亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性对脑卒中合并H型高血压病人治疗效果的影响

张驰 李静 胡长阔 李敏 张云鹏 窦志杰

摘要 目的： 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点多样性对脑卒中合并H型高血压病人治疗效果的影响。 方法： 纳入2020年9月—12月承德医学院附属医院收治的120例脑卒中合并H型高血压病人，所有病人均给予高血压常规治疗及脑卒中二级预防治疗，在此基础上给予叶酸、维生素B 6和甲钴胺片联合治疗。比较不同MTHFR C677T位点基因型病人临床特征、治疗后血清同型半胱氨酸（Hcy）水平变化及疗效，分析MTHFR C677T位点T等位基因对病人的影响。 结果： 120例病人中MTHFR C677T位点CC、CT及TT基因型病人分别为27例（22.50%）、56例（46.67%）和37例（30.83%），TT基因型病人入院时美国国立卫生院卒中量表（NIHSS）评分、大脑中动脉（MCA）狭窄占比均高于CC基因型和CT基因型（ P ＜0.05）。治疗3个月后，不同MTHFR C677T位点基因型病人血清Hcy水平均较治疗前降低，TT基因型病人Hcy水平下降程度低于CC基因型和CT基因型（ P ＜0.05）。TT基因型病人脑卒中治疗总有效率为72.97%，低于CC基因型病人的92.59%（ P ＜0.05）。携带MTHFR C677T位点T等位基因与血清Hcy水平升高密切相关（ P ＜0.05）。 结论： MTHFR基因C677T位点多态性与脑卒中合并H型高血压病人血清Hcy水平密切相关，可对脑卒中症状的改善和MCA狭窄造成影响。

关键词  脑卒中；H型高血压；亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；C677T位点；同型半胱氨酸

doi：  10.12102/j.issn.1672.1349.2024.09.026

脑卒中可由颅内外动脉闭塞引发，而亚洲人脑卒中多由颅内动脉闭塞造成，其中大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）是供血范围最广泛的颅内动脉。研究表明，MCA闭塞导致的脑卒中多预后不良、复发风险高  ［1］ 。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）是在机体叶酸代谢中发挥重要作用的蛋白酶，MTHFR C677T位点基因型是影响机体叶酸代谢的重要因素  ［2］ ，而叶酸、B族维生素等摄入不足导致的同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代谢障碍是引起Hcy水平升高的主要原因  ［3］ 。H型高血压是指伴Hcy水平升高的原发性高血压，Hcy升高是多种心脑血管疾病的独立危险因素  ［4.5］ 。本研究旨在探究MTHFR C677T位点基因多样性对脑卒中合并H型高血压病人治疗效果的影响，并分析其与MCA狭窄的关系，以期为脑卒中合并H型高血压病人的预防和个体化治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2020年9月—12月承德医学院附属医院收治的120例脑卒中合并H型高血压病人，其中男72例，女48例；吸烟31例；年龄58～76（67.73±5.50）岁。本研究获得承德医学院附属医院伦理委员会批准（伦理审批号LL2021094）。所有受试者均被告知研究内容、注意事项，并自愿签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：收缩压（systolic blood pressure，SBP）≥ 140 mmHg和（或）舒张压（diastolic blood pressure，DBP）≥90 mmHg，且血清Hcy水平≥10 μmol/L；符合缺血性脑卒中的相关诊断标准  ［6］ ；发病时间＜6 h。排除标准：合并严重肝肾功能不全、恶性肿瘤及感染性疾病者；合并冠心病、心房颤动、心肌炎、风湿性心脏病等心脏疾病者；对本研究使用药物存在禁忌证者。

1.3 治疗方法

病人入院后给予常规治疗，符合溶栓适应证者给予静脉溶栓治疗，经颅多普勒超声提示颅内动脉狭窄，并经血管造影明确狭窄程度＞70%的轻微神经症状病人和狭窄程度＞50%的明显神经症状病人给予血管内介入治疗。溶栓24 h内均给予常规调整血压、血脂等治疗，24 h后给予脑卒中二级预防治疗，包括饮食运动指导及β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（ARB）、他汀类药物、抗血小板凝集药物等治疗。在此基础上给予叶酸片（辽宁格林生物药业集团，国药准字H2102104）每次0.8 mg，每日1次，口服；维生素B 6片（临汾宝珠制药有限公司，国药准字H14021472），每次10 mg，每日1次，口服；甲钴胺片（华北制药股份有限公司，国药准字：H20031126），每次0.5 mg，每日3次，口服，持续治疗3个月。

1.4 MTHFR C677T位点基因多态性检测

采集所有病人清晨静脉血4 mL，采用Solarbio D1800.50全血基因组DNA提取试剂盒提取DNA。采用ABI 7700聚合酶链式反应（PCR）仪进行扩增阻碍突变系统PCR，扩增条件为94 ℃预变性10 min，之后以94 ℃ 45 s、62 ℃ 40 s、72 ℃ 45 s循环39次。扩增完成后加入Hinf Ⅰ内切酶，37 ℃水浴2 h，进行琼脂糖凝胶电泳，加入溴乙啶急性染色，根据DNA条带长度判断基因型。

1.5 血清指标检测

所有病人均于治疗前及治疗后3个月采集空腹静脉血4 mL，采用酶联免疫吸附法检测血清Hcy水平，检测试剂盒购于北京九强生物技术有限公司，检测仪器为DG 022A型酶联免疫检测仪。采用Beckman AU5800自动生化分析仪检测空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglycerides，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL.C）及高密度脂蛋白胆固醇（high density  lipoprotein cholesterol，HDL.C） 水平。

1.6 MCA狭窄评判标准

所有病人均于入院后行经颅多普勒超声检查，大脑MCA平均流速＞90 cm/s，且与对侧MCA相比平均流速升高30%以上为MCA狭窄  ［7］ 。

1.7 疗效评价标准

高血压疗效评价标准  ［8］ ：SBP下降≥20 mmHg或DBP下降≥10 mmHg，且SBP和DBP均恢复正常为显效；SBP下降≥30 mmHg，SBP下降10～＜20 mmHg且恢复正常，或DBP下降0～＜10 mmHg且恢复正常均为有效；未达到上述标准则为无效。脑卒中疗效评价标准  ［9］ ：治疗后美国国立卫生院卒中量表（NIHSS）减少＞50%，头晕、运动障碍和语言功能障碍等症状明显改善为显效；NIHSS分数减少15%～50%，症状有所好转为有效；未达上述标准为无效。总有效率＝［（显效例数＋有效例数）/总例数］×100%。

1.8 统计学处理

采用SPSS 22.0软件进行数据分析。符合正态分布的定量资料以均数±标准差（ x  ± s ）表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用 t 检验。定性资料以例数或百分比（%）表示，采用 χ  2检验。采用Logistic回归模型分析MTHFR C677T位点T等位基因与病人临床特征的关系（因变量赋值方式：CC基因 型＝1；CT基因型＋TT基因型＝2）。双尾检验，以  P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 MTHFR C677T位点等位基因分布情况

120例脑卒中合并H型高血压病人中，MTHFR  C677T位点CC、CT及TT基因型分别为27例（22.50%）、 56例（46.67%）和37例（30.83%），各基因型分布符合Hardy.Weinberg平衡（ P ＝0.805），具有群体代表性。不同MTHFR C677T基因型病人间年龄、性别、血糖、血脂、血压及治疗药物等临床资料比较，差异均无统计学意义（ P ＞0.05），TT基因型病人入院NIHSS评分和MCA狭窄病人占比均显著高于CC基因型和CT基因型病人（ P ＜0.05）。详见表1。

2.2 不同MTHFR C677T基因型病人治疗前后血清Hcy水平比较

治疗前后不同MTHFR C677T基因型病人血清Hcy水平比较，差异有统计学意义（ P ＜0.05）；治疗3个月后，不同MTHFR C677T基因型病人的血清Hcy水平均较治疗前减低，且TT基因型Hcy水平下降程度低于CC基因型和CT基因型，差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。详见表2。

2.3 不同MTHFR C677T基因型病人疗效比较

不同MTHFR C677T基因型病人脑卒中疗效比较，差异有统计学意义（ P ＜0.05），TT基因型病人脑卒中治疗总有效率为72.97%，显著低于CC基因型病人的92.59%（ P ＜0.05）。详见表3。

2.4 MTHFR C677T位点T等位基因与病人临床特征的关系

Logistic回归分析显示，携带MTHFR位点T等位基因与Hcy水平升高密切相关（ P ＜0.05）。详见表4。

3 讨 论

高血压是全球常见疾病，具有较高的发病率，并可导致心脑血管疾病、高血压肾病等一系列疾病，严重影响病人的生命健康。近年来，随着我国分子生物学领域的发展、基因测序等技术普及为高血压的个体化治疗提供了新的思路和依据  ［10］ 。MTHFR是催化机体叶酸代谢及Hcy代谢的关键酶之一，研究表明，MTHFR C677T位点基因突变是MTHFR酶最常见的不耐热基因突变位点，MTHFR C677T位点TT基因型及CT基因型的酶活性明显低于CC基因型  ［11］ 。本研究检测了120例病人MTHFR C677T位点基因型，结果显示CC、CT及TT基因型的例数分别占22.50%、46.67%和30.83%，与以往报道相近  ［12.13］ 。

本研究结果显示，不同MTHFR C677T基因型病人血清Hcy水平存在明显差异，MTHFR C677T位点TT基因型病人治疗前后血清Hcy水平均高于CC及CT基因型病人，且CC及CT基因型病人治疗3个月后Hcy水平均显著下调，而TT基因型病人治疗3个月后Hcy水平下降程度低于CC及CT基因型病人，表明TT基因型病人应用叶酸、维生素B 6和甲钴胺片联合治疗降低Hcy的效果差于CC及CT基因型病人。分析其原因在于，血清Hcy水平升高是叶酸摄入不足及叶酸代谢活性下调等多种因素综合作用的结果。MTHFR酶可催化5，10.亚甲基四氢叶酸转化为具有生物活性的5.甲基四氢叶酸，而5.甲基四氢叶酸可作为甲基供体向Hcy转移甲基生成甲硫氨酸，进而完成机体Hcy代谢过程  ［14.15］ 。MTHFR C677T位点TT突变型的酶活性低于CC及CT基因型，故TT基因型病人补充外源性叶酸的降低Hcy效果差于CC及CT基因型病人  ［16.17］ 。

本研究还比较了不同MTHFR C677T基因型病人的临床特征及叶酸联合维生素B 6、甲钴胺辅助降压、改善脑卒中症状的效果，结果显示，TT基因型病人入院NIHSS评分、MCA狭窄占比均显著高于CC基因型和CT基因型病人，脑卒中治疗总有效率显著低于CC基因型病人。究其原因是：TT基因型病人由于MTHFR酶活性下调，Hcy水平显著高于CC及CT基因型。既往研究表明，高水平Hcy与神经功能缺损程度密切相关，而NIHSS评分是评价神经功能的评分系统，故TT基因型病人入院NIHSS评分高于CC及CT基因型病人  ［18.19］ 。TT基因型病人应用外源叶酸的降低Hcy效果较差，治疗后Hcy水平仍显著高于CC及CT基因型病人，动脉斑块形成的风险更高，故治疗后TT基因型病人的脑卒中症状改善效果差于CC及CT基因型病人  ［20］ 。本研究Logistic回归分析结果显示，携带MTHFR C677T位点T等位基因与Hcy水平的密切相关，而入院NIHSS评分与MCA狭窄均被筛除。结果表明，携带MTHFR C677T位点T等位基因是高Hcy水平的独立危险因素，携带MTHFR C677T位点T等位基因的脑卒中病人Hcy水平高于未携带病人，由于Hcy是心血管不良事件的高危因素，故其神经功能缺损、MCA狭窄风险高于未携带病人。

综上所述，在临床治疗中，对于携带MTHFR C677T位点T等位基因的病人应密切关注其血清Hcy水平，预防MCA狭窄的发生。

MTHFR C677T基因多态性与脑卒中合并H型高血压病人的Hcy水平密切相关，携带T等位基因是高Hcy水平的危险因素，而高Hcy水平可对脑卒中治疗效果造成影响，并增加MCA狭窄的风险。

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（收稿日期：2022.07.13）

（本文编辑 邹丽）