高效液相柱前衍生法测定板蓝根胶囊中精氨酸的含量

河北龙海药业有限公司 王国振 王 焕 陆 欣 （石家庄 052165）

板蓝根胶囊是有板蓝根片改剂型而来,是由板蓝根药材组成,具有清热解毒,凉血利咽功效。用于肺胃热盛所致的咽喉肿痛、口咽干燥。为了进一步控制其质量,采用高效液相色谱法对制剂中精氨酸含量进行了测定。

1 仪器与试药

Ultimate 3000高效液相色谱仪 （戴安公司）;板蓝根胶囊 （规格:0.27 g/粒,河北龙海药业有限公司提供,批号091001、091002、091003）、精氨酸对照品 （中国药品生物制品检定所,批号:872-200204）;乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯。

2 色谱条件筛选

色谱柱:Diamonsil C 18（5μm,150×4.6mm,迪马公司）;流速:1.0 mL/min、进样量:20μL检测波长:360 nm;流动相:醋酸钠缓冲液 （取无水醋酸钠 4.1 g,加 N,N-二甲基甲酰胺 50m L,加水稀释至 1 000mL,用乙酸调节 pH至 6.1）-乙腈 （85︰ 15）。[1]

2.1 检测波长的选择 称取精氨酸对照品适量,加水制成一定浓度的溶液,衍生化后置 SP-756PC型紫外分光光度计 （上海光谱仪器有限公司）下,绘制精氨酸紫外吸收图谱,精氨酸在 360 nm左右的波长处有最大吸收。

2.2 专属性试验

2.2.1 对照品溶液的制备[2]:精密称取精氨酸对照品适量,加水制成每 1mL含 0.1mg的溶液,精密量取 1m L,置 10m L棕色量瓶中,加 0.5mol/L的碳酸氢钠溶液 1m L,1%2,4-二硝基氟苯乙腈溶液 1mL,摇匀,避光于 60℃水浴中加热 30 min,取出,放冷,用磷酸盐缓冲液 （pH 7.0）稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜 （0.45μm）滤过,即得。

2.2.2 供试品溶液的制备[2]:取样品约 0.2 g,精密称定,精密加水 25mL,振摇 20min,滤过,精密量取续滤液1m L,置10mL棕色量瓶中,加0.5mol/L的碳酸氢钠溶液1.0m L,1%2,4-二硝基氟苯乙腈溶液 1.0m L,摇匀,避光于 60℃水浴中加热 30 min,取出,放冷,用磷酸盐缓冲液 （pH 7.0）稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜 （0.45μm）滤过,取续滤液及时进样。

2.2.3 阴性对照溶液的制备:取缺板蓝根的板蓝根胶囊阴性对照品相同量,按供试品溶液的制备方法操作制备阴性对照溶液。

按上述项下色谱条件,精密吸取空白溶液、供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各 20μL,分别注入高效液相色谱仪。

2.2.4 结果:供试品色谱中,在与精氨酸对照品相同保留时间位置上有一相同的保留峰,而缺板蓝根的阴性对照品,在与精氨酸对照品相同保留时间位置上无成分峰出现。

2.3 系统适应性试验 精密吸取供试品溶液 20μL,分别注入高效液相色谱仪。其分析结果精氨酸峰的理论塔板数在 2 000以上,各杂质峰与主峰的分离度均大于 1.5,因此规定理论塔板数按精氨酸峰计应大于 2 000。

3 线性关系考察

精密吸取浓度为 0.208mg/mL的精氨酸对照品溶液,分别制成 4.992×10-3、 2.496×10-2、 0.124 8、 0.166 4和0.208mg/mL的对照品溶液,再分别精密量取 1.0mL,置10mL棕色量瓶中,加 0.5 mol/L的碳酸氢钠溶液 1.0 mL,1%2,4-二硝基氟苯乙腈溶液 1.0 m L,摇匀,避光于60℃水浴中加热 30m in,取出,放冷,用磷酸盐缓冲液（pH 7.0）稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜 （0.45μm）滤过,即得。分别精密量吸取上述对照品溶液各 20μL,在上述色谱条件下,分别进样分析,记录色谱图,测定峰面积。以对照品进样量 （μg）为横坐标,以峰面积值为纵坐标作图,得到:精氨酸回归方程为:Y=11 721 559.06 X-4 242.5,r=0.999 9。

以上结果表明:在 9.984×10-2～4.16μg范围内,精氨酸进样量与峰面积值呈良好的线性关系,实际样品测定结果准确、可靠,正文中对样品的测定采用外标一点法计算精氨酸的含量。

4 稳定性试验

精密吸取同一批次的样品内容物,按供试品下方法制得,在 8 h内第 0、2、4、 6、 8 h进样测定 1次,记录色谱图。结果表明样品溶液在8 h内基本稳定,RSD为 1.8%。

5 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液,连续进样 6次,记录色谱图。结果表明精密度的良好,RSD为 1.0%。

6 重复性试验

取同一批样品6份,分别按供试品下制备的方法操作,按拟定的色谱条件测定,记录色谱图。结果表明本方法有良好的重复性,RSD为 1.6%。

7 回收率试验

精密称取已知含量的样品 0.1 g,平行 9份,分别加入80%、100%及 120%对照品的精氨酸的量,照 “供试品溶液制备”项下操作,测定,记录色谱图,并计算平均回收率。平均回收率 99.7%,RSD=1.50%。结果表明,本方法有很高的准确度。详见表1。

8 三批样品含量测定

分别取 3批板蓝根胶囊内容物适量,按供试品溶液制备方法制得后,在上述色谱条件下测定,测得 3批样品中精氨酸的平均含量分别为 2.24mg/粒、2.63 mg/粒、2.35 mg/粒。

表1 加样回收率试验结果 （μg,%）

9 讨论

板蓝根胶囊为我公司独家产品,首次以HPLC柱前衍生方法分析了板蓝根胶囊中精氨酸的含量。该方法操作简单,重现性好,结果准确可靠。板蓝根颗粒虽也是有单味药材板蓝根组成,但含有的辅料不同,对采用 HPLC柱前衍生方法分析时,结果差异较大,特别是不同厂家板蓝根颗粒采用 HPLC柱前衍生方法分析时,对结果影响很大,在以后实验中有待考察。

[1] 陈矛,曾令杰.板蓝根颗粒中精氨酸的柱前衍生化HPLC测定 [J].现代中药研究与实践,2003,17（5）:42-44

[2] 周海婴.RP-HPLC柱前衍生法测定复方甘草酸铵S分散片的含量 [J].吉林医学,2009,30（12）:28-30

（2011-05-06 收稿）