原发免疫性血小板减少症患者外周血淋巴细胞亚群、NKT 细胞及Th1/Th2 细胞因子的变化及意义

吴伯艳，吴东升，练成宇，陈建安

（东莞东华医院，广东东莞 523110）

原发免疫性血小板减少症（ITP）是一种获得性自身免疫性出血性疾病，特点是在未发现明确病因的情况下出现血小板（PLT）数量减少，PLT 计数低于100×109/L，临床表现以皮肤、黏膜出血为主，PLT 计数低于20×109/L 者可以发生内脏出血或者颅内出血，严重者甚至危及生命，出血风险随年龄增长而增加[1-3]。ITP发病机制与体液免疫和细胞免疫异常均有关[4]，PLT 计数在ITP 病情的发生、发展中起到重要作用，检测淋巴细胞亚群、NKT 细胞及细胞因子对ITP 的诊疗具有重大意义。本文旨在探讨PLT 计数不同的ITP 患者外周血淋巴细胞亚群、NKT 细胞及Th1/Th2 细胞因子水平的变化及意义，从而为ITP 的诊疗及预后提供依据。

1 资料和方法

1.1 病例与分组

选择2020 年3 月至2022 年1 月在我院就诊的63 例ITP 患者，均符合ITP 的诊断标准[5]，并排除其他假性PLT 减少、其他自身免疫性疾病、甲状腺疾病及肿瘤相关疾病，近期未使用过免疫抑制剂和糖皮质激素[6]。63 例中，男21 例，女42 例；年龄1～68 岁，平均（29.5±15.5）岁。根据初诊PLT 计数，将ITP 组分为实验1 组（PLT＜20×109/L，32 例），实验2 组（PLT≥20×109/L，31 例）。选择同期健康体检者34 例作为对照组，其中男12 例，女22 例；年龄4～54 岁，平均（29.4±11.3）岁。3 组的年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 美国贝克曼-库尔特公司的FC500 MCL 五色流式细胞分析仪检测淋巴细胞亚群、NKT 细胞及Th1/Th2 细胞因子的水平，淋巴细胞亚群相关单克隆抗体试剂以及磷酸盐缓冲溶液、红细胞裂解液等均购于美国贝克曼-库尔特公司，人Th1/Th2 细胞因子检测试剂盒购于杭州赛基生物科技有限公司。

1.2.2 标本收集、检测 所有入选研究者均于清晨空腹抽取静脉血2 mL，置于乙二胺四乙酸（EDTA）紫色抗凝试管中，用于检测淋巴细胞亚群及NKT 细胞水平；同时抽取静脉血2 mL 置于红色促凝试管中，3 500 r/min 离心5 min，分离血清，于-20 ℃冻存，以待Th1/Th2 细胞因子检测。采用流式细胞分析仪检测各入选研究者淋巴细胞亚群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+CD56+）、NKT细胞（CD3+CD16+CD56+）、Th1/Th2 细胞因子（IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ）的表达水平。所有操作均严格按照仪器和试剂说明书进行。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较

ITP 组CD3+、CD3+CD4+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+、NKT 水平明显低于对照组，CD3+CD8+、CD3-CD19+、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 水平明显高于对照组（P＜0.01）。见表1。

表1 ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较 （）

表1 ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较 （）

与对照组比较：aP＜0.01

2.2 初诊PLT 计数不同的ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较

实验1 组CD3+、CD3+CD4+水平明显低于实验2 组和对照组，CD3-CD19+水平明显高于实验2 组和对照组（P＜0.01），实验1 组CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+、CD4+/CD8+水平与实验2 组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），实验2 组CD3+水平与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；实验1 组NKT 水平明显低于实验2 组和对照组（P＜0.01）；实验1 组IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 水平与实验2组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），实验1 组IFN-γ水平与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），实验2 组IFN-γ 水平明显高于对照组（P＜0.01）。见表2。

表2 初诊PLT 计数不同的ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较 （）

表2 初诊PLT 计数不同的ITP 组和对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞、Th1/Th2 细胞因子水平的比较 （）

与对照组比较：aP＜0.01；与实验2 组比较：bP＜0.01

2.3 ITP 组NKT 水平与PLT 计数、Th1/Th2 细胞因子的相关性分析

ITP 组NKT 水平与IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ 均无相关性（P＞0.05），NKT 水平与PLT计数呈正相关（P＜0.01）。见表3。

表3 ITP 组NKT 水平与PLT 计数、Th1/Th2 细胞因子的相关性分析 （n=63）

3 讨论

ITP 是临床常见的出血性疾病，严重者可出现鼻出血、牙龈渗血及吐血等症状，颅内出血是该病的致死原因[7]。PLT 计数低于20×109/L 的ITP 患者，出血风险增加，死亡风险加大，PLT 计数与患者病情紧密相关，治疗上需使目标PLT 计数水平保持大于（20～30）×109/L 以降低出血的发生率[8]。本研究通过流式细胞仪检测初诊PLT 计数不同的ITP 组及对照组淋巴细胞亚群、NKT 细胞以及Th1/Th2 细胞因子的水平。

淋巴细胞亚群包括T、B、NK 淋巴细胞亚群，T淋巴细胞亚群以CD3+T 细胞为代表，包括CD3+CD4+辅助T 细胞和CD3+CD8+抑制T 细胞，CD4+/CD8+用以评价机体免疫功能的亢进或抑制状态[9-10]。王萍等[11]发现，ITP 的发病因素与T 淋巴细胞亚群异常有关。本文发现，ITP 组CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+水平明显低于对照组，CD3+CD8+水平明显高于对照组；实验1 组CD3+、CD3+CD4+水平明显低于实验2组，提示ITP 患者存在T 淋巴细胞亚群的异常，与前述研究结果一致，原因可能是CD3+水平降低，细胞免疫功能降低，CD3+CD4+水平降低可能会对自身反应性CD19+B 细胞的增殖产生促进作用，PLT 抗体升高，破坏PLT，CD3+CD8+抑制T 淋巴细胞对PLT 具有直接毒性作用，导致患者PLT 数量下降[6，12]。B 淋巴细胞亚群主要指CD3-CD19+B 细胞，主要介导体液免疫。本文发现，ITP 组CD3-CD19+水平明显高于对照组，实验1 组CD3-CD19+水平明显高于实验2 组，原因可能是B 细胞水平增高，执行体液免疫功能，破坏PLT，从而导致PLT 减少。NK 细胞是指免疫表型为CD3-CD16+CD56+的一类细胞，它是人体固有免疫细胞，不仅有抗病毒、抗肿瘤的作用，还参与免疫调节、免疫监视[13]。本文结果显示，ITP 组CD3-CD16+CD56+水平明显低于对照组，ITP 患者NK 细胞水平降低，其机制可能是NK 细胞数量减少、分化发育障碍、功能降低导致其对自身反应性CD19+B 细胞、杀伤T 细胞的抑制及杀伤不足，从而参与了疾病的发生[14]。由此可见，ITP患者存在淋巴细胞亚群异常，T、B 淋巴细胞亚群与疾病病情密切相关。

NKT 细胞又称自然杀伤T 细胞，是指免疫表型为CD3+CD16+CD56+的一类细胞，本研究显示，ITP 组NKT 水平明显低于对照组，实验1 组NKT 水平明显低于实验2 组，ITP 组NKT 水平与PLT 计数呈正相关关系，其机制可能是，NKT 细胞数量的减少，不能及时清除机体内的病原体，细胞免疫功能不足、体液免疫功能亢进，异常B 细胞不但得不到有效清除，反而大量增殖分化为浆细胞，产生大量抗PLT 抗体；同时，活化增强巨噬细胞吞噬功能，大量PLT 被破坏，最终导致ITP 的发生[15]。

正常情况下，Th1/Th2 细胞保持动态平衡，从而使机体处于相对稳态，一旦这种平衡遭到破坏，机体将会出现各种免疫相关性疾病[16]。近年来国内外多项研究均显示，ITP 患者外周血存在Th1/Th2 平衡偏移现象，但不同的研究结果又有所不同，有的研究结果显示ITP 以Th1 细胞优势为主，而有的研究结果则提示以Th2 细胞表达优势为主[17]。本文结果显示，ITP 组Th1/Th2 细胞因子均升高，提示细胞免疫和体液免疫同时发生，两者均参与ITP 的发生发展过程。Th1/Th2 细胞因子均升高，并未向一方偏移，初诊PLT 计数不同的ITP 组两组细胞因子水平未发生显著变化，原因可能是本研究样本量小，且研究对象为初诊的ITP 患者，患者的疾病状态及个体间的差异可能会对本次实验结果有一定的影响。

综上所述，ITP 发病机制复杂，涉及细胞免疫和体液免疫，淋巴细胞亚群、NKT 细胞，Th1/Th2 细胞因子均参与ITP 的发生、发展过程，T、B 淋巴细胞亚群及NKT 细胞与疾病病情密切相关，此可为ITP 患者的诊疗及预后提供参考。