丁酸梭菌对花鲈幼鱼生长性能、免疫消化及肠道菌群的影响

摘要：【目的】探究丁酸梭菌（Clostridium butyricum）对花鲈（Lateolabraxmaculatus）幼鱼生长性能，消化、免疫和抗氧化能力及肠道菌群的影响，为丁酸梭菌在花鲈鱼养殖中的应用提供理论依据。【方法】以花鲈幼鱼为试验材料设饲料中丁酸梭菌添加量为0（D0，对照）、0.25%（D1）、0.50%（D2）、1.00%（D3）、2.00%（D4）和4.00%（D5）6组，投喂花鲈幼鱼56 d，测定其生长性能、肠道消化酶活性、血清生化和免疫指标及肠道形态指标，分析肠道菌群组成。【结果】丁酸梭菌可显著降低饲料系数（Plt;0.05，下同），显著提高花鲈幼鱼的终末平均体质量，D3、D4和D5组的增重率及特定生长率均显著高于D0组。与D0组相比，D4组肠道糜蛋白酶和脂肪酶活性均显著提高，血清总胆固醇、甘油三酯含量和谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性均显著降低。D4组溶菌酶、碱性磷酸酶和总一氧化氮合酶活性均显著高于D0组，D3组酚氧化酶活性显著高于D0组；与D0组相比，D3和D5组过氧化氢酶活性及总抗氧化能力均显著提高，D4组超氧化物歧化酶活性显著提高，丙二醛含量显著降低。D2、D3和D5组花鲈幼鱼肠道肌层厚及绒毛高度均显著高于D0组。D3组花鲈幼鱼肠道菌群OTU数量和Chaol指数均显著高于D0组，各试验组花鲈幼鱼肠道菌群Simpson指数和Shannon指数均显著高于D0组；在门分类水平上，丁酸梭菌降低了变形菌门和厚壁菌门相对丰度，提高了放线菌门、浮霉菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、拟杆菌门和芽单胞菌门相对丰度；在属分类水平上，丁酸梭菌降低了劳尔氏菌属、肠弧菌属和弧菌属有害菌相对丰度，提高了节杆菌属和KD4-96_unclassified有益菌相对丰度。【结论】饲料中添加丁酸梭菌能显著提高花鲈幼鱼生长性能，提高消化、免疫和抗氧化能力，调节肠道菌群结构组成及其相对丰度，提高肠道菌群多样性，以2.00%添加量效果最好。

关键词：丁酸梭菌；花鲈；生长性能；免疫；消化；肠道菌群

中图分类号：S965.211文献标志码：A文章编号：2095-1191（2024）02-0366-12

Effects ofdietary Clostridium butyricum supplementation on growth performance，immunity，digestion and intestinal microbiota ofjuvenile Lateolabraxmaculatus

XU Chuang-wen¹-2，JIANG Kui²，YU Wei-3.4，LIN Hei-zhao¹.4，WANG Peng-fei¹，ZHAO Chao¹，LIU Xi-yao²，YANG Keng·2

（'South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences/Key Laboratoryof SouthChina Sea Fishery Resources Exploitationamp;Utilization，Ministry ofAgriculture and Rural Affairs/Guangdong Provincial Key Labo- ratory of Fishery Ecology and Environment，Guangzhou，Guangdong 510300，China;²Guangzhou Xinhailisheng Bio-technology Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510300，China;³Sanya Tropical Fisheries Research Institute/Key Labo ratory of Efficient Utilizationand Processing of Marine Fishery Resources of Hainan Province，Sanya，Hainan 572426，China;fShenzhen Base of South China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shen-zhen，Guangdong 518121，China）

Abstract：[Objective]This experiment was performed to investigate theeffects of dietary Clostridium butyricum on growth performance，digestion，immunity，antioxidant capacity and intestinal microbiota of juvenile Lateolabraxmacula-tus，and provide atheoretical basis for theapplication of C.butyricum in the culture of L.maculanus.【Method]Juvenile Lmaculatns was used as experiment material.Juvenile L.maculatus had been fed for 56 d with six diets containing 0（D0，control），0.25%（D1），0.50%（D2），1.00%（D3），2.00%（D4）and 4.00%（D5）C.butyricum.The growth performance intestinal digestive enzyme activity，serum biochemical and immune indicators，and intestinal morphology indicators of juvenile L.maculatus were measured，and thecompositionof intestinal microbiota was analyzed.[Result]The dietary C.butyricum could significantly reduce the feed coefficient（Plt;0.05，the same below），significantly improved final mean body weight of L.maculates，the weight gain rate（WGR），and specific growth rate（SGR）in D3，D4 and D5 groups were significantly higher than the D0 group.Compared with DO group，the activities of intestinal chymotrypsin，lipase were significantly increased in D4 group，while the contents of serum total cholesterol and triglyceride and the activities of glutamic oxalacetic transaminase and glutamic-pyruvic transaminase were significantly decreased.The activities of ly-sozyme，alkaline phosphatase and total nitric oxide synthase in D4 group were significantly higher than those in D0 group，and the activities of phenoloxidase in D3 group were significantly higher than thosein D0 group.Compared with D0 group，the catalase activity and total antioxidant capacity in D3 and D5 groups were significantly increased，the super-oxide dismutase activity in D4 group was significantly increased，and the malondialdehyde content was significantly de-creased.The intestinal muscle thickness and villusheight in D2，D3 and D5 groups were significantly higher than those in D0 group.The OTU number and Chaol index of the intestinal microflora of juvenile L.maculahus in D3 group were sig-nificantlyhigher than those in D0 group，and the Simpson index and Shannon index of the intestinal microflora in all test groups were significantly higher than those in D0 group.At the phylum level，C.butyricum reduced the relative abun-dance of Proteobacteria and Firmicutes.The relative abundance of Actinobacteriota，Planctomycetota，Acidobacteriota，Chloroflexi，Bacteroidota and Gemmatimonadota increased.At the genus level，C.butyricum decreased the relative abun-dance of harmful bacteria like Ralstonia，Enterovibrio and Vibrio，and increased the relative abundance of beneficial bac-teria like Arthrobacter and KD4-96_mclassified.[Conclusion]Adding C.butyricum in the dietary can significantly im-prove the growth performance，improve the digestion，immunity and antioxidant capacity of juvenile L.maculatus，regu-late the structure and relative abundance and improve the diversity of intestinal microbiota of juvenileL.maculatts.The best effect is to add 2.00%of Cbutyricum tothe dietary

Key words：Clostridium butyricum;Lateolabraxmaculatus;growth performance;immunity;digestion;intestinal

microbiota

Foundation items：Hainan Province Science and Technology Special Fund（ZDYF2022XDNY349）;Hainan Natural Science Foundation（321QN0942）;CentralPublic-interest Scientific InstitutionBasal ResearchFund，CAFS（2023TD21）;Shenzhen Scienceand Technology Project（JCYJ20230807150859010）

0引言

【研究意义】花鲈（Lateolabrax maculatus）又名七星鲈，主要分布于西北太平洋近岸、我国沿海及各大通海江河；属于广盐广温性鱼类，具有肉质鲜美和生长快速的特点，是沿海地区水产养殖重要的经济鱼类之一（虞为等，2021）。根据《2022中国渔业统计年鉴》，2021年全国花鲈养殖总量19.91万t，主要养殖地区为广东、福建、浙江和山东（农业农村部渔业渔政管理局等，2022）。目前，由于水产养殖环境日益恶化和用药不当，花鲈养殖过程中的病毒病、细菌病愈加频发和复杂，导致花鲈出现肠炎、空肠、消化吸收率低等现象，严重影响其生长性能和成活率 （De et al.，2014），制约产业发展。探寻能改善花鲈肠道健康、促进其生长和提高机体免疫功能的饲料添加剂，对花鲈养殖产业健康发展具有重要意义。【前人研究进展】常青等（2006）研究发现，饲料中添加0.50%和1.00%壳聚糖可显著促进花鲈生长，但不同添加浓度对成活率均无影响。胡晓伟等（2018）将低聚木糖添加至饲料中投喂花鲈，结果发现可显著降低肠道沙门氏菌属（Salmonella）细菌和大肠杆菌（Escherichia coli）数量，显著增加双歧杆菌属（Bifidobacterium）细菌数量。虞为等（2021）研究发现，饲料中添加牛磺酸可显著提高花鲈肠道蛋白酶和脂肪酶活性，并显著提高溶菌酶活性及免疫球蛋白M和补体4浓度。丁酸梭菌（Clostridium buty-ricum）隶属芽孢杆菌科（Bacillaceae）梭菌属（Clos-tridium），丁酸、乙酸和丙酸等短链脂肪酸是其主要的代谢产物，通过β氧化作用进行能量代谢，是养殖动物修复和再生肠道上皮细胞的主要能量来源（Cao et al.，2012;Junghareet al.，2012）。将适量丁酸梭菌添加至饲料中投喂养殖动物，不仅能帮助其保持肠道健康和提高细胞活力，还能使其提高粘蛋白分泌量，修复肠道黏膜并改善肠道通透性，恢复肠道的健康生理功能（Kanai et al.，2015;Tran et al.，2020）。近年来，丁酸梭菌已广泛应用于水产养殖，皖（Miichthys miiuy）（宋增福和吴天星，2007）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）（Duan et al.，2017;杨铿等，2022）、虹鳟（Oncorhynchus mykiss）（樊英等，2019）、斑节对虾（Penaeus monodon）（Duan et al.， 2019）、罗非鱼（Oreochromis niloticus）（廖庆钊等，2021）、鲤（Cyprinus carpio）（Meng et al.，2021）、卵形鲳参（Trachinotus ovatus）（吴杨等，2022）和珍珠龙胆石斑鱼（Epinephelusfuscoguttatus？×E.lanceola-tus d）（Yang et al.，2023）等养殖品种均有报道，相关研究结果表明丁酸梭菌能显著提升养殖动物的生长性能和免疫功能，且能调节肠道菌群。【本研究切入点】目前，花鲈饲料中壳聚糖、低聚木糖和牛磺酸等添加剂应用已有报道（常青等，2006;胡晓伟等，2018;虞为等，2021），而丁酸梭菌作为一种能改善养殖动物肠道健康的饲料添加剂，其对花鲈的影响鲜见报道。【拟解决的关键问题】以花鲈幼鱼为试验材料，在饲料中设不同丁酸梭菌添加量，测定其生长性能、肠道消化酶活性、血清生化和免疫指标及肠道形态指标，分析肠道菌群组成。探究丁酸梭菌对花鲈幼鱼生长性能、消化、免疫和抗氧化能力及肠道菌群的影响，为丁酸梭菌在花鲈养殖中的应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1饲料配方

丁酸梭菌菌液（1×109CFU/mL）由广州市欣海利生生物科技有限公司提供。海水鱼膨化配合饲料购自广东粤海饲料集团股份有限公司，作为花鲈基础饲料，主要原料组成：鱼粉、鱼油、豆油、豆粕、面粉、硫酸二氢钙、硫酸锌、硫酸亚铁、维生素A、维生素C、维生素D3、维生素E和叶酸等，其营养水平见表1。以不添加丁酸梭菌为对照组（D0），设试验组饲料丁酸梭菌添加量为0.25%（DI）、0.50%（D2）、1.00%（D3）、2.00%（D4）和4.00%（D5），每组3个平行。分别量取0、12.5、25.0、50.0、100.0和200.0 mL丁酸梭菌菌液置于烧杯，纯净水补足至1 L并搅拌均匀，与5kg基础饲料充分混合均匀，-20℃密封保存。

1.2试验用鱼及饲养管理

花鲈幼鱼购自深圳市深海农场海洋发展有限公司，在中国水产科学研究院南海水产研究所深圳基地展开养殖试验，动物试验由中国水产科学研究院南海水产研究所动物伦理委员会批准，批准号nhdf 2023-15。将花鲈幼鱼置于池塘网箱中暂养1周，每天用基础饲料饱食投喂2次，试验前禁食24 h，选取大小相近且活力较好的花鲈幼鱼25尾（平均体质量9.36±0.15 g），置于1.0 m×1.0 m×1.5m网箱内养殖，共设18个网箱。各组每天6：00和17：00饱食投喂相应饲料，投喂0.5 h后，收集浮于水面的剩余饲料并烘干称量，记录花鲈摄食量、体质量和死亡尾数。养殖试验周期为56 d，水温为（28.50±2.50）℃，pH为8.00±0.50，溶解氧gt;4.0 mg/L，氨氮lt;0.5 mg/L。

1.3样品采集

养殖试验结束后禁食24 h，测量每个网箱内全部花鲈体质量并统计尾数；每个网箱随机选取6尾鱼，测量体长和体质量，用经1%肝素钠润洗的2 mL注射器尾部静脉取血，4℃下4000 r/min离心10 min，上清液移至1.5 mL离心管，-80℃保存，用于测定血清生化指标和免疫指标。采血后进行解剖，取内脏团和肝脏，称量记录质量，肝脏置于10 mL离心管，-20℃保存；取1份肠道中肠，置于10.0 mL 4%多聚甲醛溶液中常温保存，用于肠道组织切片制作；另取1份肠道后肠，置于10.0 mL保存液（1%0.5 mol/L EDTA，75%无水乙醇，24%无菌水）中-20℃保存，用于肠道菌群分析；将剩余肠道组织置于10 mL离心管中，-20℃保存，用于测定消化酶活性。

1.4测定指标及方法

1.4.1生长性能测定按以下公式计算增重率（Weight gain rate，WGR）、特定生长率（Specific growth rate，SGR）、成活率（Survival rate，SR）、饲料系数（Feed conversion ratio，FCR）、肥满度（Condition factor，CF）、脏体比（Viscerosomatic index，VSI）和肝体比（Hepa-tosomatic index，HSI）：

式中，W，为终末平均体质量（g），W₀为初始平均体质量（g），d为试验天数，N，为终末尾数，N₀为初始尾数，F为总摄食量（g），W₂为体质量（g），L为体长（cm），W为内脏团质量（g），W为肝脏质量（g）。

1.4.2肠道消化酶活性测定称取肠道组织0.5g，置于预冷的2.0 mL 0.85%生理盐水中剪碎，按10%（m/v）加入生理盐水，冰水浴下3000 r/min机械匀浆 （10 s/次，连续2次），制成组织匀浆，2500 r/min离心10 min，取上清液，测定糜蛋白酶（Chymotrypsin）、脂肪酶（Lipase）和淀粉酶（Amylase）活性。

1.4.3血清生化和免疫指标测定血清生化指标总蛋白（TP）、总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、尿酸（UC）含量和谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）活性委托广州新海医院检验中心测定，所用仪器为HITACHI-7180全自动生化分析仪[日立高新技术（上海）国际贸易有限公司]。采用南京建成生物工程研究所相应试剂盒测定血清溶菌酶（LZM）、酚氧化酶（PO）、总一氧化氮合酶（TNOS）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量及总抗氧化能力（TAOC）。

1.4.4肠道组织切片制作及形态分析肠道组织切片制作、HE染色和显微摄影委托武汉塞维尔生物科技有限公司进行，使用CaseViewer测量肠道绒毛高度和肌层厚度。

1.4.5肠道菌群分析高通量测序分析委托广州吉瑞基因科技有限公司进行，使用引物515F（5'-GT GCCAGCMGCCGCGG-3'）和907R（5'-CCGTCAATT CMTTTRAGTTT-3'）对16S rDNA序列V4～V5区进行扩增，利用Ⅲumina Miseq平台进行测序分析，采用QIIME 1.9.1计算肠道菌群Alpha多样性指数。

1.5统计分析

试验数据采用Excel 2021进行整理，使用SPSS19.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA），利用Duncan's法进行多重比较分析，结果以平均值±标准差表示。

2结果与分析

2.1生长性能测定结果

丁酸梭菌对花鲈幼鱼生长性能的影响如表2所示。随着丁酸梭菌添加量的升高，花鲈幼鱼终末平均体质量、增重率和特定生长率整体均呈先上升后下降的变化趋势，饲料系数呈先下降后上升的变化趋势。D1、D2、D3、D4和D5组终末平均体质量均显著高于D0组（Plt;0.05，下同），其中，D3组终末平均体质量（28.07 g）最高，显著高于D1和D2组；D3、D4和D5组的增重率及特定生长率均显著高于D0组；D3和D4组饲料系数（1.33和1.39）均显著低于DO组；D1、D2、D3和D4组成活率均显著高于D0组；D4组脏体比（8.20%）最高，显著高于D0组，各组间的肝体比和肥满度均无显著差异（Pgt;0.05，下同）。

2.2肠道消化酶活性测定结果

由表3可看出，花鲈幼鱼肠道糜蛋白酶和脂肪酶活性随着丁酸梭菌添加量的升高，均呈先上升后下降的变化趋势，D4组肠道糜蛋白酶活性（0.99 U/mg）最高，显著高于D0组（0.49 U/mg）;D3组肠道脂肪酶活性（8.02 U/g）最高，且D3和D4组肠道脂肪酶活性均显著高于D0组；各组间肠道淀粉酶活性无显著差异。

2.3血清生化指标测定结果

丁酸梭菌对花鲈幼鱼血清生化指标的影响如表4所示，D1和D2组血清总蛋白含量均显著高于D0、D3、D4及D5组；D3、D4和D5组总胆固醇含量均显著低于D0、D1及D2组；D4和D5组血清甘油三酯含量（3.55和3.43 mmol/L）均显著低于D0、D1及D2组；各组间尿酸含量无显著差异；D4组谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性（45.00和9.00 U/L）均显著低于D0、D1及D2组。表明添加适量丁酸梭菌能提高花鲈幼鱼血清总蛋白含量，降低总胆固醇、甘油三酯含量和谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性。

2.4血清免疫指标测定结果

如表5所示，随着饲料中丁酸梭菌添加量的增加，花鲈幼鱼血清溶菌酶活性呈先上升后下降的变化趋势，且D3和D4组溶菌酶活性（73.19和78.61 U/mL）均显著高于D0组（35.56 U/mL）;D3组血清酚氧化酶活性（0.46 U/mL）显著高于D0组（0.19U/mL），其他试验组与D0组无显著差异；D4组碱性磷酸酶活性（34.00 U/mL）显著高于D0组（23.33 U/mL）;D2和D4组血清总一氧化氮合酶活性（30.65和30.58 U/mL）均显著高于D0组。表明饲料中添加适量丁酸梭菌能提高花鲈幼鱼血清溶菌酶、酚氧化酶、碱性磷酸酶和总一氧化氮合酶活性。

2.5血清抗氧化能力测定结果

如表6所示，随着饲料中丁酸梭菌添加量的增加，花鲈幼鱼血清超氧化物歧化酶活性呈上升趋势，且D2（156.12 U/mL）、D3（157.05 U/mL）、D4（162.21 U/mL）和D5组（163.03 U/mL）均显著高于D0组（147.37U/mL）;D1、D2、D3和D5组过氧化氢酶活性均显著高于D0组，且D2和D3组均显著高于D5组，D4与D0组无显著差异；D4和D5组血清丙二醛含量（8.59和7.63 nmol/L）均显著低于D0组（10.69nmol/L）;D3和D5组血清总抗氧化能力（75.18和70.26 U/mL）均显著高于D0组（52.58 U/mL），其余试验组与D0组无显著差异。表明饲料中添加适量丁酸梭菌能提高花鲈幼鱼血清超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性和总抗氧化能力，降低丙二醛含量。

2.6肠道组织形态分析结果

花鲈幼鱼肠道组织切片如图1所示，不同丁酸梭菌添加量的花鲈肠道组织形态无明显差异，均未发生明显病变。对花鲈幼鱼肠道组织形态指标的测量结果如表7所示，D2、D3、D4及D5组的肠道肌层厚度均显著高于D0和D1组；D2、D3及D5组的肠道绒毛高度均显著高于D0、D1和D4组。

2.7肠道菌群分析结果

对花鲈幼鱼肠道菌群进行Alpha多样性分析，结果如表8所示，各组检测覆盖度均为1.00;D3组花鲈幼鱼肠道OTUs数量（1041.00）和Chaol指数（1042.72）均为最高，且均显著高于D0组，D1、D2、D4和D5组间无显著差异；各试验组花鲈幼鱼肠道菌群Shannon指数和Simpson指数均显著高于D0组。

不同丁酸梭菌添加量的花鲈幼鱼肠道菌群门分类水平相对丰度如图2所示，变形菌门（Proteobacte-ria）、放线菌门（Actinobacteriota）、浮霉菌门（Plancto-mycetota）、酸杆菌门（Acidobacteriota）和绿弯菌门（Chloroflexi）等是花鲈幼鱼肠道的主要菌门，各组间主要菌门组成基本一致，但相对丰度存在一定差异。各试验组变形菌门和厚壁菌门（Firmicutes）相对丰度明显低于D0组（57.94%和8.63%），放线菌门、浮霉菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、拟杆菌门（Bacteroidota）和芽单胞菌门（Gemmatimonadota）相对丰度均显著高于D0组。各试验组厚壁菌门/拟杆菌门比值（2.78～5.38）明显低于D0组（12.20）。

不同丁酸梭菌添加量的花鲈幼鱼肠道菌群属分类水平相对丰度如图3所示，劳尔氏菌属（Ralstonia）、肠弧菌属（Enterovibrio）、弧菌属（Vibrio）、Candidatus_Arthromitus和Vicinamibacteraceae_unclassified等是主要菌属。其中D0组劳尔氏菌属相对丰度（17.19%）、肠弧菌属相对丰度（10.60%）、弧菌属相对丰度（7.34%）和Candidatus_Arthromitus相对丰度（6.59%）均明显高于各试验组，各试验组间无明显差异。而各试验组中Vicinamibacteraceae_unclassified、Gemmatimonadaceae_unclassified、Actinobacteriota_unc-lassified、KD4-96_unclassified、JG30-KF-CM45unclassifed、小梨形菌属（Pirellula）、节杆菌属（Arthro-bacter）和芽球菌属（Blastococcus）相对丰度均明显高于D0组。

3讨论

3.1丁酸梭菌对花鲈幼鱼生长性能的影响

生长性能是反映动物机体代谢的综合性指标，丁酸梭菌作为饲料添加剂已在畜禽和水产养殖中大量应用，相关研究结果显示其能显著提高生长性能并降低饲料系数。在珍珠龙胆石斑鱼（黄灵等，2016;何瑞鹏等，2017）、银鲳（Pampus argenteus）（Gao et al.，2016）等养殖动物饲料中添加丁酸梭菌，均能提高生长性能并降低饲料系数，本研究结果与之相似。D3、D4和D5组终末平均体质量、增重率及特定生长率均显著高于D0组；D3和D4组饲料系数均显著低于D0组。但随着丁酸梭菌添加量的升高，花鲈幼鱼生长性能呈先上升后下降的变化趋势，综合来看，2.00%添加量对生长性能的提升效果最好。推测饲料中的丁酸梭菌进入花鲈幼鱼肠道内并定殖，所产生的代谢产物丁酸和丙酸等短链脂肪酸为肠道上皮细胞提供了能量，提升了肠道的消化吸收功能（吴杨等，2022）;但少量或过量的丁酸梭菌均会产生过多代谢产物，抑制机体相关生长因子，从而抑制机体的生长性能。本研究中，与D0组相比，D4组花鲈幼鱼肠道糜蛋白酶和脂肪酶活性均显著提高，随着丁酸梭菌添加量的升高，糜蛋白酶和脂肪酶活性均呈先上升后下降的变化趋势，与生长性能变化趋势一致，肠道消化酶活性反映了丁酸梭菌对花鲈幼鱼生长性能的影响，与李维康等（2022）添加丁酸梭菌能提高凡纳滨对虾肠道蛋白酶和脂肪酶活性的研究结果一致。推测进入花鲈幼鱼体内的丁酸梭菌能分泌大量消化酶和维生素，提高了肠道消化酶活性，提高消化吸收能力，促进了机体生长。

3.2丁酸梭菌对花鲈幼鱼血清生化指标的影响

血清生化指标是反映鱼类健康状态、营养水平和组织器官机能状态的重要指标（韩娜娜和史成银，2010）。血清总蛋白含量与机体营养状况和蛋白质代谢水平有关，总蛋白含量越高，表明蛋白代谢越旺盛。血清总胆固醇和甘油三酯含量反映机体脂质吸收水平和器官功能状况，含量高则表明外源物质对机体造成了负担。血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性是反映肝脏功能的重要指标，其活性与肝脏受损程度呈正相关，谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性越低，对鱼类的生长越有利（Giannini et al.，2003）。叶海斌等（2018）研究发现，在饲料中添加凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）和丁酸梭菌，虹鳟血清总胆固醇和甘油三酯含量显著降低；覃美兰等（2022）研究发现，丁酸梭菌能显著降低吉富罗非鱼血清总胆固醇含量，保障脂类代谢正常；王海瑞等（2022）研究发现，适量丁酸梭菌能显著降低黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）血清谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性；本研究中，与D0组相比，D1和D2组血清总蛋白含量均显著提高，D4组血清总胆固醇、甘油三酯含量和谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性均显著降低，与上述前人研究结果一致。表明适量丁酸梭菌能提高花鲈幼鱼蛋白质合成代谢，促进脂质吸收，保护肝脏健康。

3.3丁酸梭菌对花鲈幼鱼免疫和抗氧化能力的影响

溶菌酶、酚氧化酶和总一氧化氮合酶等是鱼类重要的非特异性免疫酶，溶菌酶的溶菌效应是鱼体防御细菌性病害的有效手段，溶菌酶活性的高低可反映鱼体免疫力的强弱（虞为等，2021）;碱性磷酸酶活性是衡量机体免疫状态的重要指标之一，可用于鱼类疾病诊断和生理活动分析（Dalvi et al.，2017）。宋会仪（2007）发现丁酸梭菌能提高美国红鱼（Sciae-nops ocellatus）的酚氧化酶和碱性磷酸酶活性；王海瑞等（2022）研究发现，丁酸梭菌能显著提高黄颡鱼溶菌酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力；本研究中，D4组溶菌酶、碱性磷酸酶和总一氧化氮合酶活性均显著高于D0组，D3组酚氧化酶活性显著高于D0组，与宋会仪（2007）、王海瑞等（2022）研究结果相符。超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性可反映鱼体抗氧化能力和氧自由基的代谢，高活性的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶可抑制氧自由基的形成；丙二醛含量则是脂质过氧化程度的重要指标，反映了鱼体活性氧的累积（Liet al.，2009）。饲料中添加丁酸梭菌能提高吉富罗非鱼幼鱼（覃美兰等，2022）、罗非鱼（李洪琴，2021）、凡纳滨对虾（阳田恬等，2022）和中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis）幼蟹（彭佳慧，2023）超氧化物歧化酶活性和总抗氧化能力，降低丙二醛含量。本研究中，与D0组相比，D3和D5组过氧化氢酶活性及总抗氧化能力均显著提高，D4组超氧化物歧化酶活性显著提高，丙二醛含量显著降低，与上述前人研究结果相似。推测丁酸梭菌代谢分泌的丁酸盐和氢气能与自由基相结合，减少氧化应激；同时丁酸梭菌能代谢产生超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等，提高鱼体抗氧化酶活性。

3.4丁酸梭菌对花鲈幼鱼肠道菌群的影响

本研究中，D2、D3和D5组花鲈幼鱼肠道肌层厚度及肠绒毛高度均显著高于D0组，与Duan等（2017）丁酸梭菌能显著提高凡纳滨对虾肠道绒毛高度的研究结果相符。鱼类肠道包含复杂、多样的动态微生物群落，相对稳定的肠道微生物群落能为鱼体提供外源消化酶分解吸收食物，保障正常的消化和吸收功能，促进鱼体健康生长（Ray et al.，2012）。吴杨等（2022）研究发现，饲料中添加丁酸梭菌能提高卵形鲳参肠道菌群Chao1和Shannon指数；本研究中，D3组花鲈幼鱼肠道菌群OTU数量和Chaol指数均显著高于D0组，所有试验组花鲈幼鱼肠道菌群Simpson和Shannon指数均显著高于D0组，表明丁酸梭菌提高了肠道菌群多样性，与吴杨等（2022）研究结果相符。鱼体受外源饵料或环境改变刺激时，正常微生物群落紊乱，条件致病菌定殖、爆发，引起鱼体器官病变和肠炎、消化吸收障碍等疾病（van Doan et al.，2014）。在门分类水平上，变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门和放线菌门是鱼类肠道菌群的主要组成，其中变形菌门最为主要（孙永旭等，2019）;变形菌门丰度过高，会打破鱼类肠道微生态环境稳定，引起肠炎等疾病，也是造成机体腐败的主要细菌门（韩少锋，2010）。本研究中，丁酸梭菌降低了变形菌门和厚壁菌门相对丰度，提高了放线菌门、浮霉菌门、酸杆菌门、绿弯菌门、拟杆菌门和芽单胞菌门相对丰度，表明丁酸梭菌抑制了部分有害菌生长，与虹鳟（樊英等，2019）和罗非鱼（Liet al.，2019）等其他鱼类的研究结果相似。此外，厚壁菌门/拟杆菌门比值与肠道炎症和肥胖有关，比值越高炎症率越大（Turnbaugh et al.，2006），本研究中各试验组比值均明显低于DO组，表明丁酸梭菌降低了花鲈幼鱼肠道有害菌相对丰度，保护和改善了肠道健康。

在属分类水平上，发光杆菌属（Photobacterium）、鲸杆菌属（Cetobacterium）、梭菌属和弧菌属是花鲈肠道的主要优势菌属（林能锋等，2021）。弧菌属能引起养殖动物肠炎和白便等疾病，影响机体生长性能和健康状况（曹海鹏等，2016）。本研究中，各试验组花鲈肠道劳尔氏菌属、肠弧菌属和弧菌属相对丰度均显著低于D0组，表明添加丁酸梭菌能降低有害菌相对丰度，与杨铿等（2022）关于凡纳滨对虾的研究结果一致。丁酸梭菌能促进双歧杆菌和乳酸菌等有益菌繁殖，抑制大肠杆菌（Escherichia coli）等致病菌繁殖，宋增福和吴天星（2007）研究发现，丁酸梭菌C₂菌株可促进晚中肠和后肠双歧杆菌繁殖，假单胞菌属成优势属，同时抑制大肠杆菌生长，显著降低肠产气杆菌属（Enterobacter）、短杆菌属（Brevibacte-rium）和不动杆菌属（Acinetobacter）等丰度。朱振祥（2019）研究发现，丁酸梭菌能提高鲤肠道拟杆菌属（Bacteroides）丰度，且二者呈正相关。农斯伟等（2021）研究发现，丁酸梭菌能显著提高黄鸡肠道内乳杆菌属（Lactobacillus）和梭菌属的有益菌丰度。

节杆菌属对甲基对硫磷和草甘膦的降解效果显著，且部分菌株具有腐殖质还原特性，在水产等农业领域具有广泛应用前景（李海雷等，2008;叶明等，2009;陈楠等，2013）。绿弯菌门KD4-96细菌为有益菌，对磷的溶解释放具有促进作用，与总磷呈正相关（Eo and Park，2016;Chen et al.，2021）。本研究中，丁酸梭菌显著提高了花鲈肠道提高了节杆菌属和KD4-96_unclassified有益菌相对丰度。推测丁酸梭菌进入花鲈肠道后，改变了肠道菌群结构，其分泌的代谢产物为有益菌提供能量，促进其增殖；破坏有害菌的适宜生存环境，从而抑制有害菌的繁殖，降低其相对丰度。

4结论

饲料中添加丁酸梭菌能显著提高花鲈幼鱼生长性能，提高消化、免疫和抗氧化能力，调节肠道菌群结构组成及其相对丰度，提高肠道菌群多样性，以2.00%添加量效果最好。

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（责任编辑 刘可丹）