不同能量与油脂水平对海兰褐蛋鸡产蛋性能及血清生化指标的影响

陶 冶， 崔一博， 甄 艳， 张 鑫， 万 达，周 帅， 栗文钰， 郭耀棋 ， 郑 鑫

（1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118；2.禾丰食品股份有限公司，辽宁 沈阳 110866）

鸡蛋在蛋鸡体内的形成要经过小白卵泡、大白卵泡、小黄卵泡、大黄卵泡以及等级卵泡等发育阶段。 卵泡中的脂质主要来自于肝脏中合成的微粒体极低密度脂蛋白，然后，微粒体极低密度脂蛋白作为一种卵黄前体物质转运至卵母细胞中（Griffin 等，1985）。 微粒体极低密度脂蛋白的合成需要配体载脂蛋白B、甘油三酯、胆固醇酯和磷脂的参与，这一过程的主要原料就是甘油三酯（Vézina 等，2003）。 而饲料中添加的油脂可以供肝脏利用直接转化成甘油三酯， 满足蛋鸡产蛋过程中对甘油三酯的需要， 同时其能为机体提供必需脂肪酸，保证蛋鸡的生长发育、产蛋需求等（Alves-Bezerra 等，2017；王道坤，2016）。 因此，提高食物中的油脂含量或许可以提高产蛋率和蛋重。

刘立文等（2014）研究表明，在鸡的饲料配方标准上， 分别提高和降低5%的饲料能量饲喂雌性育成柴鸡（能量控制是通过调整粗脂肪含量以及钙含量来实现的），提取卵巢组织中的RNA 并进行促卵泡激素受体（FSHR）和促黄体生成素受体（LHR）的相对表达量测定， 得到高能量组的FSHR 和LHR表达量均显著增高，这表明饲料中的粗脂肪含量以及能量对卵泡接收促卵泡激素（FSH）和促黄体生成素（LH）的能力有显著影响。 而卵泡接收FSH 和LH 的能力提升就意味着有更多的卵泡被选择并提高产蛋率（李琴，2018；刘立文等，2014）。不仅如此，高能量的饲料会促进蛋鸡在进食后血液胰岛素含量的增加，而胰高血糖素与胰岛素比值升高会促进肝脏卵泡抑素的分泌，卵泡抑素会结合垂体中的激活素从而抑制FSH 的分泌， 所以高能量的饮食有可能会促进FSH 的分泌， 从而导致蛋鸡产蛋率的升高 （Hansen 等，2016；Meriggiola 等，1994；Nakamura 等，1990；Lorenzen 等，1978）。 然而，饲料能量水平和油脂添加量对产蛋中后期海兰褐蛋鸡产蛋性能的影响效果还不确定，过多的油脂和能量对蛋鸡生产性能的提高终归有限，还有可能对蛋鸡的健康造成影响。所以，本试验通过产蛋率、蛋品质和血清生化指标来评价饲料能量水平与油脂含量的改变对蛋鸡产蛋性能和长期生产经济效益的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组 试验地点在吉林省长春市共好合作社养殖场。选取体重接近（初始体重保证体重在平均值±10%以内），健康状态良好的30周龄海兰褐蛋鸡1080 只，随机分成4 组，每组6 个重复，每个重复45 只。 限饲饲喂每天130 g/只饲料。A 组（对照组）：基础饲料（代谢能11.10 MJ/kg，油脂1%）；B 组：代谢能11.10 MJ/kg，油脂水平提高至2.5%；C 组： 饲料水平提高代谢能至11.30 MJ/kg，油脂1%；D 组： 饲料水平提高代谢能至11.30 MJ/kg，油脂水平提高至2.5%；参考海兰褐饲养手册进行饲喂， 饲料参照海兰褐蛋鸡产蛋期营养需要配制成颗粒饲料，试验饲料组成及营养水平见表1。

表1 基础饲料组成及营养水平（风干基础）

1.2 主要试剂及仪器 主要试剂：FSH、VTG、LH、LZM、鸡β-防御素酶联免疫分析试剂盒（南京建成生物工程研究所）；T-CHO、TG、LDL-C 生化试剂盒（南京建成生物工程研究所）；BCA 蛋白定量试剂盒（增强型）（上海碧云天生物技术有限公司）。

主要仪器：分析天平（FA-C 型，上海添时科学仪器有限公司）、游标卡尺（上海添时科学仪器有限公司）、酶标仪（Multiskan FC 型，美国Thermo Fisher 科技公司）。 高速冷冻离心机（德国Sigma-Aldrich 公司）、蛋壳强度计（FESTV2.0，日本富士平工业株式会）、多功能蛋品分析仪（EMT-7300，日本Robotmation 公司）。

1.3 饲养管理 鸡群采用三层阶梯式笼养，每笼3 只鸡，每天上午9：00 ～10：30 收集鸡蛋，自由饮水，试验前8 d 为预饲期。日常管理按照鸡场常规操作进行， 试验期间由实验员负责试验鸡只的饲养管理。

1.4 样品采集 饲养至53 周龄时， 每个重复随机取15 枚鸡蛋，进行蛋品质检测。 每个重复随机取3 枚鸡蛋进行脂质代谢和免疫性能指标检测；每个重复中选取两只体重处于平均体重±10%以内的蛋鸡，每组12 只蛋鸡进行屠宰。 屠宰前进行翅下采血，常温静置10 min 后3000 r/min 离心3 min 取血清，-80 ℃冻存。 蛋鸡卵巢在分离出2 mm以上的卵泡后， 将其余卵巢组织放入冻存管里-80 ℃冻存。

1.5 检测指标及方法

1.5.1 产蛋性能 记录50 ～53 周龄的产蛋个数、鸡只数，以重复为单位称量鸡蛋重量，统计料蛋比。

1.5.2 蛋品质指标 采用分析天平称量每个鸡蛋的蛋重，用游标卡尺测量蛋的最大纵径（cm）和最大横径（cm），并计算蛋表面积和蛋形指数，蛋表面积=3.279×最大横径×[（最大横径+最大纵径）/2]，蛋形指数=最大纵径/最大横径。 蛋壳强度计检测蛋壳强度， 蛋品分析仪检测哈夫单位、 蛋白高度、蛋黄颜色后分离蛋黄并称重，待蛋壳自然风干后剥除蛋壳膜称重，蛋壳比例=蛋壳重/蛋重×100。

1.5.3 蛋脂质代谢功能指标 总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-C）、蛋白浓度采用试剂盒进行测定，测定方法依照说明书进行。简而言之，将血清加入96 孔板中的样品孔，为保证结果的准确性，每个样品测两次，并且所有样品均在同一96 孔板上完成。在两个空白孔中加入蒸馏水，在两个标准孔中加入校准样品，再加入工作液。 利用酶标仪在510 nm 的波长下进行吸光度检测， 按照说明书给定的公式计算样品中的各指标含量。

1.5.4 蛋非特异性免疫性能指标溶菌酶（LZM）、β-防御素（β-DF）采用试剂盒进行测定，测定方法依照说明书进行。简而言之，按照试剂盒的说明书在一个96 孔板上设定空白孔、标准样品孔和样品孔。为保证结果的准确性，每个样品测两次，并且所有样品均在同一96 孔板上完成。 其余试剂均按照说明书规定的剂量添加。 酶标仪检测450 nm 处吸光度并按照说明书的介绍计算血清样本中各指标的含量。每个处理9 个样本，每个样本2 个重复。

1.5.5 蛋鸡卵泡发育性能指标 测定血清中卵黄蛋白原、 促卵泡生成素 （FSH）、 促黄体生成素（LH）、孕酮（Prog）的含量。 血清在37 ℃温箱中孵育10 min，再按照检测试剂盒说明书添加空白孔，校准空以及样品孔，再添加其他试剂进行测定。酶标仪调节波长至450 nm 测定吸光度， 计算血清内的孕酮含量。每个处理9 个样本，每个样本2 个重复。所有样本包含在同一个分析酶标板，以避免分析之间的差异。

1.6 统计与分析 试验数据采用Excel 2020 进行初步处理后，用SPSS 23.0 软件进行单因素方差分析（one-way ANOVA），各组间差异用Duncan‘s法进行多重比较分析，P＜0.01 被认为差异极显著，P＜0.05 被认为差异显著，结果以“平均值±标准误差”（SEM） 表示。

2 结果与分析

2.1 饲料能量与油脂水平对产蛋性能的影响由表2 可知，C 组的产蛋率、产蛋量分别显著高于A 组2.08%和2.59%（P＜0.05）；D 组的产蛋率、产蛋量分别显著高于B 组2.50%和2.71%（P＜0.05）。 A 组和B 组之间以及C 组和D 组之间差异不显著（P＞0.05）。 各组的平均蛋重与料蛋比差异不显著（P＞0.05）。

表2 饲料能量与油脂水平对产蛋性能的影响

2.2 饲料能量与油脂水平对蛋品质的影响 由表3 可知，各组之间蛋黄比值、蛋表面积和蛋形指数差异不显著（P＞0.05）。D 组蛋黄颜色分别显著低于B 组和C 组10.32%和14.86%（P＜0.05），B组显著低于A 组9.94%（P＜0.05）。C 组的蛋白高度、 哈夫单位分别显著低于A 组8.11%和4.84%（P＜0.05），D 组的蛋白高度、 哈夫单位分别显著低于B 组13.73%和7.26%（P＜0.05）。

表3 饲料能量与油脂水平对蛋品质的影响

2.3 饲料能量与油脂水平对蛋脂质代谢功能的影响 由表4 可知，B 组的TC 含量显著低于A组25.00%，而B 组的TG 显著高于A 组81.40%（P＜0.05），D 组的TC 含量显著高于B 组50.00%（P＜0.05）。D 组的LDL-C 含量显著高于B 组133.33%（P＜0.05）。 各组之间蛋白浓度差异不显著。

表4 饲料能量与油脂水平对蛋脂质代谢功能的影响

2.4 饲料能量与油脂水平对蛋非特异性免疫性能的影响 由表5 可知，C 组LZM 含量显著低于A 组27.25%（P＜0.05）；D 组LZM 含量显著低于B 组33.72%（P＜0.05）。 A 组和B 组之间以及C组和D 组之间β-DF 含量差异不显著 （P＞0.05），A 组和C 组之间以及B 组和D 组之间β-DF 含量差异不显著（P＞0.05）。

2.5 饲料能量与油脂水平对卵泡发育的影响由表6 可知，C 组的蛋鸡血清中LH 的含量显著高于A 组114.38%（P＜0.05）。 B 组VTG 含量显著低于A 组30.18%（P＜0.05）。 C 组Prog 含量极显著高于A 组69.42%（P＜0.01）。

表6 饲料能量与油脂水平对卵泡发育的影响

3 讨论

3.1 不同能量水平与油脂水平对生产性能的影响 产蛋率以及产蛋量直接关系到养殖企业的经济效益。本试验发现，随着饲料能量水平和油脂含量的提升，蛋鸡的产蛋量、产蛋率以及平均蛋重呈上升趋势。 在同等油脂水平下， 饲料能量水平从11.10 MJ/kg 提升至11.30 MJ/kg，可以显著提升产蛋中后期蛋鸡的产蛋率；在同等能量水平下，油脂水平从1%提升至2.5%对蛋鸡产蛋率和平均蛋重的影响却并不显著。 辛倩等（2021）论述中同样提到了这一研究结果。 但是无论是饲料能量水平以及油脂含量的改变必须在一定范围内进行， 有研究发现大量添加油脂会引起畜禽腹泻， 如果大量的添加棉籽油会显著降低蛋鸡的生产性能并影响其健康（Gao 等，2022）。当然，也有研究表明，饲料能量的增加有可能导致产蛋率降低， 这可能与饲料中的蛋白质含量改变有一定关系 （李达武，1982）。

3.2 不同能量与油脂对蛋品质的影响 蛋黄重、蛋黄比例、 哈夫单位以及蛋白高度通常被用来评价蛋的新鲜程度（常枨等，2022）。 试验结果表明，饲料中能量与油脂水平的改变对蛋黄重与蛋黄比例的影响不显著。 哈夫单位和蛋白高度是反映禽蛋蛋白品质和新鲜度的重要指标（王云浩，2022）。哈夫单位值越高，蛋越新鲜，蛋白的黏稠度越好。蛋白高度与日粮营养水平、 环境因素和储存时间等多种因素密切相关， 该值越大表示鸡蛋新鲜度越好。 本试验中，在油脂含量不变的前提下，增加饲料能量可能会导致蛋鸡蛋白高度和哈夫单位值下降， 这意味着较高的饲料能量可能会导致其鸡蛋的蛋品质降低。 蛋黄的颜色主要由类胡萝卜素提供，蛋鸡鸡体自身不能合成类胡萝卜素，所以必须从日粮中摄取（徐长军等，2020）。蛋黄中类胡萝卜素含量增加可能会提高人体免疫相关功能以及抗氧化功能（惠俊楠等，2020）。 本试验中，饲料能量和油脂增加后，蛋黄颜色显著降低，这表明蛋黄中的类胡萝卜素含量降低，蛋品质受到影响。总体来说，饲料中的能量和油脂增加后，可能会影响产蛋中后期海兰褐蛋鸡的蛋品质。

3.3 不同能量与油脂对蛋脂质的影响 研究表明，相比于反刍动物，鸡更加依赖必需脂肪酸的摄取（郭雁华等，2019）。 然而，食用过多饱和脂肪酸和总胆固醇含量过多可能会引发炎症反应和胰岛素抵抗（马巍等，2021）。而甘油三酯由脂肪酸和甘油组成。所以，鸡蛋中过多的甘油三酯和总胆固醇对食用者的健康可能有不良影响。 本试验结果表明，在饲料能量11.10 MJ/kg 的水平下，饲料中油脂含量从1%增加到2.5%会导致蛋黄中TC 含量显著降低而TG 含量显著增加， 但在饲料能量11.30 MJ/kg 的水平下，增加油脂含量造成的影响却并不显著却反而增加了血清中LDL-C 的含量。由此分析得出， 油脂对蛋黄中各种脂质含量的作用效果受到饲粮能量的影响。Wallace 等（1985）研究表明， 饲料中油脂和能量的增加可能会影响蛋鸡的脂质代谢。同期研究表明，随着饲料中油脂的增加， 本次试验蛋鸡体内的血清甘油三酯与总胆固醇逐步升高。 说明蛋黄中的总胆固醇和甘油三酯是随着蛋鸡体内的升高而升高。有研究表明，低密度脂蛋白是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒， 所以低密度脂蛋白含量与鸡蛋中总胆固醇和甘油三酯含量密切相关 （贺琼玉等，2019）。本试验中，在油脂含量保持不变的前提下，提高饲料中能量水平可以显著提高蛋黄中TC 和TG 的含量，在饲料中油脂含量为2.5%时，提高饲料中的能量水平还会显著增加蛋黄中LDL-C 的含量。试验发现，蛋鸡体内与蛋黄中的低密度脂蛋白都随着油脂和能量的增加而升高， 这也印证了低密度脂蛋白升高会影响甘油三酯的代谢情况。

3.4 不同能量与油脂对蛋鸡卵泡发育的影响LH 与FSH 是由垂体分泌的促性腺激素， 受到促性腺激素释放激素的调节。 FSH 会促进卵巢卵泡的发育、生长和成熟。 另外，FSH 是卵泡选择的必要激素，FSH 的含量是影响卵泡闭锁率的主要因素之一（贺琼玉等，2019）。 LH 对卵巢的血液循环具有促进作用，还能够促使被FSH 预处理过的卵泡成熟并且诱发排卵（Hsueh 等，2000）。本试验结果表明，在饲料油脂含量1%的前提下，饲料中能量水平的增加会显著增加血清LH 的含量。 FSH和LH 作用于卵巢， 卵泡中的颗粒细胞和膜细胞在促性腺激素的控制下合作， 通过刺激类固醇生成酶信使RNA 的合成来产生雌激素（Shoham 等，1996）。 分泌到血清中的雌激素作用于肝脏，引起肝脏合成卵黄前体物质， 即VTG （Vézina 等，2003）。 血清中VTG 含量的变化会影响到各等级卵泡的重量，最终会影响蛋重（Robker 等，2018）。所以， 油脂含量的增加可能不利于卵黄蛋白原的合成释放。孕酮作为一种孕激素，其主要作用是促进卵泡的成熟和排卵（张宇瞳，2020）。 本试验中，饲料能量的增加可以极显著地促进蛋鸡血清中的孕酮含量增加而饲料油脂对蛋鸡血清孕酮含量没有太大影响。与前面产蛋率的结果来看，饲料中增加的能量可能是促进了血清孕酮含量增加， 进而促进了蛋鸡产蛋率上升。

3.5 不同能量与油脂对蛋免疫性能的影响 蛋清中含有极高的蛋溶菌酶， 其是一种具有抗菌消炎作用的蛋白酶，约占蛋清的3.4%。 在蛋中可以破坏细菌细胞壁来使细胞溶解， 从而达到抗菌效果（汪吴晶等，2020；沙其拉等，2018）。 因此，鸡蛋中的溶菌酶含量增加可能在一定程度上提高鸡蛋的保存时间。本试验结果表明，随着饲料能量的增加，蛋清中的溶菌酶含量显著降低，随着饲料油脂含量的增加，蛋清中的溶菌酶含量有降低趋势。蛋鸡的血清溶菌酶也出现同样的情况， 试验各组均明显低于对照组，整体呈下降趋势。可能的原因是饲料中用来调整代谢能的玉米或豆粕影响了血清中的溶菌酶含量。禽β-防御素仅存在于禽类动物中，是非特异性免疫的重要组成部分，在蛋鸡的生殖系统和鸡蛋的蛋黄中有大量表达 （李岩等，2014）。 蛋鸡由于油脂和能量的增加表明，在高脂高能量环境下， 溶菌酶的下降导致了机体和蛋重非特异性免疫力的降低。

4 结论

本试验研究发现，能量水平由11.10 MJ/kg 提高到11.30 MJ/kg、油脂水平由1%提高到2.5%以后的饲料能够提高蛋的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白含量，增加产蛋的数量，提高蛋鸡的产蛋性能，促进卵泡发育，调控蛋的内在指标，同时促使产蛋量变化。 但蛋品质方面的溶菌酶、哈夫单位、蛋白浓度、蛋白高度下降，影响蛋品质， 使鸡蛋内在抗菌保鲜能力和蛋的新鲜程度降低。