铁路卫生微生物检验质控结果分析

曹利蓉

(乌鲁木齐铁路局疾病控制所，新疆 乌鲁木齐 830011)

从1995年以来，我们一直参加由铁道部劳卫司组织的全路疾控所微生物质控考核，通过每次盲样的分离鉴定，能很快提高我们实验室处理各种样品的能力。与以往不同2008年微生物质控考核铁道部劳卫司要求在最短时间上传检验结果，其余的生化反应、原始记录在5天内寄出。现将质控考核情况及检验结果报告如下:

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质控样品 铁道部劳卫所下发的冻干盲样菌种2支，编号为10号、31号。

1.1.2 培养基 本次质控考核所用培养基由杭州微生物试剂厂生产。细菌生化鉴定系统由法国生物梅里埃公司生产 API20E，均在有效期内使用。

1.1.3 诊断血清 沙门氏菌属诊断血清、致泻大肠埃希菌诊断血清由兰州生物制品研究所生产，在有效期内使用。

1.2 方法

GB/T4789.1～4789.31—2003《食品卫生微生物学检验》

2 实验室检验

2.1 增菌

无菌操作开启真空冻干菌种管，加无菌生理盐水0.5 mL溶解，分别吸取2滴加入2 mL营养肉汤和7.5%NaCl肉汤、GN增菌液，36℃培养4～6 h。观察结果见表1。

表1 增菌实验观察结果

2.2 分离

各取一环菌液直接接种到普通营养琼脂平板、血琼脂平板(购买)、SS、WS、EMB、TCBS、麦康凯琼脂平板，36℃ 18～24 h培养。31号菌在普通营养琼脂平板上见浅黄色菌落，在血琼脂平板上见较大的浅黄色菌落，有透明溶血环，其它培养基均不生长。10号菌在SS、WS平板上可见两种菌落，主要为无色半透明，中间带黑心的小菌落，偶见散在粉红色中等大小、圆形不透明菌落。

2.3 初步鉴定

31号菌挑取血平板上单个菌落涂片做 G染色镜检:G+球菌，呈葡萄状排列。做血浆凝固酶试验为(+);生理盐水对照(－)。

31号菌根据血平板上菌落特征及溶血、革兰氏染色(G+球菌)、血浆凝固酶(+)可判定为金黄色葡萄球菌［1］，在24 h内将检验结果上传至铁道部劳卫司。

10号菌(主要菌)挑取带黑心的单个菌落涂片做G染色镜检:G－杆菌，无芽孢;氧化酶(－);用沙门氏菌诊断血清A～F多价O凝集(+)，再依次用O2、O4、O8、O9、凝集，结果O9(+)，根据O9(D群)的确定，用d;g;m来确定H相，结果Hg (+)，Hm(+)。

根据血清凝集结果初步判定:10号带黑心的菌为肠炎沙门氏菌。

10号菌(次要菌)挑取粉红色的单个菌落涂片做 G染色镜检:G－短杆菌，无芽孢;氧化酶(－);用致泻性大肠埃希菌血清凝集:EIEC(－); EPEC(－);ETEC(－);EHEC(－)，根据菌落特征及血清学凝集可初步判定:10号菌(次要菌)为非致泻性大肠埃希氏菌。将检验结果上传至铁道部劳卫司。

2.4 生化特征

分别挑取10号(主要菌、次要菌)接种于TSI上做初步生化反应结果见表2。

10号(主要菌)用 API20E鉴定，编码为6704552，提示为沙门氏菌;补充试验:葡萄糖胺(+)，西蒙氏枸橼酸盐(+)。

10号(次要菌)用API20E鉴定条上，编码为5144552，提示为大肠埃希氏菌。

生化反应结果与初步判定结果是相吻合的，最终我们的检测结果完全正确，并且10号菌是全路第一个报出。

表2 生化反应结果

3 讨论与小结

根据铁道部劳卫司考核情况通报，我所微生物考核结果快速、正确，名列第一。从考核结果显示，积累一定的细菌鉴定经验是我们取得好成绩的关键。

在细菌鉴定过程中检验人员应思路清晰，可以增菌和划平板同时进行［2］，选择鉴定的方向，而不是所有的生化反应全做，毫无目的。在血清学试验过程中，其中有一瓶A～F多价O血清不凝，可能是效价存在问题，其他疾控所也存在同样的问题，生物制品所在出售诊断血清时应保证其效价。

卫生微生物检验质量控制直接关系到细菌学检测结果的准确性和可靠性，因此疾控所应积极参加上级卫生部门组织的能力验证和实验室间比对活动，从而找出差距，总结经验，以利于提高实验室的检测水平。

［1］ GB/T4789.10—2003，食品卫生微生物检验［S］.

［2］ 何晓青.卫生防疫细菌检验［M］.南昌:新华出版社，1989. 302.