HPLC法测定鸡嗉子叶中3种黄酮苷的含量

字 刚,丁中涛

(1.云南省药物研究所制剂研究中心,云南 昆明 650111;2.云南大学化学科学与工程学院,云南 昆明 650091)

鸡嗉子叶为山茱萸科植物头状四照花[Dendrobenthamia capitata(Wall.)Hutch.]的叶,功能消积杀虫,消肿解毒,利水消肿。主治食积、小儿疳积、虫积腹痛、肝炎、腹水、水火烫伤、外伤出血、疮疡。鸡嗉子叶是彝族习用药,临床应用已有较长的历史[1]。

该药材收载于《云南省中药材标准》(2005年版第4册◦彝族药),无含量测定方法。笔者建立了金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷3种黄酮苷的含量测定方法,为控制鸡嗉子叶药材的质量提供科学的实验依据。

1 实验仪器和试药

1.1 仪器 美国Agilent 1100高效液相色谱仪,Mettler AE163电子天平,HS6150D超声清洗仪。

1.2 试剂和药材 鸡嗉子叶:分别来源于昆明西山090406,楚雄090510,大理090512(经云南省药物研究所生药室鉴定为山茱萸科植物鸡嗉子);标准品:金丝桃苷和槲皮苷对照品为中国药品生物制品检定所提供,批号:金丝桃苷111521-200303(供含量测定);槲皮苷 111538-200403(供含量测定)。异槲皮苷为自制对照品,经HPLC检测,纯度大于98%。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Hanbon Lichrospher C18柱(4.6×150 mm,5 μ m),流动相 A:0.2%磷酸溶液B:甲醇,按表 1进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为352 nm,在此条件下金丝桃苷,异槲皮苷和槲皮苷对照品溶液及供试品溶液的色谱图如图1所示被测组分分离度均达到1.5以上,理论塔板数均不低于5000。

表1 流动相洗脱梯度

图1 色谱图

2.2 对照品溶液的制备 精密称取60℃减压干燥2 h的金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷对照品适量,置容量瓶内,加甲醇适量,超声处理使溶解,放冷,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,即得,每 1 mL 含金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷分别为 80μg、50μg、60μg 。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取鸡嗉子叶药材细粉1.0 g,精密加入甲醇50 mL,精密称重,加热回流提取 2 h,放冷,补足缺失重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

2.4 线性关系 精密称取在60℃减压干燥2 h的金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷对照品 10.37 mg、8.51 mg、5.90 mg置 10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制得7#混合对照品溶液,精密吸取对照品溶液 2.5 mL、2.5 mL、1 mL分别置5 mL、10 mL、10 mL的容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得 6#、5#、4#溶液,精密吸取 4#溶液 2.5 mL、1 mL、1 mL分别置5 mL、5 mL、10 mL的容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得3#、2#、1#溶液。分别进样10 μ L,测定,结果以浓度(mg/mL)为横坐标(X),面积为纵坐标(Y),得回归方程,见表2。

表2 线性关系测定结果

2.5 精密度试验 取配制好的混合对照品溶液按照含量测定方法依法测定,连续进样6针,以峰面积计算,结果3个组分的RSD均小于2%。

2.6 重复性试验 称取同一批供试品,按照制备方法同时制成6份供试液,进样10μ L,测定。按2.4下所得回归方程分别计算含量,结果3个组分的RSD均小于3%。

2.7 稳定性试验 取已配制好的供试品溶液按照含量测定方法依法测定,分别于0,1,3,6,12,24 h进样,进样10 μ L,以峰面积计算,结果3个组分的RSD均小于3%。

2.8 加样回收率试验 分别取已知金丝桃苷,异槲皮苷和槲皮苷含量的供试品6份,分别加入金丝桃苷,异槲皮苷和槲皮苷的浓度为1.99 mg/mL,1.80 mg/mL,2.02 mg/mL的混合对照品溶液各1 mL,然后按确定好的样品前处理方法同法制备,按供试品溶液的含量测定方法依法测定,计算回收率,结果见表3～表5。

表3 金丝桃苷加样回收率试验结果

表4 异槲皮苷加样回收率试验结果

表5 槲皮苷加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定 样品3批,分别依2.3项下方法制成供试品溶液,依法测定金丝桃苷,异槲皮苷和槲皮苷含量,结果见表 6。

表6 样品含量测定

3 小结

据现代文献报道,鸡嗉子叶和皮中含有黄酮类、三萜、环烯醚萜类、甾醇、多酚类和有机酸类化合物[2],笔者在对其化学成分研究过程中发现鸡嗉子叶中含有多种黄酮类化合物,金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷的含量较其他黄酮类成分要高,选用以上3种组分作为指标物,采用高效液相色谱法对鸡嗉子叶中黄酮类成分进行含量测定研究。

以甲醇、乙醇、50%甲醇为溶剂考察黄酮苷的提取方法,结果发现以甲醇为溶剂,加热回流2 h鸡嗉子叶中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷3种组分提取率最高,提取较完全。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999:743～744.

[2]田雅娟,罗应刚,李伯刚,等.山荔枝化学成分的研究[J].天然产物研究与开发,2002,14(3):18～20.