加味缩泉合剂制备工艺及质量标准研究

[摘要]"目的"优化加味缩泉合剂制备工艺，确定其质量标准。方法"以出膏率、莫诺苷和马钱苷总量为指标，通过正交试验确定加味缩泉合剂的制备工艺。采用Diamonsil"Plus"5μm"C18（250mm×4.6mm）色谱柱；流动相A为乙腈，流动相B为0.3%磷酸溶液，进行梯度洗脱；检测波长为240nm；流速为1.0ml/min；柱温为35℃。结果"确定提取工艺的条件为提取2次，分别以10倍量水、8倍量水，提取1.5h、1.0h。建立的莫诺苷、马钱苷含量测定方法的专属性、重现性、准确度均较好；莫诺苷在进样量0.1962～0.9810µg范围内线性关系良好，平均加样回收率为100.83%、相对标准偏差（relative"standard"deviation，RSD）为1.26%，精密度、稳定性等均符合要求。马钱苷在进样量0.0995～0.7960µg范围内线性关系良好，平均加样回收率为97.10%、RSD为0.84%，精密度、稳定性等均符合要求。结论"最终确定的加味缩泉合剂制备工艺简单，操作易行。含量测定方法专属性强、准确性可靠，可用于加味缩泉合剂的质量控制。

[关键词]"加味缩泉合剂；制备工艺；质量标准；含量测定；莫诺苷；马钱苷

[中图分类号]"R94""""""[文献标识码]"A""""""[DOI]"10.3969/j.issn.1673-9701.2024.30.012

Study"on"the"preparation"process"and"quality"standards"of"Jiawei"Suoquan"mixture

MENG"Lili1，"HUANG"Feixiang2，"XU"Jianbing3

1.Pharmacy"Department，"Hangzhou"Women’s"Hospital，"Hangzhou"310008，"Zhejiang，"China;"2.Department"of"Traditional"Chinese"Medicine，"Hangzhou"Women’s"Hospital，"Hangzhou"310008，"Zhejiang，"China;"3."Research"and"Development"Department，"Huisong"Pharmaceuticals，"Hangzhou"310005，"Zhejiang，"China

[Abstract]"Objective"To"optimize"the"preparation"process"of"Jiawei"Suoquan"mixture"and"determine"the"quality"standard."Methods"The"preparation"technology"of"Jiawei"Suoquan"mixture"was"determined"by"orthogonal"test"with"the"yield"of"paste，"the"total"amount"of"morroniside"and"loganin"as"indexes."The"column"was"Diamonsil"Plus"5μm"C18"（250mm×4.6mm）."Acetonitrile"as"mobile"phase"A，"0.3%"phosphoric"acid"solution"as"mobile"phase"B，"gradient"elution;"The"detection"wavelength"was"240nm;"The"flow"rate"was"1.0ml/min."The"column"temperature"was"35℃."Results"The"determined"extraction"process"conditions"were"extracted"twice，"with"10"times"of"water"and"8"times"of"water，"respectively，"for"1.5h"and"1.0h."The"established"methods"for"the"determination"of"morroniside"and"loganin"were"specific，"reproducibility"and"accurate."The"linear"relationship"of"morroniside"was"good"in"the"range"of"0.1962"to"0.9810µg，"the"average"recovery"was"100.83%，"relative"standard"deviation"（RSD）"was"1.26%，"and"the"precision"and"stability"met"the"requirements."The"linear"relationship"of"loganin"in"the"sample"size"range"from"0.0995"to"0.7960µg"was"good."The"average"recovery"was"97.10%"and"RSD"was"0.84%."The"precision"and"stability"met"the"requirements."Conclusion"The"preparation"process"of"Jiawei"Suoquan"mixture"is"simple"and"feasible."The"content"determination"method"is"specific，"accurate"and"reliable，"and"can"be"used"for"quality"control"of"Jiawei"Suoquan"mixture.

[Key"words]"Jiawei"Suoquan"mixture;"Preparation"process;"Quality"standard;"Content"determination;"Morroniside;"Loganin

经典方缩泉丸由益智仁、乌药和山药组成，具有补肾缩尿的功效，用于肾虚所致的小便频数、夜间遗尿等[1]。在原方基础上，酌加桑螵蛸、金樱子、升麻等中药，增强补肾助阳、固精缩尿的作用，治疗由膀胱过度活动症引发的夜尿多、尿频、尿急、尿失禁等，临床疗效良好[2]。但汤剂口感欠佳，保存携带不便。自2021年开始，杭州市妇产科医院开展加味缩泉合剂研制，并成功获得该制剂的制备工艺。加味缩泉合剂具有吸收快、起效迅速的特点，药剂的口感和便捷度获得改善，同时克服汤剂煎煮烦琐、易变质的缺点，提高患者的依从性和临床诊疗效果，符合医院制剂发展需求[3]。

加味缩泉合剂的研发主要通过正交试验选定制备工艺，采用薄层色谱法对蒸萸肉、升麻、乌药进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对蒸萸肉中的莫诺苷、马钱苷总量进行含量测定。

1""仪器与试药

1.1""仪器

TSC-E电子秤购自美国双杰兄弟有限公司，DHG-9245A电热鼓风干燥箱购自上海一恒科学仪器有限公司，TC-15电热套购自海宁市华星仪器厂，R-502旋转蒸发仪购自上海申胜生物技术有限公司，KQ-500DB数控超声波清洗器购自昆山市超声仪器有限公司，AL204、ME55/02及ME204TS/02电子天平购自梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司，U3000高效液相色谱仪购自赛默飞世尔科技公司。

1.2""试剂

甲醇、乙腈为色谱纯；甲醇、乙酸乙酯、乙醇、冰醋酸等其他试剂均为分析纯；超纯水。

1.3""试药

盐益智仁（批号：220901）、乌药（批号：220804）、炒桑螵蛸（批号：220618）、金樱子（批号：220811）、蒸萸肉（批号：210509）、盐杜仲（批号：220613）、山药（批号：230527）、黄芪（批号：230310）、升麻（批号：221122）、麸炒白术（批号：221017）、制远志（批号：230403）、煅龙骨（批号：220730）来源于浙江惠松制药有限公司，饮片均符合《中华人民共和国药典》要求。乌药对照药材（批号：121096-201907）购自中国食品药品检定研究院。莫诺苷对照品（批号：16190）、马钱苷对照品（批号：15368）、阿魏酸对照品（批号：15830）、异阿魏酸对照品（批号：15188）购自上海诗丹德标准技术服务有限公司。

2""方法和结果

2.1""制备工艺研究

2.1.1""正交试验因素及因素水平""工艺制备采用正交试验设计，考察因素的选择分别是浸泡时间、加水倍数、提取时间，且每个因素设置3个水平，设计L9（34）正交表，见表1。以出膏率、莫诺苷和马钱苷总量（mg/投料量）为考察指标。

2.1.2""综合评分"实验结果以出膏量占30%、莫诺苷和马钱苷的总量占70%进行加权计算综合评分，并进行方差分析。结果见表2、表3。

2.1.3""正交试验结果分析""以综合评分为试验结果的评价指标，由表2、表3可知，影响煎煮效果的因素顺序为提取时间＞加水倍数＞浸泡时间，其中加水倍数及提取时间具有显著性。经K值分析可知，试验的最佳提取工艺为A2B3C3，依据分析结果，结合实际的生产情况及能耗问题，综合考虑确定最终的提取工艺为A1B2C3，即药材不浸泡，加水倍数分别为一煎10倍、二煎8倍，提取时间分别为一煎1.5h、二煎1.0h。

2.1.4"nbsp;验证实验""称取2日处方量的饮片共3份，按照所选的提取工艺参数进行制备，测定出膏率、莫诺苷和马钱苷的总量（mg/投料量），结果可见所选定的制备工艺合理、稳定、可行，见表4。

2.2""薄层鉴别

2.2.1""蒸萸肉的鉴别"取加味缩泉合剂5ml，蒸干后在残渣中加入10ml甲醇，超声条件下处理20min，滤过，滤液蒸干。在残渣中加入2ml甲醇进行溶解，作为供试品溶液。另取马钱苷对照品，加甲醇制成0.5mg/ml溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸（50：10：1）为展开剂，通过展开、取出、晾干的流程后，将5%香草醛硫酸溶液进行喷洒，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，呈显相同的紫红色斑点。见图1。

2.2.2""升麻的鉴别""取加味缩泉合剂10ml，蒸干后在残渣中加入50ml无水乙醇，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，在残渣中加入2ml无水乙醇使其溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品、异阿魏酸对照品，加无水乙醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取对照品溶液2μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸（7：2：1）为展开剂，进行展开、取出、晾干流程后，置紫外线光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，呈显相同颜色的荧光斑点。见图2。

2.2.3""乌药的鉴别""取加味缩泉合剂10ml，加水稀释至20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，在残渣中加乙酸乙酯1ml使其溶解，作为供试品溶液。另取乌药对照药材2g，加水50ml，煮沸30min，滤过，滤液浓缩至20ml，用上述同法制成对照药材溶液。吸取对照药材溶液5µl、供试品溶液10µl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（15：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，呈显相同颜色的主斑点。见图3。

2.3""含量测定

2.3.1""色谱条件""Diamonsil"Plus"5μm"C18，250mm×"4.6mm；以乙腈为流动相A，以0.3%磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱（0～20min，7%A；20～50min，7%A→"20%A；50～50.1min，20%A→7%A；50.1～60min，7%A）；柱温为35℃；检测波长为240nm；进样量10μl。分离度＞1.5，理论板数按马钱苷峰计算应≥10"000。高效液相色谱（high"performance"liquid"chromatography，"HPLC）见图4。

2.3.2""对照品溶液的制备""取莫诺苷对照品、马钱苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1ml含莫诺苷50μg、马钱苷25μg的混合溶液，即得。配制结果：莫诺苷对照品母液浓度为0.1962mg/ml；马钱苷对照品母液浓度为0.1990mg/ml；莫诺苷、马钱苷混合对照品溶液中莫诺苷、马钱苷浓度分别为49.05μg/ml、24.87μg/ml。

2.3.3""供试品溶液的制备""精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加80%甲醇适量使其溶解，加80%甲醇至刻度，摇匀，离心（10"000rpm，5min），取上清液，即得。

2.3.4""线性与范围""分别精密吸取“2.3.2”项下莫诺苷对照品母液1、2、3、4、5μl及马钱苷对照品母液0.5、1、2、3、4μl，在“2.3.1”项色谱条件下进样测定。以进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。莫诺苷回归方程：y=1757.4415x-"0.2000，R²=0.9999；马钱苷回归方程：y=1757.4415x-"0.2000，R²=0.9999。结果表明，莫诺苷、马钱苷进样量分别在0.1962～0.9810µg、0.0995～0.7960µg范围内，其进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.3.5""精密度""精密吸取对照品溶液10μl，连续进样6次，测得莫诺苷峰面积相对标准偏差（relative"standard"deviation，RSD）为0.73%、马钱苷峰面积RSD为0.42%，表明仪器精密度良好。

2.3.6""稳定性""取加味缩泉合剂按含量测定方法，分别在0、2、4、8、12、24h测定，莫诺苷峰面积RSD为0.76%、马钱苷峰面积RSD为0.51%，供试品溶液在制备24h内稳定。

2.3.7""重复性""精密量取同一批供试品（批号：240101）1ml，共6份，按照含量测定方法测定。测得该批次的莫诺苷含量为0.80mg/ml、RSD为1.20%，马钱苷含量为0.42mg/ml、RSD为0.99%，表明该方法重复性良好。

2.3.8""加样回收率""取已知含量的样品（批号：240101），共12份，每份精密量取0.5ml。其中6份分别精密加入莫诺苷对照品母液2ml；剩余6份分别精密加入马钱苷对照品母液1ml，按照含量测定方法测定，计算加样回收率。莫诺苷平均回收率为100.83%、RSD为1.26%，马钱苷平均回收率为97.10%、RSD为0.84%，见表5。

2.3.9""样品含量测定""取3批中试产品，按含量测定方法测定，结果见表6。

3""讨论

医院制剂为科研提供研究基础，为中医传统剂型创新与优化提供思路，是医院临床用药不可或缺的组成部分[4]。医院制剂转化开发成新药，须保证其安全、有效，且质量可控。既往加味缩泉合剂各工艺参数不明，且无质控标准，在生产、管理、质检等方面均未达到药品生产要求。故本研究在兼顾科学性和适用性的基础上，起草并制定加味缩泉合剂制备工艺和质量标准，以更好地发展医院制剂及后期的新药转化。

3.1""处方分析

加味缩泉合剂在缩泉丸基础上，添加的黄芪、升麻有补中益气、益气固脱之功效，添加的金樱子、杜仲、桑螵蛸有补肾助阳、固精缩尿之功效，添加的远志、龙骨有宁心安神之功效。添加的山茱萸、白术有健脾益气、收涩固脱之功效，组方配伍后可加强补肾益气，固精缩尿的作用，可有效改善小便频数、夜间遗尿、尿急尿频等症状[5-8]。

3.2""TLC鉴别方法和药材选择

本研究参照《中华人民共和国药典："一部》[9]、中药配方颗粒质量标准等文献资料，对加味缩泉合剂选择蒸萸肉、升麻、乌药进行色谱鉴别条件研究及方法学考察。结果发现蒸萸肉、升麻、乌药的鉴别方法，在不同的温度、湿度下，采用不同的薄层板，基本可重现色谱结果，表明所确定的鉴别方法有良好的耐用性。

3.3""含量测定指标选择

《中华人民共和国药典："一部》[9]中未明确益智仁含量指标。处方中蒸萸肉为臣药，同时蒸萸肉（山茱萸炮制品）的功能与主治和本品的功能主治重合度很高，故在前期工艺研究指标性成分筛选基础上，结合文献，采用HPLC法，以莫诺苷和马钱苷的总量为含量测定指标，对本品含量进行质量控制。

3.4""检测波长及流动相选择

本实验参考文献反复摸索，选择240nm作为莫诺苷、马钱苷含量测定所用波长，以乙腈–0.3%磷酸溶液的流动相系统梯度洗脱进行测定[10-12]。结果发现，在此色谱条件下，阴性无干扰，且莫诺苷、马钱苷的分离效果较好，符合检测要求。

综上所述，本研究最终确定加味缩泉合剂的制备工艺，并通过3批中试生产，发现该工艺稳定性良好，同时研究中所建立的TLC和HPLC方法具有高度敏感度和特异性，并有良好的重现性，用于加味缩泉合剂的质量控制切实可行，也为今后医院制剂的研发提供参考。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。