高效液相色谱法测定果冻中的合成着色剂

王冬芬

洛阳市涧西区疾病预防控制中心，河南洛阳 471003

果冻为一种胶冻休闲食品，其主要原料是海藻胶，它非常可口且色彩多样，尤其为小朋友所青睐。然而果冻里面添加的合成着色剂，能够对人体产生毒害[1]，所以国家卫生标准中严格的规定了合成着色剂的添加量[2]。在我国，共有十几种可以使用的合成着色剂，其中苋菜红、柠檬黄、日落黄、胭脂红以及靛蓝等最为常见。在我国高效液相色谱法、示波极谱法以及薄层色谱法是常用的色素检测方法。然而国标GB／T5009.35—2003中关于食品中合成着色剂的检测，利用高效液相色谱法主要在同一波长对各种色素含量进行测定，具有灵敏度和特异性低的缺点，缺少相应的处理措施。

1 材料与方法

1.1 材料

LC2000液相色谱仪（上海天美科学仪器有限公司）。试剂为已腈；乙酸铵溶液（0.02 mol／L）；水：氨水：乙醇溶液(1：2：7)；柠檬酸溶液（20%）；pH6水（pH用20%柠檬酸调）；聚酰胺粉；日落黄、柠檬黄、胭脂红、苋菜红、赤藓红、靛蓝六种色素标准溶液（0.1 mg／mL）。

1.3 方法

测定方法依据GB／T5009.35—2003。其前处理方法如下：称取5.00 g加标样品，溶解，pH调至6.0，然后50.0 mL容量瓶定容。

超声萃取：分别用超声器超声10、20、30 min，再进行提取。

振荡提取：分别用振荡机振荡10、20、30 min，再进行提取。

加热提取：置70℃恒温水浴锅分别为10、20、30 min，再进行提取。

1.4 待测样品的处理

称取5.00 g样品，溶解，调pH6.0，50.0 mL容量瓶定容。在恒温水浴锅（70℃）水浴20 min后混匀，加柠檬酸（20%）使pH为6.0，把聚酰胺粉（1 g）用水调为粥状，然后倒到样品溶液，进行搅拌，通过垂融漏斗进行抽滤，以70℃pH6水进行洗涤（4次），然后用5 mL的水、氨水以及乙醇混合溶液进行解吸（4次），将解吸液收集之后，并中和（乙酸），然后蒸发接近干燥，用水溶后定容到5 mL，经滤膜（0.22 μm）过滤，滤液保存好后备用。

2 结果分析

2.1 6种色素的标准曲线

把6种常用色素的各种浓度标准混合溶液通过高效液相色谱仪，得出标准工作曲线。自下而上依次是①赤藓红；②日落黄；③胭脂红；④靛蓝；⑤苋菜红；⑥柠檬黄。获得6种常用色素的标准曲线方程为：赤藓红Y=11107X-2175.8，r=0.9993；日落黄Y=12209X+3013.7，r=0.9993；胭脂红Y=18234X+7057.1 r=0.9993；靛蓝Y=24646X+10806，r=-0.9994；苋菜红Y=23911X+769402，r=0.9996；柠檬黄Y=26053x+7395.7 r=0.9995。

2.2 三种前处理对比分析

用加热、振荡、超声三种放法进行提取，发现震荡和超声法随着时间的延长提取效果增加。而加热法在20 min时提取效果最好，同时这种处理方法是最佳方法。同时以柠檬黄为例作图比较提取效果，能够非常直观发现加热法为最好的提取方法，也就是经70℃水浴20 min提取为最佳提取方法（图1）。

图1 柠檬黄提取效果的比较图

2.3 回收试验结果

在同一前处理好的样品里面加入色素标准溶液，测定合成着色剂。所测结果的相对标准差范围是2.5%～8.3%，回收率为98.4%～100.0%。

3 结论

本文研究发现果冻色素最佳提取方法为70℃水浴20 min。这种方法的优点是便于操作、及时，回收率高。由于果冻中通常含有大约0.5%琼脂，因此通过超声与振荡的方法提取该半固体的色素，很难进行完全提取，导致回收率不高。因为在70℃时琼脂就可溶解，然后再稀释10倍后，由于琼脂浓度较低，就不能再成半固体状物质，这样非常适合进行检测。国家标准方法检测波长是254 nm，由于大部分物质对该波长存在吸收，因此会有干扰产生。本文首先将前处理法确定，然后将各段时间的检测波长确定，使不同色素的特异性与灵敏度显著提高。

总之，通过将果冻进行前处理，利用液相色谱法C18柱，流动相为乙腈和乙酸胺，精油梯度洗脱，能够非常高效的检测出果冻中的合成着色剂。

[1]季顺仙，缪菁，陶晶晶，等. 休闲食品中添加剂使用情况调查[J]. 浙江预防医学，2009（1）:41-42.

[2]李乃洁，周长民，刘然，等. 合成着色剂标准样品杂质纯化的基本方法[J].品牌与标准化，2011（24）:35.