甲状腺乳头状癌患者PD-1/PD-L1表达与临床病理特征及预后的关系

杨 勇,陈 慧,曹金雷,唐咏梅

(义乌市中心医院 病理科,浙江 金华 322000)

甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是甲状腺癌最常见的亚型,其发病率不断升高且趋于年轻化[1]。临床主要采用放射性碘治疗、手术治疗、促甲状腺激素抑制治疗等手段治疗PTC,但部分患者肿瘤恶性程度高,治疗后易转移及复发,降低生存率[2]。因此,早发现、早诊断并分析影响预后的危险因素是延长PTC患者生存期的重要策略。检测生物学标志物在癌组织中的表达情况可辅助诊断恶性肿瘤、靶向治疗的可能性,或预测预后。程序性细胞死亡受体-1(PD-1)/程序性细胞死亡配体-1(PD-L1)是调控T细胞活化的负性共刺激分子,两者结合能影响效应T细胞的活性,抑制T细胞增殖,促进肿瘤发生免疫逃逸[3]。既往研究显示,PD-1、PD-L1广泛表达于不同恶性肿瘤细胞,与恶性肿瘤的发生发展有关[4]。目前临床关于PD-1、PD-L1在胃癌组织及食管癌组织中表达的研究较多[5-6],但两者在PTC的表达情况尚不明确。基于此,本研究探讨PD-1/PD-L1表达与PTC患者临床病理特征及预后的关系,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集我院2019年1月—12月接受手术切除治疗的PTC患者191例。纳入标准:①符合《甲状腺癌诊疗规范(2018年版)》[7]中PTC诊断标准,经病理学检查确诊;②首次确诊;③符合切除术手术指征;④术前未接受放化疗;⑤无其他恶性肿瘤。排除标准:①良性甲状腺肿瘤者;②PTC复发者;③合并免疫系统疾病、感染性疾病者;④合并髓样癌、未分化性甲状腺癌等其他组织学类型;⑤临床资料、病理资料及随访资料不全者;⑥其他重要脏器严重损伤者。191例PTC患者中男性76例,女性115例;年龄23～80岁,平均(49.03±13.36)岁;TNM分期:Ⅰ期67例,Ⅱ期89例,Ⅲ期29例,Ⅳ期6例;肿瘤最大径:≥1 cm 89例,<1 cm 102例;淋巴结转移58例。TNM分期及淋巴结转移判定参考美国癌症联合委员会癌症分期手册[8]判定。

1.2 PD-1、PD-L1检测

1.2.1 检测方法 术中取癌组织及癌旁组织,经4%中性甲醇溶液固定、脱水、石蜡包埋后切片,采用免疫组化法检测PD-1、PD-L1表达情况。阴性对照选择PBS,阳性对照选择已知阳性切片。兔抗人PD-1、PD-L1均购自于GenomeMe公司,严格按照说明书操作。

1.2.2 结果判断 PD-1定位于细胞质,PD-L1定位于细胞膜或细胞质,显微镜下观察染色情况。400倍光学显微镜下切片随机选择5个视野,满足细胞定位明确、间质清晰、无背景着色,每个视野计数100个肿瘤细胞,结合阳性细胞数目所占比例及细胞染色强度进行评分。阳性细胞百分比=阳性细胞数目/视野总细胞数目×100%;阳性细胞百分比≤5%为0分,>5%～25%为1分,>25%～50%为2分,>50%～75%为3分,>75%为4分。将染色强度分为无着色、淡黄色、棕黄色、棕褐色4个等级,分别计0、1、2、3分。总染色评分为染色强度评分与阳性细胞百分比评分之积,总染色评分<3分视为阴性,总染色评分≥3分视为阳性。

1.3 随访 所有PTC患者术后均接受2年随访,记录患者复发情况及生存情况;术后1年内,1次/月;术后第2年,1次/季;随访方式包括微信、电话、定期门诊复查,随访期间患者死亡即终止。

1.4 观察指标 ①记录PTC患者癌组织及癌旁组织中PD-1、PD-L1的表达情况;②比较不同临床病理特征PTC患者的PD-1、PD-L1水平;③分析PD-1、PD-L1表达与PTC患者预后的关系,以及影响PTC患者预后的危险因素。

2 结果

2.1 癌组织及癌旁组织中PD-1、PD-L1表达情况 免疫组化结果显示,癌组织中PD-1、PD-L1阳性表达率分别为39.27%(75/191)、53.40%(102/191),高于癌旁组织的15.18%、22.51%,差异有统计学意义(χ2=27.958、38.695,均P<0.001)。

2.2 PD-1、PD-L1表达与临床病理特征的关系 比较不同临床病理特征PTC患者癌组织中的PD-1、PD-L1水平,结果显示:PD-1、PD-L1表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小无关(P>0.05)。见表1。

表1 不同临床病理特征PTC患者癌组织中的PD-1、PD-L1表达情况[n(%)]

2.3 随访结局 所有患者均随访2年,随访期间无死亡,31例患者复发。PD-1、PD-L1阳性表达组的复发率分别为26.67%(20/75)、23.53%(24/102),高于阴性表达组(9.48%、7.87%),差异有统计学意义(χ2=9.893、21.107,均P<0.05)。

2.4 影响PTC患者预后的因素分析 单因素分析显示,TNM分期、淋巴结转移、PD-1及PD-L1与PTC患者复发有关(P<0.05);以是否复发为因变量(未复发组=0,复发组=1),以单因素分析中有统计学意义的因素为自变量(TNM分期为Ⅰ/Ⅱ期=0,TNM分期为Ⅲ/Ⅳ期=1;无淋巴结转移=0,淋巴结转移=1;PD-1阴性表达=0,PD-1阳性表达=1;PD-L1阴性表达=0,PD-L1阳性表达=1),进行Logistic回归分析。结果显示,TNM分期高、淋巴结转移、PD-1及PD-L1阳性表达均为影响PTC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。见表2。

表2 影响PTC患者预后的多因素分析

3 讨论

甲状腺癌是代谢内分泌科最常见的恶性肿瘤,病理类型包括滤泡状癌、髓样癌、未分化癌及PTC,其中90%为PTC[9-10]。PTC惰性生长,多数患者预后较好,但仍有少数患者对手术、促甲状腺激素抑制治疗等传统手段不敏感,治疗后发生转移及复发,严重者还会发展为未分化型甲状腺癌,危及生命健康[11]。近年来随着免疫组化技术和分子生物学的发展,高特异性及灵敏度的分子标志物辅助诊断恶性肿瘤逐渐应用于临床,对临床诊断、治疗敏感性及预后判断具有重要价值。

PD-1是由多个氨基酸组成的Ⅰ型跨膜蛋白,具有抑制机体免疫功能,在恶性肿瘤的发生及发展中起着重要作用[12]。有报道显示,非小细胞肺癌患者癌组织中PD-1呈高表达,且能通过免疫抑制作用促进肿瘤淋巴结转移,引起不良预后[13];PD-L1在不同TNM分期及不同淋巴结转移的肝内胆管细胞癌中的表达存在显著差异[14]。PD-L1主要由响应免疫介导的γ干扰素等信号驱动,表达于肿瘤活跃T细胞炎症区域,既往研究显示其与多种恶性肿瘤的发生有关,且表达水平与肿瘤恶性程度密切相关[15-16]。有研究[17]显示,胃癌患者PD-L1表达异常,且表达情况与TNM分期、淋巴结转移有关。本研究结果显示,PTC患者癌组织中PD-1、PD-L1阳性表达率高于癌旁组织,这可能是因为:PD-1/PD-L1通路能调节机体免疫机制,PD-1可以结合其配体PD-L1,导致PD-1胞质区酪氨酸转化基序发生磷酸化,从而产生抑制信号,减弱TCR/CD28信号对免疫细胞的活化作用,促进活化T细胞凋亡,引起肿瘤免疫逃逸。

本研究进一步分析PD-1、PD-L1与PTC患者临床病理特征的关系,发现PD-1、PD-L1表达与TNM分期、淋巴结转移有关,说明PD-1、PD-L1在PTC的发生发展过程中起着促进作用,也提示临床可将PD-1、PD-L1作为评估PTC发生侵袭性生物学行为的标志物。另外,随访结果显示,PD-1、PD-L1阳性表达组患者2年复发率均高于阴性表达组,证明了PD-1、PD-L1表达对PTC患者预后的影响。Logistic回归分析结果显示,TNM分期高、淋巴结转移、PD-1及PD-L1阳性表达均为影响PTC患者预后的独立危险因素,进一步证实PD-1、PD-L1能够作为评估PTC患者预后的参考指标。

综上所述,PTC患者癌组织中PD-1、PD-L1呈高表达,不同临床病理特征患者的PD-1、PD-L1表达存在差异,两者有望成为PTC预后的评估指标。