）

注：与空白组比较，aP＜0．05，b P＜0．01

组别 剂量／g·kg－1耳肿胀度／mg A值 痛域提高百分率／%45 min 90min 扭体次数空白对照组 － 9．4±1．3 0．782±0．135 18．3±8．0 23．5±6．2 40．4±6．7吲哚美辛组 0．08 4．3±1．5b 0．301±0．153b 78．2±10．8b 71．4±16．3b 12．6±5．4b百眼藤水提物组 20 5．2±1．1b 0．372±0．133b 55．2±23．1b 52．3±10．4b 18．3±3．5b 10 6．2±1．6a 0．401±0．126a 42．2±15．3 36．6±12．5 22．4±8．4a 5 7．0±1．7 0．451±0．134a 36．8±10．2 30．5±3．7 30．5±14．3百眼藤醇提物组 20 4．3±1．2b 0．321±0．162b 66．5±16．4b 58．3±22．4b 16．4±5．3b 10 5．0±1．4b 0．327±0．172b 53．2±25．4b 47．5±18．4b 20．4±10．5b 5 6．3±1．6 0．425±0．159a 40．5±16．3 35．3±20．4 27．3±12．5a

表2 百眼藤不同萃取物的抗炎镇痛作用比较（±s，n＝10）Tab 2 Anti－inflammatory and analgesic effects of different polar extracts of Morinda parvifolia（±s，n＝10）

表2 百眼藤不同萃取物的抗炎镇痛作用比较（±s，n＝10）Tab 2 Anti－inflammatory and analgesic effects of different polar extracts of Morinda parvifolia（±s，n＝10）

注：与空白组比较，aP＜0．05，b P＜0．01

组别 剂量／g·kg－1耳肿胀度／mg痛域提高百分率／%45 min 90min 扭体次数空白对照组 － 9．6±2．0 19．4±10．6 25．3±11．4 38．4±17．4吲哚美辛组 0．08 4．2±1．5b 75．3±25．2b 68．3±17．4b 14．3±3．6b石油醚萃取物组 10 7．2±2．5 45．6±19．3a 40．3±20．5a 23．3±10．5a氯仿萃取物组 10 4．7±1．4b 70．3±18．4b 67．3±18．4b 16．4±8．3b醋酸乙酯萃取物组 10 5．8±2．0a 63．5±22．4b 57．2±15．3b 20．6±6．4a水层物组 10 7．4±1．5 36．2±25．4 30．4±10．4 26．5±9．2

4 讨论

类风湿性关节炎患者大多以关节组织慢性炎症性病变、关节疼痛肿胀甚至晚期关节强直为主要表现，因此抗炎镇痛、缓解急性发作症状至今仍为临床上主要治疗方法之一。疼痛是机体受到不良刺激或损伤后产生的信号和反应，是许多疾病常见的症状；炎症是机体对组织损伤或致病因子侵入所产生的以防御为主的反应。作用在于杀灭微生物、清除异物和自身伤亡细胞或组织，以防止损伤扩大并促进受损组织修复。百眼藤具有祛风活络，消肿止痛功效，民间常以单味药浓煎或与其他药配伍用于风湿病的治疗。本实验采用经典疼痛和炎症模型来筛选百眼藤提取物抗炎镇痛作用的有效部位，以期阐明百眼藤抗炎镇痛的作用特点和物质基础，为其的综合开发利用提供基础。

本研究结果表明，百眼藤具有明显的抗炎和镇痛作用，而且同等剂量的醇提物作用强于水提物，说明采用醇提工艺可以获得百眼藤中更多的有效成分。自70%提取部位中萃取分离到的4个极性部位的药理实验结果发现，百眼藤氯仿、醋酸乙酯部位能减轻二甲苯诱导的小鼠耳肿胀程度，抑制醋酸引起小鼠扭体反应，但氯仿效果更佳。

［1］广西壮族自治区革命委员会卫生局．广西本草选编：上册［M］．广西人民出版社，1974，172．

［2］国家中医药管理局．中华本草：第六卷［M］．上海科学技术出版社，1999：5805．

［3］陈奇．中药药理研究方法学［M］．2版．北京：人民卫生出版社，2006：300，366－367．

［4］秦孝智，王丹，张红英，等．马齿苋不同提取物的抗炎镇痛耐缺氧作用［J］．中国医院药学杂志，2010，30（22）：1909－1911．

［5］钱丽娜，陈平，陈新，等．竹节参地上部分中总皂苷成分抗炎镇痛活性［J］．中国医院药学杂志，2008，28（20）：1731－1733．

［6］王玉亮，张磊，辛海量．水龙骨镇痛抗炎有效部位的筛选［J］．中国医院药学杂志，2008，28（20）：1749－1751．