239例老年非肠道疾病患者肠道菌群状况研究＊

傅朝晖，王文丽，张 滨

（1.重庆市第三人民医院老年科，重庆400014；2.重庆医科大学公共卫生学院，重庆400015）

239例老年非肠道疾病患者肠道菌群状况研究＊

傅朝晖1，王文丽1，张 滨2△

（1.重庆市第三人民医院老年科，重庆400014；2.重庆医科大学公共卫生学院，重庆400015）

目的了解重庆市不同年龄和不同病种非肠道老年疾病患者菌群变化规律，探索老年疾病与肠道菌群的关系。方法选取重庆市239例确诊主要3种非肠道老年疾病患者，观察大便培养中6种主要的肠道细菌变化，同时与50例非老年疾病患者进行对照。结果在肠道菌群（肠杆菌、肠球菌、拟杆菌、双歧杆菌、乳杆菌、梭杆菌）中，老年疾病患者与非老年病患者比较除双歧菌外其余差异无统计学意义（P＞0.05）；而老年糖尿病患者与非糖尿病，双歧杆菌、乳杆菌以及双歧杆菌与肠杆菌的比值（B/E值）显著下降（P＜0.05），肠杆菌明显增多（P＜0.05）；而不同年龄段的老年人中，70～89岁B/E值显著下降（P＜0.05）。结论肠道菌群中，双歧菌、乳杆菌和肠杆菌与老年糖尿病和老年年龄有关。

肠道菌群；老年疾病；双歧杆菌

肠道已知的500余种细菌构成了肠道微生态，与人体的营养、生物拮抗、免疫、抗肿瘤和防止衰老有关［1］。老年疾病本质是与人体微生态失衡有关。本研究了解本地区老年人的肠道微生态的状况，探索与疾病和寿命的关系，为老年疾病的防治提供依据。

1 对象与方法

1.1 对象 为本院近3年确诊的重庆市老年疾病患者239例［均大于60岁，平均年龄（78.5±6.6）岁，其中男199例，女40例）］。不同年龄分组（60～69岁组，18例；70～79岁组，121例；80～89岁组，91例；≥90岁组，9例）；另选取本地老年人50例［均大于60岁，平均年龄（69.6±4.26）岁，其中男26例，女24例］作为对照组，两组年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05），所有研究对象近1个月内无腹泻，未用抗菌药物，未进食酸奶，饮食为重庆人常进饮食。

1.2 方法 分别测定肠道常见的细菌。标本的采集：用经灭菌的棉签挑取受试者自然排出的新鲜粪便约3～59g，放入无菌干燥的采便盒内，立即送检，所需时间严格控制在30min之内。标本的处理和接种：称取送检的粪便1.0g，用灭菌稀释液进行连续的10倍稀释，稀释至10－8，振荡混匀，制成均匀悬液，每个不同稀释度分别取50μL，用“L”棒均匀涂抹于不同的培养基上，分别进行厌氧和需氧培养。同时大便涂片镜检找霉菌。培养：肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母菌等（36±1）℃、24 h需氧培养；类杆菌、双歧菌、乳杆菌、梭菌、拟杆菌（36±1）℃、48h厌氧培养。培养后，计数上述平板培养皿中菌落数，菌落数在第3稀释度未检出者即计为阴性。以菌落形态、革兰染色镜检、生化反应等鉴定计数菌落，自菌落群适中的稀释度，算出同一稀释度平均菌落数，计算出每克标本中的菌含量即每克湿便中的菌数＝平均菌落数×稀释倍数×500。鉴定方法如下，肠杆菌：计数发酵乳糖、染色镜检为G－杆菌的所有菌落；肠球菌：计数有明显褐色圈、染色镜检为G－球菌的所有菌落；双歧菌：食品卫生微生物检验双歧菌检验；乳杆菌：G＋无芽胞杆菌、触酶阴性、APICH50；拟杆菌：G－无芽胞杆菌、API20A；梭杆菌：G＋芽胞杆菌。主要计算肠道菌群中的肠杆菌、肠球菌、双歧杆菌、乳杆菌、拟杆菌、梭杆菌等6种细菌。

1.3 统计学处理 所有计量数据以±s表达，两两比较用t检验，多组比较采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 老年患者与正常对照组各种肠道菌群的比较 老年患者与正常对照组各种肠道菌群除梭杆菌外，其余菌群比较差异无统计学意义，见表1。

表1 老年患者与正常对照组各种肠道菌群的比较（±s）

B/E：双歧杆菌与肠杆菌的比值；＊：P＜0.05，与正常值梭杆菌比较。

组别n肠杆菌 肠球菌 拟杆菌 双歧杆菌 乳杆菌 梭杆菌 B/E正常组 50 9.15±2.02 8.37±1.86 7.28±3.86 7.74±2.97 6.81±3.46 4.48±2.55 0.91±0.51老年患者239 9.23±1.25 8.01±1.86 8.01±3.23 8.01±2.16 7.34±2.50 3.35±1.69＊0.89±0.28

2.2 糖尿病与非糖尿病患者肠道菌的比较 糖尿病患者与非糖尿病组比较，肠杆菌增加，双歧杆菌、乳杆菌减少，双歧杆菌与肠杆菌的比值下降（表2）。

表2 糖尿病与非糖尿病患者肠道菌的比较（±s）

表2 糖尿病与非糖尿病患者肠道菌的比较（±s）

＊：P＜0.05，与非糖尿病患者比较。

肠道菌 糖尿病（n＝55） 非糖尿病（n＝184）9.140 7±1.285 7肠球菌 8.296 0±1.420 8 7.919 7±1.971 8拟杆菌 8.060 5±2.318 5 7.991 2±3.456 6双歧杆菌 7.024 5±1.847 3＊8.310 8±2.166 5乳杆菌 6.751 5±2.856 5＊7.516 0±2.358 9梭杆菌 3.282 7±1.911 0 3.376 5±1.617 3 B/E 0.741 0±0.196 0＊肠杆菌 9.535 1±1.076 3＊0.928 0±0.286 0

2.3 不同年龄组肠道菌群的变化 不同年龄组肠道菌群的变化，采用组间的两两比较的方差分析。从表3可以看出，70～89岁组老年人B/E值较60～69岁组明显下降，但是90岁以上老人B/E值又较70～89岁组增加。

表3 不同年龄组肠道菌群的变化（±s）

表3 不同年龄组肠道菌群的变化（±s）

＊：P＜0.05，与60～69岁组比较。

肠道菌 60～69岁（n＝18）70～79岁（n＝121）80～89岁（n＝91）≥90岁（n＝9）8.88±1.34 9.35±1.16 9.22±1.30 8.50±1.55肠球菌 7.45±1.58 7.97±1.89 8.15±1.87 8.17±1.98拟杆菌 7.98±2.94 7.85±3.23 8.25±3.24 7.85±2.35双歧杆菌 8.93±2.38 7.87±2.20 8.00±2.06 8.17±2.00乳杆菌 7.51±2.14 7.26±2.58 7.44±2.52 7.01±1.98梭杆菌 3.86±2.16 3.10±1.26 3.55±1.94 3.74±2.46 B/E 1.04±0.36 0.85±0.27＊0.89±0.27 0.99±0.27肠杆菌＊

3 讨 论

肠道微生态与人的寿命、健康密切相关，构成肠道微生态的已知细菌多达500余种，包括厌氧菌、需氧菌、蒹性厌氧菌、真菌等，其中以双歧杆菌和乳酸杆菌等专性厌氧菌占绝大多数（称为益生菌），其次是大肠杆菌和链球菌为主的蒹性厌氧菌（称为共生菌），而具有机会致病性的需氧菌如变形杆菌、单胞菌等（称为过路菌）极少。正常情况下，这些微生物互相依存，又互相制约，保持一定的数量和比例，维持肠道的微生态平衡，对人体的营养、免疫调节、抗衰老和抗肿瘤等具有重要作用。

肠道的益生菌（以双歧杆菌为主）的专性厌氧菌，与肠黏膜上皮表面的特异性受体结合或插入细胞间隙，形成相当固定的菌膜结构，具有抑制肠道需氧的潜在致病菌的作用，这种作用称为肠道定植抗力［2］，一般以双歧杆菌与肠杆菌的比值（B/E值）来作为肠道抗定植力的指标，其比值小于1表示肠道抗定植力受损［3］。本文发现，重庆地区非肠道老年疾病患者与正常老年人肠道菌群分布比较差异无统计学意义，B/E值总体均小于1，特别是在70岁以后尤为明显，表明老年人的肠道定植抗力下降，易发生肠道菌群的失调。而老年糖尿病患者B/E值比老年非糖尿病患者明显下降，两者之间有显著差异，说明糖尿病患者肠道定植抗力受损更为明显。

糖尿病患者由于糖代谢异常，血糖增高，二糖酶活性降低、黏液素分泌增多、肠道通透性增加等一系列生理变化，使肠道细菌黏膜屏障发生改变。研究表明在糖尿病大鼠乳杆菌、双歧杆菌减少，并随着糖尿病治疗血糖下降而升高［4］。本文发现老年糖尿病患者乳杆菌、双歧杆菌减少，与别明江等［5］的研究一致。肠道菌群的改变，会影响营养物质的吸收和肠道的免疫力，免疫力的下降使肠道的有害细菌大量繁殖，产生菌群失调。本文也发现老年糖尿病患者肠杆菌增加，B/E值下降，说明糖尿病患者肠道定植抗力下降。研究发现肠道菌群在一定程度上影响糖尿病的发生、发展。在动物实验和糖尿病患者中发现肠道菌群改变，肠道通透性增加，肠道黏膜免疫改变，使得免疫耐受失败，导致1型糖尿病的自身免疫［4］。肠道菌群的改变还可以促进2型糖尿病的发生，因为乳杆菌、双歧杆菌减少，发酵消化食物的作用下降，同时这些细菌产生一种让脂肪进入人体脂肪细胞的“大门”保持关闭的“引发禁食脂肪细胞因子”（FIAF）的酶减少，物质代谢的改变，能量的内稳态破坏，会导致胰岛素抵抗及2型糖尿病的发生［6］。

据研究，双歧菌具有抗衰老作用，双歧菌的多少与寿命的长短相关。国内文献报道长寿老人肠道双歧杆菌数量增加。本研究发现，在70～89岁老年人B/E值较60～69岁老年人B/E值明显下降，说明70～89岁老年人肠道定植力受损，但是90岁以上老人B/E值较70～89岁老年人又显著增加，说明高龄长寿老人肠道定植力增强，年龄和双歧菌呈正相关［7－8］，也就是说在老年人中双歧杆菌的数量相对多者，生存年龄相对长，提示双歧杆菌的多少与高龄有某种关系。

本文通过对重庆地区老年非肠道疾病患者的主要肠道菌群分布的研究，发现肠道菌群中，双歧杆菌、乳杆菌下降和肠杆菌的升高与老年糖尿病和老年寿命有关。

［1］徐志毅.肠道正常菌群与人体的关系［J］.微生物学通报，2005，32（3）：117－118.

［2］Gagnon M，Kheadr EE，Le Blay G，et al.In vitro inhibition of Escherichia coli 01 57：H7bv bifidobacterial strains of human origin［J］.Int J Food Mierobiol，2004，92（1）：69－78.

［3］吴仲文，李兰娟，马伟杭，等.肠道微生物定植抗力的新指标——B/E值［J］.浙江预防医学，2000，12（7）：4－5.

［4］Vaarala O，Arkinson MA，Neu J.The“perfect storm”for type 1diabetes：the complex interplay between intestinal microbial.gut permeability and mucosal inmmunity［J］.Diabetes，2008，57（10）：2555－2560.

［5］别明江，刘祥，潘素华，等.糖尿病模型小鼠的肠道菌群与血糖关系的探讨［J］.现代预防医学，2005，32（11）：1441－1443.

［6］Delzenne NM，Cani PH.Gut microflora is a key player in host energy homeostasis［J］.Nature，2008，455（7216）：1109－1113.

［7］Osipor MI，Bilev AE，Osipov IA，et al.Microbial intestinal biocnosis in limgering and complicated course of community pneumonia［J］.Ter Arkh，2008，80（2）：52－57.

［8］Lineva ZE，Tiaptirgianova NG.Pathogenetic mechanisms of impaired intestimal microflora in patients with destructive pulmonary tuberculosis［J］.Probl Tuberk，2001，79（2）：13－14.

Research on the intestinal flora of the 239 patients in the elderly non－intestinal diseases＊

FuChaohui1，WangWenli1，ZhangBin2△
（1.DepartmentofGeriatrics，theThirdPeople＇sHospitalofChongqing，Chongqing400014，China；2.SchoolofPublicHealth，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400015，China）

ObjectiveTo learn the changing rules of the parenteral diseases flora of the old ages at different age and different diseases.Besides，survery the relations between the geriatric diseases and the intestinal floras.MethodsChose 239diagnosed elderly parenteral diease patients of 3kinds and observe the main enteric bacterium′changes，then compared to 50non－elderly patients.ResultsFor the Intestinal floras（the enterobacter，the enterococcuses，the bacteroids，the bifidobacteriums，the lactobacillus，the fusobacteriums），compared the geriatric patients with the non geriatric patients，the coronary heart disease with non coronary heart disease patients，the respiratory with non respiratory patients，the enterobacterias showed no significant difference（P＞0.05）；But the B/E ratio of the elderly and non－elderly diabetes mellitus patients，that of bifidobacteriums and the lactobacillus，the ratio between the bifidobacteriums and the enterobacters were decreasing obviously（P＜0.05）；the B/E was decreasing significantly in the 70－89ages（P＜0.05）.ConclusionThe bifidobacteriums，the lactobacillus and the enterobacters are related to the elderly diabetes mellitus and the olders′life.

intestinal flora；geriatric diseases；bifidobacterium

10.3969/j.issn.1671－8348.2012.23.022

A

1671－8348（2012）23－2400－02

重庆市医学科研计划基金资助项目（03－2－020）。△ 通讯作者，Tel：13883266741；E－mail：zhangbin＿127＠163.com。

2011－10－09

2012－01－06）