玉葡萄根药材鞣质含量的测定

任永福,刘红斌

(1.云南省药物研究所制药厂,云南 昆明 650111;2.云南省药物研究所,云南 昆明 650111)

玉葡萄根[1]为云南地区民间使用的草药,具有祛风除湿、舒筋活络、消肿镇痛之功效,用于跌打损伤等的治疗,是“金品”痛舒胶囊、肿痛气雾剂等系列药品使用的药材之一。曾收载于《中国药典》(1977年版)、《云南省药品标准》(1996年版)。目前标准中仅有鞣质的定性鉴别,对其含量测定未见报道,本文参照中国药典[2],采用紫外分光光度法[3]对玉葡萄根鞣质的含量测定进行方法学研究,以期能对该药材的质量控制提供技术参考。

1 实验材料与仪器

1.1 试剂试药 玉葡萄根采自安宁市、楚雄市和大姚县。没食子酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110831-200302);磷钼钨酸试液(按《中华人民共和国药典》2005年版一部附录ⅩⅤB配制);干酪素(化学纯);水为重蒸水;提取用的乙醇为化学纯,其他试剂试药为分析纯。

1.2 仪器 UV2501分光光度计(日本 Shimadzu);天平(Metler Toledo)。

2 方法与结果

2.1 鞣质的测定方法

2.1.1 总酚 精密量取供试品溶液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,照标准曲线的制备项下方法,自“加入磷钼钨酸试液1 mL”起,加重蒸水10 mL,依法测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得。

2.1.2 不被吸附的多酚 精密量取供试品溶液25 mL,加至已盛有干酪素0.6 g的100 mL具塞锥形瓶中,密塞,置30℃水浴中保温1 h,时时振摇,取出,放冷,摇匀,滤过。弃取初滤液,精密量取续滤液2 mL,置25 mL棕色量瓶中,照标准曲线的制备项下的方法,自“加入磷钼钨酸试液1 mL”起,加水10 mL,依法测定吸光度,从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg),计算,即得。

糅质的含量计算式:糅质含量=总酚-不被吸附的多酚

2.2 对照品溶液的配制 精密称取没食子酸对照品适量,加水溶解后制成含没食子酸50.40μg/mL的溶液。

2.3 样品溶液的配制 取安宁药材粉末适量(按品种项下的规定),精密称定,置 250 mL棕色量瓶中,加 45%乙醇150 mL,放置过夜,超声处理10 min,放冷,用重蒸水稀释至刻度,摇匀,静置(使固体物沉淀),滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液20 mL,置100 mL棕色量瓶中,用重蒸水稀释至刻度,摇匀,即得。

2.4 线性关系考察 精密量取对照品储备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置 25 mL 棕色量瓶中,各加水 11.5、11、10、9、8、7mL,用 29%碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,放置30 min以相应的试剂(重蒸水+29%碳酸的溶液)为空白,在760 nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。计算得回归方程为:Y=0.1292X+0.0008(r=0.9997),Y-对照品吸收度,X-对照品浓度,以上结果表明该方法在1.01μg/mL～10.08μg/mL范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品储备液2.0 mL,按上法操作,显色后连续测定6次,测定结果的 RSD=0.43%,表明本法精密度良好。

2.6 重复性试验 取同批样品,按鞣质测定方法分别进行供试品溶液的制备并测定,重复 6次。测定结果的 RSD=1.18%,表明本法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取样品溶液在30 min反应稳定后的0、10、20、30、60 min时间点进行考察,测定结果的 RSD为0.91%,结果显示样品溶液在30 min反应稳定后的1 h内稳定。

2.8 回收率试验 取玉葡萄根9份样品精密称定,分置已编号为1～9的250 mL棕色容量瓶中,在1、2、3号棕色容量瓶中分别加入浓度为3.45 mg/mL的没食子酸对照品溶液各8 mL,在4、5、6号棕色容量瓶中分别加入浓度为3.45 mg/mL的没食子酸对照品溶液各10 mL,在7、8、9号棕色容量瓶中分别加入浓度为3.45 mg/mL的没食子酸对照品溶液各12 mL,然后按确定好的样品处理方法同法处理,将处理好的样品溶液按含量测定方法同法测定,计算回收率,结果平均回收率为97.76%,RSD为2.09%,表明本法回收率良好。

2.9 3个产地玉葡萄根药材鞣质含量测定 按含量测定方法测定3个产地样品的鞣质含量,含量按干燥品计,测定结果见表1。

表1 3个产地样品鞣质测定结果

3 小结

考虑到玉葡萄根中的鞣质成分与结构的复杂性和仪器使用的可行性,因此用紫外可见分光光度法测玉葡萄根中的鞣质含量。在测定波长为 760 nm,对照品浓度为 1.01～10.08μg/mL的范围内,浓度与吸光度线性关系良好,r=0.9997;平均加样回收率为97.76%,RSD=2.09%。此方法测定玉葡萄根中的鞣质含量方法简便易行,结果相对准确可靠,重现性好。故此研究结果可为研究玉葡萄根药材的质量控制方法提供技术参考。

药典要求的碳酸钠浓度为29%,有文献报道可以选用20%碳酸钠。试验比较了35%、29%、20%3种浓度下同一对照品溶液同一操作条件下的的吸收度,发现当使用20%碳酸钠来测定时,吸收值偏低。35%碳酸钠下的吸收和29%碳酸钠下的吸收接近,故仍采用药典规定浓度的碳酸钠。值得注意的是,在配制碳酸钠溶液时,选用的是含有结晶水的碳酸钠,如果要用无水碳酸钠,需要进行换算。否则在测定时会造成溶液极易析出晶体的情况。

试验比较了 10、20、30、40和 50 min时间段,同一对照品溶液同一操作条件下的吸收度。结果显示30 min后反应趋于稳定,故显色时间确定为30 min。

[1]云南省药材公司.云南中药资源名录[M].北京:科学技术出版社,1993:311.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010:附录XB,62.

[3]沙美.紫外分光光度法测定次水杨酸铋中水杨酸的含量[J].中国药师,2010,13(5):751～752.