纤维素酶和乳酸菌对杂交象草青贮结构性碳水化合物影响

摘要：为解决杂交象草［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum］青贮粗纤维含量高的难题，本研究以纤维素酶和耐高温乳酸菌为添加剂，45℃青贮1，3，7，14，60 d，解析其对杂交象草青贮料结构性碳水化合物影响。结果表明：添加剂处理组乳酸含量较高（Plt;0.05），pH值，乙酸，丙酸和氨态氮含量较低（Plt;0.05）。商业乳酸菌组乳酸含量最高，乙酸含量最低（Plt;0.05）。添加剂处理组的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、半纤维素和纤维素含量较低（Plt;0.05），水溶性碳水化合物、葡萄糖和蔗糖含量较高（Plt;0.05）。纤维素酶组的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、半纤维素和纤维素含量最低（Plt;0.05），水溶性碳水化合物、葡萄糖和蔗糖含量最高（Plt;0.05），耐高温乳酸菌组次之。综上所述，在杂交象草青贮饲料中添加纤维素酶和乳酸菌均能降解结构性碳水化合物并促进乳酸发酵，其中以纤维素酶添加效果最佳。

关键词：‘桂牧1号’杂交象草；纤维素酶；乳酸菌；青贮发酵品质；结构性碳水化合物

中图分类号：S816.53""" 文献标识码：A""""" 文章编号：1007-0435（2024）07-2314-09

doi：10.11733/j.issn.1007-0435.2024.07.033

引用格式：

武齐丰， 陈" 晨， 黄沁骄，等.纤维素酶和乳酸菌对杂交象草青贮结构性碳水化合物影响［J］.草地学报，2024，32（7）：2314-2322

WU Qi-feng， CHEN Chen， HUANG Qin-jiao，et al.A Effects of Cellulase and High-temperature Tolerant Lactic Acid Bacteria on

Structural Carbohydrate of （Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×P.durpureum schum. ［J］.Acta Agrestia Sinica，2024，32（7）：2314-2322

收稿日期：2024-03-28；修回日期：2024-05-10

基金项目：国家自然科学基金（32001401）；四川省科技厅国际合作项目（2021YFH0155）资助

作者简介：

武齐丰（1997-），女，汉族，宁夏吴忠人，博士研究生，主要从事饲草生产与加工利用研究，E-mail：1018609775@qq.com;*通信作者Author for correspondence，E-mail：yanyh@sicau.edu.cn

A Effects of Cellulase and High-temperature Tolerant Lactic Acid Bacteria on

Structural Carbohydrate of （Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×

P.durpureum schum.

WU Qi-feng1， CHEN Chen1， HUANG Qin-jiao1， ZHANG Yun-fei1， LI Xiao-mei1，

CHEN Yuan-hang1， WEN Xing-jin2， YAN Yan-hong1*

（1. College of Grassland Science and Technology， Sichuan Agricultural University， Chengdu， Sichuan Province 611130， China;

2. Sichuan Academy of Grassland Science， Chengdu， Sichuan Province 6l1731， China）

Abstract：In order to solve the problem of high crude fiber content of hybrid napier grass ［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］，cellulase and high-temperature resistant lactic acid bacteria （LAB） were used as additives to analyze their effects on structural carbohydrates of hybrid napier grass silage for 1，3，7，14 and 60 days at 45℃.The results showed that additive treatments had higher （Plt;0.05） lactic acid content and lower （Plt;0.05） pH value，acetic acid，propionic acid，and ammoniacal nitrogen contents. The commercia LAB group had the highest （Plt;0.05） lactic acid and the lowest （Plt;0.05） acetic acid contents. Neutral detergent fiber，acid detergent fiber，hemicellulose，and cellulose contents were lower （Plt;0.05），whereas water-soluble carbohydrates，glucose，and sucrose contents were higher （Plt;0.05） in all additive treatment groups. The cellulase group had the lowest （Plt;0.05） content of fibrous components and the highest （Plt;0.05） content of soluble carbohydrates，followed by the high-temperature resistant LAB group. In summary，the addition of cellulase and LAB to the napier silage could degrade structural carbohydrates and promote lactic acid fermentation，and the effects of cellulase was better.

Key words：（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’;Cellulase;Lactic acid bacteria;Fermentation quality;Structural carbohydrates

‘桂牧1号’杂交象草［（Pennisetum ameri-canum ×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］再生性强，产量高、营养丰富，是牛、羊和其它草食动物喜食的优质饲草，在我国南方地区（福建、湖南、四川等地）广泛种植［1-2］。将其加工制成干草或青贮饲料，以供家畜全年食用，对我国畜牧业发展尤为关键。但由于我国南方地区降雨丰富、常年空气相对湿度高，不利于干草调制，青贮是保存饲草的可行途径之一。然而，杂交象草水溶性碳水化合物含量低，粗纤维含量高，且表面附着乳酸菌数量低，常规青贮难以成功［3-4］。因此，使用外源添加剂是提高杂交象草青贮发酵品质的重要手段。

杂交象草在酸解或酶解作用下能降低青贮饲料中pH值和木质纤维含量，提高干物质和粗蛋白含量，改善杂交象草青贮发酵品质［5］。此外，将其饲喂家畜后还可改善家畜屠宰性能［6］、酮体品质及肉品质［7］。研究发现，添加乳酸菌制剂可加速青贮饲料中结构性碳水化合物的降解，保留较高含量的水溶性碳水化合物，进而促进乳酸发酵，有效抑制丁酸产生，提高青贮饲料发酵品质［8-10］。然而乳酸菌接种剂的添加效果并不稳定，常受到环境因素的限制［11-12］。大部分乳酸菌的适宜生长温度在20℃～30℃，过高温度（≥40℃）会使其失活，进而导致青贮发酵不完全［13-14］。纤维素酶是一种绿色安全的添加剂，能破坏植物细胞壁，将复杂的多糖降解为可被微生物直接利用的单糖，现已被广泛用于青贮饲料中。研究发现，添加纤维素酶能降低青贮饲料中pH值、中性洗涤纤维（Neutral detergent fiber，NDF）和酸性洗涤纤维（Acid detergent fiber，ADF）含量，提高乳酸菌丰度和水溶性碳水化合物（Water-soluble carbohydrates，WSC）含量［15-16］。但目前研究发现在不同青贮原料中添加纤维素酶的效果差异较大［17-18］。

近期，作者团队从南方牧草青贮样品中筛选的植物乳杆菌149（Lactiplantibacillus plantarum 149，LP149），其高温适应性（45℃）良好，生长速度快，且产酸能力强［19］。此外，支顶孢属（Acremonium）纤维素酶是纤维素酶的一种，其最佳反应温度是45℃～60℃［17］。然而，针对高温（45℃）环境下添加乳酸菌制剂和纤维素酶对杂交象草青贮发酵品质效果并不清楚。因此，本试验以‘桂牧1号’杂交象草为研究对象，探究添加耐高温植物乳杆菌149和纤维素酶对青贮发酵品质和结构性碳水化合物降解的影响，为杂交象草的合理青贮提供科学依据。

1" 材料与方法

1.1" 试验地概括

试验地点位于四川省崇州市桤泉镇，处于103.645 214 E、30.556 776 N之间。全区海拔514～520 m，亚热带湿润性季风气候，年平均气温17.5℃，年平均降水量1 112.4 mm，多集中在7—9月，8月最多，年平均太阳总辐射量87.6 kcal·cm-2。土壤以水稻土为主。杂交象草种植方式为扦插种植，种植面积5 m×6 m，每个小区60株，每株施30 g复合肥（N∶P2O5∶K2O=15∶15∶15）。

1.2" 试验材料

试验材料为‘桂牧1号’杂交象草［（Pennisetum ameri-canum×P.purpureum）×P.durpureum schum. ‘Guimu No.1’］，于2020年8月26日在四川农业大学崇州现代农业研发基地使用镰刀刈割，刈割时植株高达1.8 m～2.0 m，处于营养生长期。

试验所用支顶孢属（Acremonium）纤维素酶采购自日本东京明治制果药业株式会社，该酶的总酶活性超过1 000 U·g-1蛋白，且主要由α-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶、β-木聚糖酶和α-异丙嗪酶组成；商业植物乳杆菌（Lactiplantibacillus plantarum，LPC，参考菌株）采购自四川成都高福记生物科技有限公司；耐热植物乳杆菌149（Lactiplantibacillus plantarum，LP149，GenBank登记号为MH337263）来自四川农业大学草业科技学院。

1.3" 试验设计

试验设4个处理组分别为：（1）无菌水（CK，对照）；（2）支顶孢属纤维素酶处理组（AC，添加量为0.03％ FM）；（3）商业植物乳杆菌处理组（LPC，添加量为5×106 cfu·g-1 FM）；（4）耐热植物乳杆菌149（LP149，添加量为5×106 cfu·g-1 FM）。每个处理设3个重复。

1.4" 试验方法

1.4.1" 青贮调制 "将刈割的杂交象草揉丝（9YDB系列创富款，山东新圣泰机械制造有限公司）至2～3 cm后平铺在室外通风的地方进行晾晒（约4 h），每隔 15 min测定一次含水量，当杂交象草的水分含量达到70％时，分别经不同添加剂处理后再次混匀。随机称取300 g杂交象草装入青贮袋，真空密封。用聚乙烯袋（25 cm×35 cm）进行青贮，置于45℃厌氧培养箱（智能培养箱MJM-80，宁波江南仪器厂）中青贮1，3，7，14和60 d后分别开袋取样测定。

1.4.2" 青贮原料及青贮料发酵品质及化学成分分析" 将青贮料充分混匀后，称取20 g青贮样品置于250 mL玻璃锥形瓶中，加入180 mL蒸馏水，用保鲜膜进行封口后放置于4℃冰箱中浸提24 h，通过双层纱布和定性滤纸对浸提后的样品进行过滤得到浸提液，用于测定样品的pH值（pH value，pH），剩余样品浸提液保存于-20℃冰箱用于后续测定样品的氨态氮（Ammonia nitrogen，AN）及有机酸（Organic acids）含量。pH值使用211型精密pH计对青贮饲料浸提液pH值进行测定［20］。氨态氮含量采用苯酚-次氯酸钠比色法测定［21］。有机酸含量采用岛津高效液相色谱仪（岛津LC20A型；SHIMADZU（岛津）制作所）测定，配备Shodex Rspak KC-811 S-DVB gel column色谱柱（流动相：3 mmol·L-1高氯酸溶液；流速：1.0 mL·min-1；温度：50℃；检测的波长为：210 nm，进样量：5 μL，进样时间：35 min［22］。用平板计数法对样品中的微生物进行计数［23］。分别采用MRS（De Man Rogosa Sharpe）琼脂培养基进行乳酸菌计数，马铃薯葡萄糖琼脂（Potato dextrose agar，PDA）培养基用于酵母菌和霉菌计数，结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）用于肠杆菌计数。

取100 g左右的原料或青贮料于纸袋中，放置在105℃的鼓风干燥箱杀青0.5 h，随后将温度调至65℃烘干至恒重，测定干物质（Dry matter，DM）含量，将烘干后的样品用粉碎机粉碎后过筛，用于后续测定结构性碳水化合物，包括中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维（和酸性洗涤木质素（Acid detergent lignin，ADL）；非结构性碳水化合物，包括水溶性碳水化合物、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。采用蒽酮—硫酸比色法测定青贮饲料中的水溶性碳水化合物含量［24］。采用Van Soest等［25］的方法测定青贮饲料的中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和酸性洗涤木质素含量。根据Li等人［3］的方法计算纤维素（Cellulose）和半纤维素（Hemicellulose））含量。蔗糖、葡萄糖、果糖的含量使用试剂盒（G0545 W，苏州格锐思生物科技有限公司，中国）进行测定，该试剂盒采用己糖激酶法，通过检测340 nm下NADPH（还原型辅酶Ⅱ）的增加量，分别计算得到蔗糖、葡萄糖和果糖的含量。

1.5" 数据处理

基础数据利用Excel软件进行统计和分析，采用SPSS软件对试验数据进行方差分析（ANOVA）。采用Turkey对处理组平均值进行比较。Plt;0.05被认为差异具有统计学意义。

2" 结果与分析

2.1" 青贮原料的化学成分

杂交象草原料化学成分和微生物组成如表1所示。杂交象草的干物质含量为258.82 g·kg-1 FM；WSC含量为72.82 g·kg-1 DM；NDF，ADF和ADL含量分别为618.35，362.61和362.61 g·kg-1 DM；葡萄糖、果糖、蔗糖含量分别为16.63，11.57和3.01 g·kg-1 DM；杂交象草表面附着的乳酸菌、肠杆菌、酵母菌和霉菌数量分别为3.79，4.40，1.98，1.60 lg cfu·g-1 FM。

2.2" 添加剂和时间对杂交象草发酵品质的影响

如表2所示，添加剂与青贮天数的交互作用和青贮天数对pH值、LA、AA、PA、BA和氨态氮有显著影响（Plt;0.05）。添加剂对pH值、LA、AA、丙酸和氨态氮有显著影响（Plt;0.05）。随青贮时间的延长，CK和LPC处理pH值先下降后上升，AC和LP149处理的pH值呈下降趋势，且添加剂处理组的pH值显著低于对照组（Plt;0.05）。青贮60 d后，AC处理的pH值最低（4.18），其次为LP149处理（4.20）。各处理组的LA，AA，PA，BA和氨态氮含量呈上升趋势。乳酸菌添加处理组的LA含量高于对照组和AC处理；其中LPC处理的LA含量最高。LPC处理组AA含量低于其他处理组（Plt;0.05）。发酵过程中仅产生少量的PA和BA（lt;3.5 g·kg-1DM）。添加剂处理组的氨态氮含量显著低于对照组（Plt;0.05），且LPC和LP149处理中NH3-N浓度较低（Plt;0.05）。

2.3" 添加剂和时间对杂交象草结构性碳水化合物的影响

如表3所示，添加剂与青贮天数的交互作用对NDF，ADF和纤维素有显著影响（Plt;0.05）。添加剂对NDF，ADF，ADL，半纤维素和纤维素有显著影响（Plt;0.05）。青贮天数对NDF，ADF，半纤维素和纤维素有显著影响（Plt;0.05）。随青贮时间的延长，各处理的NDF，ADF，半纤维素和纤维素呈下降趋势。与对照相比，添加剂处理降低了NDF，ADF，半纤维素和纤维素的含量（Plt;0.05）。AC处理的NDF，ADF，半纤维素和纤维素含量最低（Plt;0.05），其次为LP149处理。

2.4" 添加剂和时间对杂交象草非结构性碳水化合物的影响

如表4所示，添加剂与青贮天数的交互作用对葡萄糖含量有显著影响（Plt;0.05）。添加剂、青贮天数对水溶性碳水化合物、葡萄糖、果糖和蔗糖有显著影响（Plt;0.05）。

随着青贮时间的延长，各处理的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖呈下降趋势。与对照相比，添加剂处理增加了青贮饲料的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖的含量。除果糖外，AC处理的WSC、葡萄糖和蔗糖含量显著高于其他处理组（Plt;0.05）；青贮7 d后葡萄糖含量与其他处理组呈倍数关系（Plt;0.05）。青贮14 d后，LP149处理中的WSC、葡萄糖和果糖含量高于LPC处理。

3" 讨论

通常认为原料中的乳酸菌数量gt; 105 cfu·g-1 FM时更有利于青贮饲料的保存［26］。然而，本研究中‘桂牧一号’杂交象草表面附着的乳酸菌数量较低（3.69 lg cfu·g-1 FM），无法满足优质青贮发酵的要求。因此，青贮添加剂的使用对于提高湿热地区杂交象草青贮饲料品质尤为重要。

pH值和有机酸作为评价青贮饲料发酵品质好坏的重要指标，能直观的反映不同处理对杂交象草青贮品质的影响［27］。一般认为，当pH值小于≤4.2时青贮发酵良好［28-29］。本研究中AC和LPC处理组的pH值在青贮60 d后≤ 4.2。青贮发酵过程中，有机酸的累积是导致pH值降低的主要原因［30］，尤其是乳酸的生成［31］。青贮过程中，添加剂处理组的乳酸含量高于对照。乳酸菌添加剂处理组能够促进乳酸菌发酵产生大量乳酸进而导致pH值快速降低［32］；且LP149处理组pH值更低，这与潘俊歆等［33］添加耐高温乳酸菌于柱花草（Stylosanthes guianensis）青贮中的试验结果一致。说明温带地区常用植物乳杆菌在高温地区的效果不佳［34］，而自选乳酸菌在高温条件下活性更好，能够快速建立酸性环境。AC处理组的pH值最低，这与王啸林等［35］研究结果一致。这是由于纤维素酶能够裂解木质纤维结构的β-1，4-键，提高原料细胞壁的降解速率，降低纤维素聚合度，半纤维素降解转化为水溶性碳水化合物，为乳酸菌发酵提供充足的发酵底物，促进乳酸发酵，降低pH值［16］。乙酸是异型发酵LAB的主产物之一，不仅能促进pH值的降低，还能有效抑制酵母菌和霉菌的生长，进而提高青贮饲料的有氧稳定性［36-37］。LPC处理的乙酸含量低于其他添加剂处理，这与Pitiwittayakul等［38］人的结果一致。原因可能是LPC菌株是同型发酵乳酸菌，利用底物广泛，产酸和耐酸能力强［39］，促进了同型乳酸发酵。与LPC处理不同，LP149处理组的乙酸含量较高，可能是青贮过程中添加LP149促进了具有抑菌活性的代谢产物的产生，如1，2-丙二醇等。青贮饲料中高浓度的氨态氮归因于蛋白质过度分解［40］。青贮过程中，所有添加剂处理组的AN浓度均显著低于对照组，这与赵苗苗等［9］的研究结果一致。表明在杂交象草青贮中添加纤维素酶和乳酸菌能更好的抑制不良微生物对蛋白质的分解，提高青贮品质。且相较于AC处理组，LPC和LP149处理的AN浓度更低，可能是因为相比酶制剂，添加乳酸菌能够提高乳酸菌的相对丰度，促进乳酸发酵，抑制了丁酸梭菌与植物蛋白的活性，减少蛋白质的降解，这与吴征敏等人［41］的结果一致。

结构性碳水化合物不能被青贮微生物直接利用，但可通过酶解、酸解或微生物活动释放出水溶性碳水化合物为微生物发酵提供底物，因此结构性碳水化合物又被称为间接发酵底物［29］。青贮过程中结构性碳水化合物最易降解组分的是半纤维素，其次是纤维素。青贮过程中，AC处理组的NDF、ADF、纤维素和半纤维素含量均显著低于其他处理，这与陈凌华等［42］的研究结果一致。目前已有研究证明纤维素酶含有一种或多种结合域（CBM）和域间连接肽，它能够促进纤维素酶与纤维素底物的结合，增加纤维素酶在底物上的浓度，从而提高纤维素酶的催化能力，降低粗纤维含量［43］。在青贮14 d后，LP149青贮饲料中NDF、ADF和纤维素含量低于LPC处理。有研究发现厌氧细菌能够分泌多酶聚合体降解木质素结构［10］。本试验中，与常温地区乳酸菌LPC相比LP149菌株在高温条件下可能会产生更多的多酶聚合体［44］。

非结构性碳水化合物是青贮发酵过程中可供微生物直接利用的重要底物来源，常见的非结构性碳水化合物有葡萄糖、果糖、蔗糖、果聚糖等，这类碳水化合物可溶于水，又被称为水溶性碳水化合物，LAB可直接利用WSC进行厌氧发酵［45］。青贮过程中，青贮饲料的WSC、葡萄糖、果糖和蔗糖呈下降趋势。其中葡萄糖和果糖含量下降是乳酸菌发酵和微生物利用的结果，而蔗糖含量下降是由于底物不足使蔗糖分解成葡萄糖和果糖。葡萄糖、果糖等己糖可通过6-磷酸葡萄糖酸代谢途径转化为二分子乳酸［28］。青贮过程中，AC处理的非结构性碳水化合物含量显著高于其他处理，尤其是葡萄糖含量在青贮7 d后与其他处理组呈倍数关系，纤维素酶在青贮前期酶解作用剧烈，产生的葡萄糖含量比微生物发酵消耗的多［3］ ，这一结果与李福厚等人［17］研究结果一致。青贮14 d后，LP149青贮饲料中WSC、葡萄糖和果糖含量高于LPC处理，这可能是因为LP149处理组中结构性碳水化合物的降解效果更好，破坏了细胞壁结构，使细胞内糖类扩散到细胞外，还能够直接或间接地促进了具有降解结构性碳水化合物能力的微生物活动［46］。

4" 结论

添加纤维素酶和乳酸菌均能促进杂交象草青贮饲料中结构性碳水化合物的降解，维持较高水溶性碳水化合物含量，进而促进乳酸发酵，降低pH值和氨态氮含量，明显改善了杂交象草青贮发酵品质，其中以纤维素酶添加效果最佳。

参考文献

［1］" 贾燕霞，玉柱，邵涛，等. 添加酶制剂对象草青贮发酵品质的影响［J］. 草地学报，2009，17（1）：121-124

［2］" 黄佩珊，张超，陈丹丹，等. 辣木叶提取物对柱花草和象草青贮品质的影响［J］. 草地学报，2023，31（7）：2194-2202

［3］" LI F H，KE W C，BAI J，et al. Pretreatment of Pennisetum sinese silages with ferulic acid esterase-producing lactic acid bacteria and cellulase at two dry matter Contents：Fermentation characteristics，carbohydrates composition and enzymatic saccharification［J］. Bioresource Technology，2020（295）：122261

［4］" 李莉，吴汉葵，解祥学，等. 添加纤维素酶和淀粉对象草青贮发酵品质的影响［J］. 动物营养学报，2021，33（9）：5025-5035

［5］" 赵金鹏. 添加剂对水稻秸秆青贮发酵品质及碳水化合物的影响［D］. 南京：南京农业大学，2018：3-8

［6］" 姚娜，赖志强，滕少花，等. 桂闽引象草对肉鹅生长性能的影响［J］. 中国草地学报，2016，38（3）：96-100

［7］" 黄志朝，易显凤，庞天德，等. 紫色象草发酵料对桂科黑猪育肥效果分析［J］. 饲料研究，2021.44（13）：35-39

［8］" 何玮，冉启凡.添加纤维素酶和乳酸菌对‘桂牧1号’杂交狼尾草青贮品质的影响［J］. 中国饲料，2022（3）：129-132

［9］" 赵苗苗，玉柱. 添加乳酸菌及纤维素酶对象草青贮品质的改善效果［J］. 草地学报，2015，23（1）：205-210

［10］ 李君风. 牦牛瘤胃中高效纤维素降解菌的分离，鉴定及其在青贮中的应用研究［D］. 南京：南京农业大学，2018：18-22

［11］ KUNG L M，SHAVER D R，GRANTR J，et al. Silage review：Interpretation of chemical，microbial，and organoleptic components of silages［J］. Journal of Dairy Science，2018（101）：4020-4033

［12］ TABSCCO E，PIANO S，REVELLO A，et al. Effect of Lactobacillus buchneri LN4637 and Lactobacillus buchneri LN40177 on the aerobic stability，fermentation products，and microbial populations of corn silage under farm Conditions［J］. Journal of Dairy Science，2011（94）：5589-5598

［13］ YAN Y H，LI X L，GUAN H，et al. Microbial community and fermentation characteristic of Italian ryegrass silage prepared with corn stover and lactic acid bacteria［J］. Bioresource Technology，2019（79）：166-173

［14］ CHEN C，XIN Y F，LI X，et al. Effects of Acremonium cellulase and heat-resistant lactic acid bacteria on lignocellulose degradation，fermentation quality，and microbial community structure of hybrid elephant grass silage in humid and hot areas［J］. Frontiers in microbiology，2022（13）：1066753

［15］ KHOTA W，PHOLSEN S，HIGG D，et al. Natural lactic acid bacteria population of tropical grasses and their fermentation factor analysis of silage prepared with cellulase and inoculant-ScienceDirect［J］. Journal of Dairy Science，2016（99）：9768-9781

［16］ BAI B，QIU R，WANG Z，et al. Effects of Cellulase and Lactic Acid Bacteria on Ensiling Performance and Bacterial Community of Caragana korshinskii Silage［J］. Microorganisms，2023（11）：337

［17］ 李福厚. 产阿魏酸酯酶乳酸菌对青贮饲料纤维降解、家畜消化及健康的影响及作用机制研究［D］. 兰州：兰州大学，2021：40-62

［18］ 黄小云，陈长福，黄勤楼，等. 乳酸菌和纤维素酶对狼尾草和圆叶决明混合青贮品质的影响［J］. 畜牧与兽医，2022（54）：2

［19］ 关皓，曾泰儒，帅杨，等. 西南高温高湿地区青贮中天然乳酸菌群落结构特征及优质乳酸菌的筛选［J］. 草业科学，2019，36（12）：202-212

［20］ 刘秦华，张建国，卢小良. 乳酸菌添加剂对王草青贮发酵品质及有氧稳定性的影响［J］. 草业学报，2009，18（4）：31-137

［21］ BRODERICK G A，KANG J H. Automated simultaneous determination of ammonia and total amino acids in ruminal fluid and in vitro media［J］. Journal of Dairy Science，1980（63）：64-75

［22］ ZONG C，WU Q，WU A，et al. Exploring the diversity mechanism of fatty acids and the loss mechanisms of polyunsaturated fatty acids and fat-soluble vitamins in alfalfa silage using different additives［J］. Animal Feed Science and Technology，2021（280）：115044

［23］ YAN Y H，LI J L，GUO X S，et al. A study on fermentation quality of Italian ryegrass and soybean straw mixed silage［J］. Acta Prataculturae Sinica，2014（4）：38

［24］ SOEST PJ VAN，ROBERTSON J B，LEWIS B A. Methods for dietary fiber，neutral detergent fiber，and nonstarch polysaccharides in relation to animal nutrition［J］. Journal of Dairy Science，1991（74）：3583-3597

［25］ LI F，DING Z，KE W，et al. Ferulic acid esterase-producing lactic acid bacteria and cellulase pretreatments of corn stalk silage at two different temperatures：Ensiling characteristics，carbohydrates composition and enzymatic saccharification［J］. Bioresource Technology，2019（282）：211-221

［26］ NI K，WANG F，ZHU B，et al. Effects of lactic acid bcteria and molasses additives on the microbial community and fermentation quality of soybean silage［J］. Bioresource Technology，2017（238）：706-715

［27］ 金丽娜，蒋苏苏，敬淑燕，等. 黄芪药渣与全株玉米混合青贮对饲料感官、发酵品质及营养成分的影响［J］. 草地学报，2024，32（2）：630-636

［28］ HE L，WANG C，XING Y，et al. Dynamics of proteolysis，protease activity and bacterial community of Neolamarckia cadamba leaves silage and the effects of formic acid and Lactobacillus farciminis［J］. Bioresource Technology，2019（294）：122127

［29］ MCDONALD P，HENDERSON A R，HERON S J E. The biochemistry of silage［M］. Marlow：Chalcombe Publication，1991：250-251

［30］ WANG C，ZHENG M，WU S，et al. Effects of gallic acid on fermentation parameters，protein fraction，and bacterial community of whole plant soybean silage［J］. Frontiers in Microbiology，2021（12）：662966

［31］ NWS A L，ZHAO J，DONG Z H，et al. Microbial diversity and fermentation profile of red clover silage inoculated with reconstituted indigenous and exogenous epiphytic microbiota［J］. Bioresource Technology，2020（314）：123606

［32］ XIONG H，ZHU Y，WEN Z，et al. Effects of cellulase， Lactobacillus plantarum，and sucrose on fermentation parameters，chemical composition，and bacterial community of hybrid Pennisetum silage［J］. Fermentation，2022（8）：356

［33］ 潘俊歆，李雪枫，龙仕和，等. 柱花草耐高温优质乳酸菌的筛选及对其青贮发酵品质的改善效果［J］. 草业科学，2024，41（2）：1-12

［34］ SILVA P V，PEREIRA G O，LEANDRO S E，et al. Effects of lactic acid bacteria with bacteriocinogenic potential on the fermentation profile and chemical composition of alfalfa silage in tropical Conditions［J］. Journal of Dairy Science，2016（99）：1895-1902

［35］ 王啸林，冯冠智，张城瑞，等. 乳酸菌和纤维素酶对马铃薯渣与玉米秸秆混合青贮发酵品质，有氧稳定性和体外发酵参数的影响［J］. 中国畜牧杂志，2022，58（4）：201-207

［36］ KLEINWSCHMIT D H，JR L K. A Meta-Analysis of the Effects of Lactobacillus buchneri on the fermentation and aerobic stability of corn and grass and small-grain silages［J］. Journal of Dairy Science，2006（89）：4005-4013

［37］ LI J F，YUAN X J，SEARE D，et al. Characterization of Enterococcus faecalis JF85 and Enterococcus faecium Y83 isolated from Tibetan yak （Bos grunniens） for ensiling Pennisetum sinese［J］. Bioresource Technology，2018（2）：70

［38］ PITIWITTAYALUI N，BUREENOK S，SCHONEWILLE J T，et al. Selective thermotolerant lactic acid Bacteria isolated from fermented juice of epiphytic lactic acid bacteria and their effects on fermentation quality of stylo silages［J］. Frontiers in Microbiology，2021（12）：673946

［39］ 朱春娟，原现军，董志浩，等. 添加剂对饲料型四倍体刺槐青贮发酵品质和体外消化率的影响［J］. 南京农业大学学报，2017，40（4）：725-731

［40］ 黄莉莹，崔卫东，田静，等. 大豆秸和稻草对甜玉米秸秆和湿啤酒糟混合青贮的影响［J］. 草地学报，2024，32（3）：945-951

［41］ 吴征敏，彭苏，王志敬，等. 添加乳酸菌和纤维素酶对菠萝渣青贮发酵品质和体外发酵的评价［J］. 动物营养学报，2022，34（12）：981-992

［42］ MU L，XIE Z，HU L，et al. Cellulase interacts with Lactobacillus plantarum to affect chemical composition，bacterial communities，and aerobic stability in mixed silage of high-moisture amaranth and rice straw［J］. Bioresource Technology，2020（315）：123772

［43］ 陈凌华，杨志坚，程祖锌. 添加酶制剂和乳酸菌对水稻秸秆青贮质量的影响［J］. 中国饲料，2018（20）：81-85

［44］ KURNIASIH S D，ALFI A，NATALIA D，et al. Construction of individual，fused，and co-expressed proteins of endoglucanase and β -glucosidase for hydrolyzing sugarcane bagasse［J］. Microbiological Research，2014（169）：725-732

［45］ LI J F，YUAN X J，DONG Z H，et al. The effects of fibrolytic enzymes，cellulolytic fungi and bacteria on the fermentation characteristics，structural carbohydrates degradation，and enzymatic Conversion yields of Pennisetum sinese silage［J］. Bioresource Technology，2018（264）：123-130

［46］ ZHAO J，DONG Z H，LI J F，et al. Ensiling as pretreatment of rice straw：The effect of hemicellulase and Lactobacillus plantarum on hemicellulose degradation and cellulose conversion［J］. Bioresource Technology，2018（266）：158-165

（责任编辑" 刘婷婷）