人鼻咽癌细胞株中表皮生长因子受体蛋白表达与西妥昔单抗抑制率的相关性研究

刘静 王斌斌 刘斐叶 左强

（南方医科大学南方医院肿瘤中心，广东 广州 510515）

表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）基因定位于染色体7p12[1]。EGFR在人类部分肿瘤中呈高表达，其介导的信号传导与肿瘤发生、发展及预后密切相关。鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）中EGFR高表达，并且这种高表达与不良预后相关[2]。西妥昔单抗（cetuximab）是一种人／鼠嵌合型IgG单克隆抗体，可与细胞表面EGFR特异性结合，竞争性阻断表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）和其他配体如转化生长因子－α（transforming growth factor-α，TGF-α）的结合，从而阻断EGFR依赖的肿瘤细胞增殖、转移、侵袭以及血管生成等生物学效应。本研究应用蛋白质印迹法检测人NPC细胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F 以 及HNE-17种细胞株中EGFR蛋白表达水平，用MTT法检测西妥昔单抗对细胞株的抑制率，并探讨两者的相关性，了解检测EGFR蛋白表达水平是否能够判断西妥昔单抗治疗NPC的疗效。

1 资料与方法

1.1 研究材料 西妥昔单抗由德国Merck公司提供，β-actin一抗与EGFR一抗购自武汉Boster公司，人NPC细胞株CNE-1、CNE-2、HONE-1、C-666、SUNE-1、5-8F以及 HNE-1由广州博川生物科技有限公司提供。采用RPMI 1640培养液。

1.2 蛋白质印迹法检测EGFR蛋白表达水平 按常规方法进行。

1.3 MTT法检测细胞抑制率 按常规方法进行。用Bio-Tek酶标仪分析490 nm处OD值。细胞抑制率＝（加药组OD值－空白对照组OD值）／（正常对照组OD值－空白对照组OD值）×100%

1.4 统计学处理 用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析。采用方差分析和双变量相关分析，检验水准α＝0.05。

2 结 果

2.1 不同NPC细胞株中EGFR蛋白的表达差异不同NPC细胞株的EGFR表达水平有显著差异（F＝1748.784，P＜0.001），其中以5-8F细胞株中EGFR表达水平最高，显著高于其他6种细胞株（P＜0.001）；其次为SUNE-1，见图1～2。

图1 不同NPC细胞株EGFR蛋白表达

图2 不同NPC细胞株EGFR蛋白表达水平

2.2 西妥昔单抗对不同NPC细胞的抑制率 1500 μg／mL浓度时，西妥昔单抗对不同NPC细胞株的抑制率差异有统计学意义（F＝5.942，P＝0.003），其中以对5-8F细胞株的抑制率最高，对 HONE-1抑制率最低；1800μg／mL浓度时，西妥昔单抗对不同NPC细胞的抑制率无显著差异（F＝2.565，P＝0.069），其中以对CNE-1细胞抑制率最高。西妥昔单抗高浓度组中NPC细胞的抑制率虽均高于低浓度组，但两组之间无显著差异（P＞0.05）。见表1、图3。

表1 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率（）

表1 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率（）

细胞株类型 西妥昔单抗（1500μg／mL） 西妥昔单抗（1800μg／mL） F值 P值288 CNE-2 43.90±15.06 56.16±20.16 0.356 0.583 HNE-1 41.45±5.13 68.33±3.39 1.132 0.3475-8F 47.88±3.57 51.56±4.84 0.132 0.735 HONE-1 15.27±7.31 66.81±2.80 1.490 0.289 C666 43.67±2.23 55.48±2.94 0.587 0.486 SUNE-1 45.01±1.52 64.96±1.62 0.023 0.888 F 值 5.942 2.565 P值 0.003 0.CNE-1 40.71±10.16 72.39±6.15 1.498 0.069

图3 西妥昔单抗不同浓度时对不同NPC细胞株的抑制率

2.3 EGFR表达水平与细胞抑制率相关性研究1500μg／mL浓度时，西妥昔单抗的细胞抑制率与EGFR蛋白表达水平呈显著正相关（r＝0.444，P＝0.044）；1800μg／mL浓度时西妥昔单抗的细胞抑制率与EGFR蛋白表达水平则呈显著负相关（r＝-0.468，P＝0.032）。

3 讨 论

西妥昔单抗治疗EGFR高表达的转移性结直肠癌、局部晚期及复发／转移头颈部鳞癌（SCCHN），疗效好[3－4]。最近，研究者们认为，表达野生型 K-ras基因的结直肠癌患者采用西妥昔单抗和化疗联合治疗疗效较好，而K-ras基因为突变型的患者在化疗基础上应用西妥昔单抗并无额外益处。

NPC是我国最常见的头颈部恶性肿瘤，好发于中国南方各省及东南亚地区，其病因包括EB病毒、遗传易感性、多种癌基因和抑癌基因的相互作用以及环境和饮食因素[5－6]。NPC的 EGFR 表达率为90%～100%。Ma等[7]报告，EGFR表达与未分化NPC患者的不良预后相关，提示EGFR表达可作为判断NPC患者预后的一个指标。K-ras癌基因被认为是细胞恶变过程中起引发作用的基因，在NPC发生和发展中K-ras基因过表达起重要作用，而非基因突变[8]。故无法通过检测K-ras基因状态来决定是否应用西妥昔单抗。目前研究尚未证实EGFR基因或蛋白检测可预测EGFR抑制剂的疗效。

本研究显示，不同NPC细胞株均存在EGFR蛋白表达，其中以5-8F最高，CNE-1最低；西妥昔单抗对不同NPC细胞株生长均有一定程度抑制作用，其中1500μg／mL浓度对5-8F抑制率最高；1800 μg／mL浓度对CNE-1抑制率最高，而对5-8F抑制率最低。通过对EGFR蛋白表达水平与细胞抑制率之间的相关性研究发现，当西妥昔单抗浓度为1500μg／mL时，两者之间呈显著正相关（r＝0.444，P＝0.044），但当浓度增加至1800μg／mL，两者之间呈显著负相关（r＝-0.468，P＝0.032）。这一结果提示，NPC细胞中EGFR蛋白表达水平与西妥昔单抗细胞抑制率之间并无相关性，在NPC治疗选择过程中，EGFR蛋白表达水平并不能作为预测西妥昔单抗疗效的指标。

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