血清长链非编码RNA癌易感性候选基因2表达水平对脓毒症并发急性肾损伤病儿预后的预测价值

李媛媛，刘娇，郭娜

中国人民解放军总医院第八医学中心儿科，北京100091

脓毒症是因病原微生物感染而引起的全身炎症性疾病，由于小儿的身体发育未成熟，其身体免疫能力较差，导致脓毒症的发病率较高［1］。急性肾损伤（AKI）是常见的脓毒症并发症，其死亡率为28%～90%，严重威胁病儿的生命健康，目前，临床上常用的血肌酐灵敏度较差，发生变化时肾部已经发生严重损伤，存在一定的局限性［2］。因此，寻找能够早期准确评估脓毒症并发AKI 病儿预后情况的生物因子尤为重要。长链非编码RNA（lncRNA）是一类长约为200 nt，但不具备编码蛋白质能力的RNA，可控制多个水平的基因表达［3］。癌易感性候选基因2（CASC2）是lncRNA 中的一种，最初在子宫内膜癌中发现，其参与细胞增殖、分化、凋亡过程，其在多种肿瘤中发挥抑癌作用［4］。近年来有研究表明，lncRNA CASC2 在脓毒症病人中下调，过表达的CASC2 可抑制炎症和氧化损伤［5］。但其对脓毒症并发AKI 病儿的生存情况是否具有预测作用尚未研究。因此，本研究通过探究血清lncRNA CASC2 表达对脓毒症并发AKI 病儿预后的预测价值，旨在为提高病儿的预后提供可靠参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料以2019 年2 月至2021 年2 月中国人民解放军总医院第八医学中心收治的83 例脓毒症并发AKI病儿为研究对象，其中男51例，女32例，年龄范围为1～12 岁，年龄（6.14±1.22）岁，体质量指数（BMI）（16.93±2.09）kg∕m2，纳入标准：①病儿均符合脓毒症诊断标准［6］。②AKI 诊断符合《KDIGO 急性肾损伤临床实践指南》［7］：48 h 内血肌酐水平升高超过基线水平26.5 μmol∕L；血肌酐水平升高到基线水平的150%；尿量连续6 h 以上＜0.5 mL·kg-1·h-1；符合上述三项中任意一项即可确诊为AKI。③病儿在本院接受治疗。排除标准：①患有先天免疫疾病；②伴有恶性肿瘤；③伴有心、肝重大器官疾病；④病历资料不完整者。将本组病儿根据28 d 生存情况分为生存组57 例，死亡组26 例。本研究经病儿近亲属签署知情同意书，本研究符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。

1.2 主要试剂与仪器Trizol 试剂（上海善然生物科技有限公司）；RNA 逆转录试剂盒（北京祥生兴业科技有限公司）；miScript SYBR®Green qPCR Kit 试剂盒（上海恒斐生物科技有限公司）；引物（广东文华氏生物科技有限公司）；PCR 仪（深圳市康初源有限公司），三磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）由上海臻科生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1资料收集 收集入院时病儿年龄、BMI、体温、心率、呼吸、尿量、动脉血二氧化碳分压（Pa-CO2）、氧合指数（OI）、平均动脉压（MAP）、急性生理和慢性健康系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分［8］、胱抑素C（CysC）、白细胞计数（WBC）、C 反应蛋白（CRP）、降钙素原、血肌酐等临床资料。

1.3.2血清lncRNA CASC2 水平检测 采集病儿入组次日清晨空腹静脉血5 mL，于3 000 r∕min 离心10 min，取上清液保存于-80 ℃待用。首先通过在样品中加入Trizol 试剂提取总RNA，并检验RNA 是否符合试验要求。根据RNA 逆转录试剂盒将RNA 反转录为互补DNA（cDNA），严格按照miScript SYBR®Green qPCR Kit 试剂盒说明书操作，其反应条件：95 ℃ 60 s、95 ℃ 10 s、56.5 ℃ 30 s，进行40 个循环，以GAPDH 为lncRNA CASC2 的内参，其相对表达量采用2-ΔΔCt计算，见表1。

表1 实时荧光定量PCR引物序列

1.4 统计学方法数据分析以统计学软件SPSS 22.0 进行。计量资料以描述，两组间比较行t检验；计数资料以例表示，两组间比较采用χ2检验。多因素logistic 回归分析影响脓毒症并发AKI 病儿预后的危险因素；受试者操作特征（ROC）曲线分析血清lncRNA CASC2、血肌酐对脓毒症并发AKI病儿死亡的预测价值曲线下面积（AUC）比较采用Z检验；Pearson 相关性分析血清lncRNA CASC2 与临床资料的关系。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组病儿一般临床资料两组病儿性别、年龄、BMI、体温、心率、呼吸、OI、MAP、WBC 之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；尿量、PaCO2、APACHE Ⅱ评分、CysC、CRP、降钙素原、血肌酐之间比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组脓毒症并发急性肾损伤病儿一般临床资料

2.2 两组病儿血清lncRNA CASC2 水平比较与生存组相比，死亡组病儿血清lncRNA CASC2 水平显著降低（1.02±0.18比0.69±0.09），差异有统计学意义（t=8.84，P＜0.001）。

2.3 多因素logistic 回归分析影响脓毒症并发AKI病儿预后的危险因素将连续变量中尿量、PaCO2、CysC、CRP、降钙素原、lncRNA CASC2、血肌酐等根据中位数分为高水平组和低水平组进行赋值：高水平尿量、PaCO2均赋值为0；低水平尿量、PaCO2均赋值 为1；高水平CysC、CRP、降钙素原、lncRNA CASC2、血肌酐均赋值为1；低水平CysC、CRP、降钙素原、lncRNA CASC2、血肌酐均赋值为0；然后进行多因素logistic 回归分析，结果显示lncRNA CASC2低表达、血肌酐高水平是影响脓毒症并发AKI 病儿预后的危险因素（P＜0.05）。见表3。

表3 多因素logistic回归分析影响脓毒症并发AKI病儿预后的危险因素

2.4 血清lncRNA CASC2、血肌酐对脓毒症并发AKI 病儿死亡的预测价值ROC 曲线分析显示，血清lncRNA CASC2、血肌酐联合预测脓毒症并发AKI病儿死亡的灵敏度为96.2%，特异度为78.9%，二者联合AUC 显著高于其单一指标检测（Z=2.25，P=0.024；Z=2.05，P=0.040）。见表4。

表4 血清lncRNA CASC2、血肌酐对脓毒症并发AKI病儿死亡的预测价值

2.5 血清lncRNA CASC2 与临床资料的关系Pearson 相关性分析显示，血清lncRNA CASC2 与病儿尿量、PaCO2 呈正相关（P＜0.05），与APACHE Ⅱ评分、CysC、CRP、降钙素原、血肌酐呈显著负相关（P＜0.05）。见表5。

表5 血清lncRNA CASC2与脓毒症并发AKI病儿一般临床资料的关系

3 讨论

AKI是重症监护室中脓毒症病儿常见的并发症之一，由于肾脏是脓毒症直接的靶器官，脓毒症并发AKI的发病率不断升高，若得不到及时的治疗，对病儿的肾小管可造成不可逆转的损伤，给病儿家庭也将带来沉重的经济负担［9］。临床中常见的监测指标存在一定的延误性，不能对肾损伤作出早期反应，因此，寻找灵敏度、特异度高的血清标志物，对脓毒症并发AKI病儿的预后评估是十分有必要的。

lncRNA 是一类长链非编码RNA，最初被认为是基因组的“噪声”，经过深入研究发现，lncRNA 覆盖了人类的大部分基因，可参与细胞周期、表观遗传、转录后水平调控等重要生物学过程［10］。CASC2是一个新发现的lncRNA，位于人染色体10q26，在肿瘤［11］、炎症［12］、氧化应激［13］中发挥关键作用。lncRNA CASC2 水平上调可抑制炎性因子的释放，Liu等［14］研究发现，与健康对照者相比，类风湿关节炎病人血浆中lncRNA CASC2 水平下调，而促炎因子白细胞介素17 水平上调。Wang 等［15］研究发现，lncRNA CASC2 在2 型糖尿病（T2DM）合并慢性肾功能衰竭病人血清和肾组织中显著下降，而在合并其他疾病的T2DM 病人血清和肾组织中无显著变化，低表达的lncRNA CASC2 对T2DM 病人慢性肾功能衰竭的发生具有预测价值。Wang等［16］研究表明，脓毒症血清中lncRNA CASC2 表达水平较对照组明显降低，其水平与炎性因子释放、氧化应激、细胞凋亡密切相关，lncRNA CASC2随着AKI的严重程度加深而不断降低。Hu 等［17］研究发现，lncRNA CASC2 在脓毒症病人和脂多糖建立脓毒症细胞模型中均显著降低，过表达的CASC2 可促进细胞活力并抑制细胞凋亡、氧化应激。这与本研究结果一致，在本研究中，脓毒症并发AKI 死亡组病儿血清lncRNA CASC2水平较生存组显著降低，且Pearson相关性分析结果显示，血清lncRNA CASC2 与病儿尿量、Pa-CO2 呈正相关，与APACHE Ⅱ评分、CysC、CRP、降钙素原、血肌酐呈显著负相关，提示lncRNA CASC2参与了该疾病的发展。

另外本研究结果还显示，两组病儿尿量、Pa-CO2、APACHE Ⅱ评分、CysC、CRP、降钙素原、血肌酐之间具有显著差异。多因素logistic 回归分析显示，lncRNA CASC2 低表达、血肌酐高水平是影响脓毒症并发AKI 病儿预后的危险因素，提示临床中应实时检测上述危险指标，制定个性化治疗计划，改善病儿治疗效果。ROC 曲线分析显示，血清lncRNA CASC2、血肌酐联合预测脓毒症并发AKI 病儿死亡的灵敏度为96.2%，特异度为78.9%，二者联合AUC 显著高于其单一指标检测，提示血清lncRNA CASC2 可作为血肌酐的辅助评估指标，有效提高脓毒症并发AKI病儿的预后预测效果［18-19］。

综上所述，脓毒症并发AKI 预后不良病儿血清lncRNA CASC2 水平较预后良好病儿显著下调，是影响脓毒症并发AKI 病儿预后的危险因素，lncRNA CASC2联合血肌酐对脓毒症并发AKI病儿的预后有一定的预测价值。但是由于本研究纳入样本量较少，关于lncRNA CASC2 在脓毒症并发AKI 中具体作用机制目前尚不明确，因此还需要进一步扩大样本量，从多个角度进行深入分析，为脓毒症并发AKI的诊治提供可靠的参考依据。