霍乱监测中4 号琼脂、TCBS 琼脂及庆大霉素琼脂优劣势对比

2023-11-28 03:48刘芷含
医学信息 2023年22期
关键词:霍乱弧菌庆大霉素琼脂

刘芷含

(浮梁县疾病预防控制中心检验科,江西 浮梁 333400)

霍乱(cholera)为我国法定甲类传染病之一,由霍乱弧菌(Vibrio cholerae)感染所致,多伴有剧烈呕吐、腹泻等明显症状,可引发脱水、休克等不良后果,具有发病急、传播快、致死率高等特点,对国内外公共卫生安全均构成了较大威胁[1,2]。现如今,病原学诊断一直为我国疫情确诊报告金标准,其实验室检测结果可直接影响防疫管控工作的制定与开展,其中玻片凝集法(slide agglutination test)与胶体金法(colloidal gold method)均为霍乱弧菌常用检测方式,其培养基的选择在病株分离鉴定中具有重要意义[3,4]。目前,4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂均为致病性弧菌的选择性培养基,其平板制作及配方组成均存在一定差异,临床选择存在较大争议[5,6]。在此,本研究结合2022 年1 月-2023 年3 月浮梁县疾病预防控制中心检验科分离保存的霍乱弧菌株,观察4 号琼脂、TCBS 琼脂及庆大霉素琼脂在霍乱监测中的应用效果,以期为霍乱弧菌培养基的选择提供有效参考,现报道如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源 选取2022 年1 月-2023 年3 月浮梁县疾病预防控制中心检验科分离保存的霍乱弧菌株,该菌株种类为O139 群霍乱弧菌,保存环境为-80 ℃,培养前经霍乱防治手册鉴定。

1.2 方法

1.2.1 培养基制作 4 号琼脂培养基:取4 号琼脂(生产编号:025030,广东环凯微生物科技有限公司,规格:250 g)53.5 g,置于1000 ml 蒸馏水中加热煮沸,充分溶解后,冷却至50 ℃左右,灭菌后倒平板,凝固后备用。TCBS 琼脂培养基:取TCBS 琼脂(生产编号:022041,上海研尊生物科技有限公司,规格:250 g)88 g,置于1000 ml 蒸馏水中加热煮沸,充分溶解后,冷却至50 ℃左右,灭菌后倒平板,凝固后备用。庆大霉素琼脂培养基:取庆大霉素琼脂(生产批号:2108271,北京陆桥技术股份有限公司,规格:250 g)56 g,置于1000 ml 蒸馏水中加热煮沸,充分溶解后,冷却至50 ℃左右,灭菌后倒平板,凝固后备用。

1.2.2 病菌培养 将初始霍乱弧菌接种碱性蛋白胨水(生产批号:20210610,青岛高科技工业园海博生物技术有限公司,规格:250 g)进行增菌培养,37 ℃增菌6~8 h 后,于其菌膜下表层取接种环培养物,分别接种于4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂3 种培养基中,每种培养基各设置10 个平板,采用生化培养箱(上海恒一科学仪器有限公司,型号LRH-150F),37 ℃培养18~24 h。

1.2.3 病菌检测 取培养物进行玻片凝集法与胶体金法检测。玻片凝集法:取培养基菌落与霍乱弧菌单克隆抗体(生产批号:20220301,郑州万泰生物科技有限公司,规格:4×1 支/盒)进行玻片凝集试验,若菌落10 s 内出现明显凝集颗粒,且在生理盐水中不凝集,则评定为阳性。胶体金法:采用霍乱弧菌检测试剂盒(生产批号:20220401,郑州万泰生物科技有限公司,规格:50 人份)进行检测,检测线与质控线均显示红色条杠,则评定为阳性。

1.3 观察指标 ①比较三种培养基成分;②比较霍乱弧菌在不同培养基中的菌落特征;③比较霍乱弧菌在不同培养基中的检测结果。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据处理,计量资料以(±s)表示,采用t检验;计数资料以[n(%)]表示,采用χ2检验。以P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三种培养基配方成分比较 4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂培养基配方成分存在一定差异,其中TCBS 琼脂培养基成分种类最多,但三者琼脂含量相同,其pH 值无差异(F=5.021,P=0.857),见表1。

表1 三种培养基配方成分比较(n,±s)

表1 三种培养基配方成分比较(n,±s)

2.2 霍乱弧菌在不同培养基中的菌落特征比较 霍乱弧菌在4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂中的菌落生长特征存在一定差异,见表2。

表2 霍乱弧菌在不同培养基中的生长特征

2.3 霍乱弧菌在不同培养基中的检测情况比较 霍乱弧菌检出率由高至低依次为4 号琼脂>庆大霉素琼脂>TCBS 琼脂(χ2=4.445,P=0.035),见表3。

表3 霍乱弧菌在不同培养基中的检测率比较[n(%)]

3 讨论

霍乱弧菌属于典型革兰氏阴性菌,呈弧形或逗点状,其血清群丰富,细菌运动活跃,存活时间较长,多发于免疫力低下人群,具有较高易感风险[7,8]。其中,O1 群与O139 群霍乱弧菌是引发霍乱的主要病原菌,二者可通过毒素共调菌毛(toxincoregulatedpilus,TCP)与霍乱毒素(choleratoxin,CT)的释放,引发急性肠胃道症状,对患者生命安全构成了极大威胁,其临床诊断尤为重要[9,10]。目前,玻片凝集法与胶体金法均为霍乱弧菌常用鉴定方式,其检测需从强选择性培养基中挑取可疑菌落,以完成病菌的快速测定,实现疫情的及时防控[11,12]。故,其培养基的选择将直接影响病菌鉴定的时效性与准确性,在疫情防控管理中具有重要意义。4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂均为分离霍乱弧菌的强选择性培养基,其菌落特征是识别病菌的重要依据,但其培养生长速度不同,菌落特征存在一定差异,对其病菌检出效果造成了一定影响[13,14]。

本研究结果显示,4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂培养基配方成分存在一定差异,其中TCBS 琼脂培养基成分种类最多,但三者琼脂含量相同,其pH 值无差异(P>0.05),表明4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂培养基的部分配方存在差异,但其琼脂量与pH 值较为一致,均为固体碱性培养基。这是由于霍乱弧菌属于兼性厌氧菌,其在固体培养基中生长良好,且碱性环境下增殖更快,以上培养基均可为霍乱弧菌的生长提供良好条件[15,16]。其中,4 号琼脂与庆大霉素琼脂培养基的配方成分较为相近,二者均以蛋白胨、牛肉膏粉作为碳氮源、维生素及生长因子的主要来源,通过氯化钠维持渗透压平衡,其配方中的亚硫酸钠可刺激弧菌生长,并以琼脂作为培养基的凝固剂[17,18]。但在抑菌配方中,4 号琼脂培养基包括庆大霉素、十二烷基硫酸钠、猪胆汁粉与雷佛奴尔等成分,庆大霉素琼脂培养基则以庆大霉素、柠檬酸钠为主,其抑菌成分相对单一[19]。TCBS 琼脂培养基配方中,其蛋白胨、酵母膏粉、蔗糖可作为碳氮源、维生素与生长因子的主要来源,通过氯化钠维持渗透压平衡,刺激弧菌生长,并利用柠檬酸钠、胆酸钠、牛胆粉及硫代硫酸钠等成分抑制革兰氏阳性菌及大肠菌群的生长,其中硫代硫酸钠与柠檬酸铁可作为硫化氢产生的重要指示剂,麝香草酚兰则属于培养基pH 指示剂[20]。在其培养生长过程中,霍乱弧菌在4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂中的菌落生长特征存在一定差异,提示不同培养基的菌落生长速度存在一定差异。其中,4 号琼脂与庆大霉素琼脂培养基的菌落特征较为相近,这与其相似的培养基配方存在直接关联,而TCBS 琼脂培养基的菌落生长速度明显较慢,且在18 h 后出现两大绿色菌落,易导致误检及漏检的发生。本次检测结果中,霍乱弧菌检出率由高至低依次为4 号琼脂>庆大霉素琼脂>TCBS 琼脂(P<0.05),可见4 号琼脂培养基的检测效果最佳,而TCBS 琼脂培养基的检测作用相对最弱。分析认为,4 号琼脂与庆大霉素培养基均含有亚硫酸钠与庆大霉素,前者可刺激弧菌生长,后者则可有效抑制革兰氏阳性菌与部分革兰氏阴性杂菌,其中4 号琼脂还包含十二烷基硫酸钠、猪胆汁粉与雷佛奴尔等成分,可进一步减少培养基杂菌对检测结果的影响,保证霍乱弧菌的检测准确性[21]。而TCBS 琼脂培养基的抗菌成分相对较少,仅通过枸橼酸钠、牛胆粉、牛胆酸钠抑制肠道菌及革兰氏阳性菌的生长,对霍乱弧菌的生长速度造成了一定影响,同时TCBS 琼脂的蔗糖成分相对较多,其蔗糖发酵菌的产生,可进一步干扰弧菌的鉴定,不利于病菌的准确检出[22]。

综上所述,4 号琼脂、TCBS 琼脂与庆大霉素琼脂培养基均可有效分离霍乱弧菌,实现病菌检测,其营养基成分不同、菌落生长表现各异,以4 号琼脂培养基的检出效果最佳。

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