非小细胞肺癌EGFR、ROS1基因突变表达及其对术后顺铂化疗耐药的影响

谭晶,高波,李琦

(驻马店市中心医院 a.病理科;b.肿瘤内二科,河南 驻马店 463000)

肺癌是临床常见的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌占80%～85%,具有较高的发病率与病死率[1]。手术、放化疗、靶向等是治疗非小细胞肺癌的常用方案,其中手术联合术后顺铂化疗较为常见,可获得较好的效果。但临床实践中发现,部分患者顺铂化疗会产生耐药性,对疗效造成影响。冯征等[2]指出,EGFR、ROS1基因是非小细胞肺癌发生过程中重要的驱动基因。因此,EGFR、ROS1基因检测在非小细胞肺癌的诊断、治疗及预后判断中十分关键。由此推测,EGFR、ROS1基因与非小细胞肺癌患者术后顺铂化疗耐药情况有关系,基于此,本研究旨在探究EGFR、ROS1基因突变在非小细胞肺癌患者中的表达,并分析其对患者术后顺铂化疗耐药的影响。

1 对象与方法

1.1 研究对象

采用前瞻性研究,纳入2019年1月至2022年12月驻马店市中心医院收治的70例非小细胞肺癌患者作为研究对象。其中男45例,女25例;年龄55～80岁,平均(69.01±4.54)岁;病理类型为腺癌40例,鳞癌30例;临床分期为ⅡA期25例,ⅡB期45例;合并基础性疾病为高血压39例,糖尿病36例。

1.2 入选标准

(1)纳入标准:①符合《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》[3]中肺癌的诊断标准,且组织学类型为非小细胞肺癌;②经过临床影像学、肺癌标志物、病理学检查等确诊;③初发非小细胞肺癌;④参照第2版《实用肿瘤内科治疗》[4]中临床分期标准,选择分期为Ⅱ期;⑤符合肺癌根治性手术的手术指征,且术后需要接受辅助化疗;⑥预计生存期≥6个月;⑦有可测量的病灶;⑧患者配合研究且签署同意书。(2)排除标准:①存在化疗禁忌;②合并感染性疾病;③合其他恶性肿瘤;④术前接受过放化疗、免疫或靶向等治疗;⑤合并其他严重内科疾病;⑥心肺功能储备差;⑦自身存在免疫系统性疾病;⑧伴随精神障碍或意识不清晰。

1.3 研究方法

1.3.1手术及化疗方案

所有非小细胞肺癌患者入院后完善相关检查,排除手术禁忌后行肺癌根治性手术,切除标本送病理学检查。于术后4周接受辅助化疗,采用顺铂和长春瑞滨方案,具体如下:顺铂(德州德药制药有限公司,国药准字H37020524)75 mg·m-2,静脉滴注,第1天(正规水化、利尿),或者分3 d;长春瑞滨(国药一心制药有限公司,国药准字H20050544),25 mg·m-2,第1天和第8天静脉滴注。3周为1个周期,共需4个周期。

1.3.2化疗耐药性的评估标准

所有患者在接受化疗2个周期后评估顺铂化疗耐药情况,参照《中华医学会肺癌临床诊疗指南(2018版)》中有关内容。(1)肿瘤标志物:肿瘤标志物持续性升高,没有下降的趋势;(2)病灶增长:肿瘤缩小或肿瘤没有缩小趋势,但是增长速度得到抑制甚至持续没有变化;(3)局部或全身出现转移:治疗过程中,癌细胞向其他组织或者器官转移、浸润,或者导致全身多处出现病灶,病情较治疗前有进一步恶化。若患者符合以上任意一项则纳入耐药组,反之则纳入不耐药组。

1.3.3一般资料收集

设计一般资料收集表,填写并记录患者的临床资料,内容包括性别(男、女)、年龄、病理类型(腺癌、鳞癌)、临床分期(ⅡA期、ⅡB期)、既往吸烟史(有、无)、既往饮酒史(有、无)、患病原因(个体因素、环境因素)、营养状态(正常、不良)、高血压(有、无,诊断标准参照《中国高血压防治指南(2018年修订版)》[5])、糖尿病(有、无,诊断标准参照《中国2型糖尿病防治指南(2017年版)》[6])。

1.3.4患者EGFR、ROS1基因突变检测

收集所有患者手术切除病灶组织标本,经过10%中性福尔马林固定、石蜡包埋后立即检测;切片厚度5～10 μm,选用核酸提取试剂(艾德生物医药科技股份有限公司,闵厦械备20150082,型号FFPE DNA/RNA),按试剂盒说明书进行脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)与核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)提取,使用微量紫外分光光度计(青岛聚创世纪环保有限公司,型号JC-DR850)测定DNA与RNA浓度。完毕后将提取的核酸稀释到适当浓度加入到反应体系混匀,选用5种突变基因检测试剂盒(艾德生物医药科技股份有限公司,国械注准20183401043),采用荧光PCR法,选用实时荧光定量PCR仪(宏石,型号SLAN96S),具体操作按照试剂盒说明书进行扩增,检测患者的EGFR、ROS1基因突变情况;并参照说明书分别对EGFR、ROS1基因突变结果进行判读。

1.3.5营养状态评估标准

采用主观整体营养状况量表(patient-generated subjective global assessment,PG-SGA)[7]评估患者的营养状况,该量表评估内容包括体重、代谢应激、体格等方面,评分内容按照0～3分计分,各项评分基于患者核查的最高分。综合计算患者的评分,评分≤3分视作营养状况正常,评分>3分视作营养不良。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 非小细胞肺癌患者术后顺铂化疗耐药性情况

化疗2个周期后,70例非小细胞肺癌患者中顺铂化疗耐药38例,占比54.29%;化疗不耐药32例,不耐药组占比45.71%。

2.2 非小细胞肺癌患者EGFR、ROS1基因突变表达情况

70例非小细胞肺癌患者中,EGFR基因突变有29例,占比41.43%;ROS1基因突变有2例,占比2.86%。

2.3 耐药组与不耐药组的一般比较

耐药组与不耐药组年龄、营养状态比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 耐药组与不耐药组的一般资料比较

2.4 耐药组与不耐药组EGFR、ROS1基因突变表达情况比较

耐药组EGFR基因突变占比高于不耐药组,差异有统计学意义(P<0.05);耐药组ROS1基因突变占比与不耐药组比较,但差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 耐药组与不耐药组EGFR、ROS1基因突变表达 情况比较[n(%)]

2.5 EGFR、ROS1基因突变表达情况与顺铂化疗耐药情况的相关性

经χ2检验Phi系数分析显示,EGFR基因突变与非小细胞肺癌患者术后化疗耐药情况呈正相关(r>0,P<0.05);ROS1基因突变与非小细胞肺癌患者术后化疗耐药情况无相关性(P>0.05)。见表3。

表3 EGFR、ROS1基因突变表达情况与术后顺铂化疗 耐药情况的相关性分析

3 讨论

顺铂药物为化疗的常用铂类药物,但因为肿瘤细胞对铂类药物治疗初期是敏感的,但随着治疗时间的延长,由于自身、肿瘤等因素会导致患者对铂类药物产生耐药性,从而降低治疗效果,影响预后。因此,如何有效克服肿瘤细胞的耐药性以提高临床治疗效果是肿瘤化疗过程中亟待解决的难题。

本研究经过一般资料比较发现,耐药组患者的年龄更大,营养状态不良占比更高。简单分析原因,随着年龄的增长,一方面患者体内的部分酶活性降低导致经过肝脏代谢药物的代谢减少而增加毒性;另一方面患者细胞分解药物和缓冲药物毒性的能力也有所下降致使老年患者较年轻患者耐药性增加。营养不良会造成患者免疫功能降低,机体内的蛋白质减少,导致药物吸收出现问题,使得药物不能发挥作用从而增加耐药。但是非小细胞肺癌确诊时患者多数已进展至中晚期,营养状态又易受到主观因素的影响,故通过年龄与营养状态来判断患者术后化疗耐药情况缺乏准确性,临床还需要寻找其他敏感指标进一步明确顺铂化疗耐药的发生,以此来判定患者的预后。

随着肿瘤驱动基因的深入研究,肿瘤靶向治疗与免疫治疗逐渐应用于临床。伍锦凤等[8]研究指出,EGFR、ROS1基因为肺癌的驱动基因,已经成为靶向治疗的重要靶点。这说明通过检测患者的EGFR、ROS1基因突变情况,可以作为治疗的重点以提高患者预后。但EGFR、ROS1基因突变是否与顺铂化疗耐受有关尚未明确。本研究结果中,耐药组中EGFR基因突变占比更高,且与非小细胞肺癌患者术后化疗耐药情况呈正相关,表明EGFR基因突变的患者术后顺铂化疗耐药的可能性更高。分析其原因,顺铂作为金属铂类络合物,在细胞内低氯化环境中能够迅速解离,以水合阳离子的形式与肿瘤细胞内的DNA结合形成链间、链内或者蛋白质DNA交联以破坏DNA的结构和功能,从而造成肿瘤细胞的死亡。而EGFR是一种跨膜受体酪氨酸激酶,与肿瘤的生长、转移等密切相关,并且还参与肿瘤细胞增殖、凋亡和侵袭等多种信号通路的调节[9-10]。EGFR基因突变患者的肿瘤具有更强的转移力和侵袭力,能够增强肿瘤细胞内DNA的修复,抑制肿瘤细胞凋亡;在同等顺铂剂量下,与未基因突变的患者比较,基因突变患者体内的肿瘤细胞增殖、分化速度更快,导致肿瘤细胞对顺铂药物的摄入量会降低,增加耐药性。

ROS1基因可表达为酪氨酸激酶受体,发生突变时能够持续激活酪氨酸激酶,同时也会激活患者体内多条信号通路,从而诱导和促进肿瘤细胞的分化与增殖[11-12]。肿瘤细胞过度的分化和增殖使得药物在有限范围内浓度降低,药物作用发挥减低,造成耐药性增加。同时,ROS1基因突变会使得药物与ROS1蛋白不能结合,影响药效,也会增加耐药性降低疗效。但在本研究中发现,ROS1基因突变与非小细胞肺癌患者术后化疗耐药无相关性,考虑可能与研究样本量和突变例数有关,后续还要扩大样本量,以便进一步研究ROS1基因突变与非小细胞肺癌患者术后顺铂化疗耐药的关系。

4 结论

非小细胞肺癌患者中EGFR基因突变占比较高,且EGFR基因突变的患者术后顺铂化疗耐药的可能性更高。