青蒿琥酯和双氢青蒿素对华支睾吸虫所致小鼠肝纤维化的治疗作用研究

汤宪时，梁幼生，许永良，吴潇潇，季文翔，仝德胜

华支睾吸虫成虫多寄生于宿主肝胆管内，虫体的机械性刺激和排泄分泌产物可导致宿主肝脏长期慢性损伤，引起肝内炎性细胞浸润，激活肝星状细胞向成纤维细胞转化，引发宿主肝纤维化病变[7]。已有研究在各种华支睾吸虫感染的动物模型上观察到华支睾吸虫感染致肝纤维化和肝星状细胞的激活[8-9]。华支睾吸虫感染晚期可导致肝功能衰竭和门脉高压，很可能与肝癌和胆管癌发生风险增高相关[10-12]。因此早期有效地抑制和逆转肝纤维化对华支睾吸虫病临床治疗有重要意义。

青蒿琥酯(artesunate，ART)和双氢青蒿素(dihydroartemisinin，DHA)是具有倍半萜结构的青蒿素的衍生物，不仅是高效抗疟药[13]，而且具有抗纤维化作用。研究表明，青蒿琥酯能抑制肝星状细胞增殖，对四氯化碳致大鼠肝纤维化、大鼠免疫性肝纤维化以及日本血吸虫诱导的小鼠肝纤维化具有拮抗作用[14-16]。双氢青蒿素能够改善胆管结扎导致的大鼠和小鼠肝纤维化病理改变[17-18],也能够缓解四氯化碳导致的纤维化肝脏门脉高压[19]。本研究在小鼠华支睾吸虫病模型基础上，观察、评估两种青蒿素衍生物对华支睾吸虫所致肝纤维化的治疗作用，为探索华支睾吸虫病药物治疗方法和拓展青蒿素临床应用提供思路。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 实验动物及麦穗鱼 SPF级BALB/c小鼠(6周龄)购自扬州大学比较医学中心。所有动物均饲养于江苏省血吸虫病防治研究所实验动物中心，实验过程中对动物的饲养及取材均遵守《江苏省寄生虫病研究所实验动物的护理和使用指南》。含华支睾吸虫囊蚴的麦穗鱼捕捞于江苏省徐州市睢宁县野外淡水环境。

1.1.2 主要仪器及试剂 ND-2L型球磨机(南京南大天尊电子有限公司)；JC301搅拌器(浙江苏泊尔股份有限公司)；80目标准筛(河北海吉金属丝网制造有限公司)；组织切片机(北京轩泰仪公司)；切片刀(德国Leica公司)；Nanodrop 2000 荧光分光光度计(美国Thermo Fisher Scientific公司)；PCR仪(德国Eppendorf公司)；LightCycler480荧光定量PCR仪(美国BD公司)；SpectraMax i3x多功能酶标仪(美国Molecular Devices公司)；恒温箱(北京乐普纳科技有限公司)；电泳仪和转膜仪(美国Bio-Rad公司)；凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司)；AU680全自动生化分析仪(美国Beckman公司)。青蒿琥酯(桂林南药股份有限公司)；双氢青蒿素(重庆华立武陵山制药有限公司)；聚氧乙烯蓖麻油(美国Sigma公司)；吡喹酮(美国Sigma公司)；氯化钠(国药集团化学试剂有限公司)；胃蛋白酶(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；盐酸(国药集团化学试剂有限公司)；多聚甲醛(国药集团化学试剂有限公司)；石蜡(江苏世泰实验器材有限公司)；无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司)；二甲苯(国药集团化学试剂有限公司)；正丁醇(国药集团化学试剂有限公司)；HE染色试剂盒(索莱宝科技有限公司)；Masson染色试剂盒(索莱宝科技有限公司)；Trizol试剂(南京诺唯赞生物科技有限公司)；HiScript○R两步法qRT-PCR试剂盒(南京诺唯赞生物科技有限公司)；AceQ○R通用型高特异性染料法定量PCR检测试剂盒(南京诺唯赞生物科技有限公司)；RT-PCR引物(上海生工生物工程股份有限公司)；BCA试剂盒(碧云天生物科技有限公司)；脱脂奶粉(碧云天生物科技有限公司)；Tris(碧云天生物科技有限公司)；甘氨酸(碧云天生物科技有限公司)；SDS(碧云天生物科技有限公司)；SDS-PAGE预制胶(碧云天生物科技有限公司)；α-SMA一抗(英国Abcam公司)；Collagen Ⅰ一抗(美国Affinity Biosciences公司)；Collagen Ⅲ一抗(武汉三鹰生物技术有限公司)；GAPDH一抗(武汉爱博泰克生物科技有限公司)；HRP 羊抗兔二抗(碧云天生物科技有限公司)；HRP羊抗鼠二抗(碧云天生物科技有限公司)；HRP化学发光液(美国Affinity Biosciences公司)；丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒(上海复星诊断科技有限公司)；碱性磷酸酶测定试剂盒(上海复星诊断科技有限公司)；天门冬氨酸氨基转移酶测定试剂盒(上海复星长征医学科学有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 华支睾吸虫囊蚴收集 清洗数条麦穗鱼，刮鳞，取肌肉组织，用搅拌器打碎，置于2 000 mL烧瓶中。配制胃蛋白酶消化液(NaCl 12 g，胃蛋白酶10 g，加入单蒸水溶解定容至1 000 mL，用盐酸调pH值至 2.0)。向烧瓶中加入胃蛋白酶消化液1 000 mL，搅拌均匀，37 ℃恒温箱中消化5 h，利用磁力搅拌器帮助消化。消化处理后，通过80目筛网过滤至1 000 mL量杯中，加生理盐水至满，静置1 h，去上清，重复上述步骤3次，达到纯化效果，收集沉淀物。显微镜下观察、挑取、计数华支睾吸虫囊蚴，保存于4 ℃生理盐水中，当天使用。

1.2.2 华支睾吸虫病小鼠模型建立 BALB/c小鼠10只，雄性，6周龄，体重(20±0.5) g。小鼠饲养1周后，随机分为实验组和对照组，每组5只。实验组小鼠每只经口灌胃感染约30个华支睾吸虫囊蚴，对照组小鼠以生理盐水灌胃。饲养30 d后，镜下查感染囊蚴小鼠的粪便虫卵,将虫卵阳性的小鼠麻醉处死，留取肝组织，一部分置于-80 ℃冰箱保存，用于提取小鼠肝脏总蛋白质和Western blot检测，一部分置于4%多聚甲醛固定，用于HE和Masson染色，评估实验组小鼠肝纤维化程度以及模型是否成功。

1.2.3 药物治疗实验动物分组 6周龄雄性BALB/c小鼠35只，每只经口灌胃感染约30个华支睾吸虫囊蚴，饲养30 d后，镜下查小鼠粪便虫卵，将虫卵阳性的小鼠随机分为7组，分别为青蒿琥酯组(ART组)、氯化钠组(NaCl组)、吡喹酮组(PZQ组)、(吡喹酮+青蒿琥酯)组[(PZQ+ART)组]、双氢青蒿素组(DHA组)、聚氧乙烯蓖麻油组(EL组)、(吡喹酮+双氢青蒿素)组[(PZQ+DHA)组]，每组5只,见表1。各组小鼠于室温20～25 ℃下饲养，相对湿度约60%，光照每12 h明暗交替，小鼠自由饮食。给药结束后，各组小鼠麻醉后眼球采血处死，无菌留取肝组织，置于-80 ℃冰箱保存，用于提取小鼠肝脏的总RNA和蛋白质。

表1 药物治疗动物实验分组Tab.1 Animal groupings according to different drug treatments

1.2.4 苏木素-伊红(HE)和Masson三色染色 小鼠解剖时快速将形态完好的肝组织放入4 %多聚甲醛固定液中4 ℃固定，1周后进行肝脏组织脱水透明、石蜡包埋切片，分别按照HE和Masson染色试剂盒说明书进行染色操作，中性树胶封片。光学显微镜下观察各组小鼠肝组织病理变化和胶原增生情况。

3.合理的收入是影响员工幸福感的基本因子。有实验研究表明，一个国家中最富有的阶层不一定是最幸福的阶层。也就是说，收入水平与幸福感之间并不是直线关系，而是曲线关系。通常来说，当一个人对最基本的温饱问题都得不到满足的时候，那么他不可能感到幸福。因此，一个人在基本需求得到满足之前，会因为收入的逐步提高，其幸福感也会相对得到相应的提升。相反，当一个人的基本需求得到满足，收入的提高却并没有给他带来更大的幸福感，有成衰减的态势，并且工资薪水越高，越明显，有时甚至可以忽略不计。

1.2.5 肝组织α-SMA、TGF-β、Col I、Col III mRNA表达检测 取100 mg小鼠肝脏组织，按试剂说明书以Trizol法提取肝脏总RNA，用Nanodrop 2000 紫外分光光度计测定RNA浓度，去除其中基因组DNA后，逆转录成cDNA。运用Oligo6软件设计通过荧光定量PCR反应扩增目标基因CollagenⅠ(ColI)、CollagenIII(ColIII)、TGF-β、α-SMA和管家基因β-actin的引物(表2)。反应体系(20 μL)为： cDNA 1 μL， 2×预混液10 μL，上、下游引物浓度10 μmol/L, 各0.4 μL，去RNA酶水8.2 μL。反应条件为：95℃预变性5 min；95 ℃变性10 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，40 个循环；最后72 ℃延伸10 min。以ΔΔCT法相对定量各基因mRNA表达，并进行相对量的计算和分析。

1.2.6 肝组织α-SMA、Col I、Col III蛋白表达检测 取20～40 mg解冻的小鼠肝脏组织，放入4 ℃ RIPA裂解液中研磨，冰上裂解2 h，离心取上清，为可溶性肝脏蛋白，以BCA法测定蛋白浓度。按照Western Blot操作步骤依次进行蛋白变性、SDS-PAGE电泳、转膜、封闭，4 ℃管家基因GAPDH和目标蛋白α-SMA、Col I、Col III抗体孵育12 h、二抗孵育、化学发光、曝光拍照。使用Image J软件标示各蛋白条带灰度值，计算各基因蛋白表达量。以GAPDH蛋白表达量为基准，比较各组小鼠肝脏各目标基因的相对蛋白表达。

表2 基因表达检测引物序列Tab.2 Sequences of primers for gene expression detection

1.2.6 肝功能检测 采集各组小鼠眼球静脉血1 mL，37 ℃恒温箱中静置1 h，分离血清。分别选择丙氨酸底物法、天门冬氨酸底物法和NPP底物-AMP缓冲液法检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)含量，严格遵循各试剂盒说明书开展上机检测。

2 结 果

2.1 华支睾吸虫感染小鼠肝纤维化模型建立

2.1.1 染色结果 HE染色(图1a)显示，未感染华支睾吸虫小鼠肝小叶结构正常，轮廓清晰，肝细胞大小均一，染色均匀，呈辐射状排列在中央静脉周围，无变性坏死，汇管区无异常。感染组小鼠肝小叶结构遭到破坏，紊乱，肝索结构消失，中央静脉充血明显，周围的肝细胞出现变性坏死，大量炎性细胞浸润，汇管区周围出现大量胶原纤维，内部可见虫卵(图1b、c)，Masson染色(图1d)显示汇管区肝组织中纤维化明显，围绕虫卵沉积排列。

注：a为未感染组(HE，100×)；b为感染组(HE，100×)；c为感染组(HE，400×)；d为感染组(Masson，400×)。图1 感染华支睾吸虫小鼠肝组织病理学改变和胶原增生情况Fig.1 Pathological changes and collagen hyperplasia of liver tissue in mice infected with Clonorchis sinensis

2.1.2 Western Blot结果 感染组小鼠肝脏Col III表达量(1.26±0.01)高于未感染组(0.75±0.14)(t=2.01,P<0.05)，而感染组的Col I(0.54±0.17)和α-SMA(0.49±0.007)表达量与未感染组(0.59±0.18、0.78±0.2)比较差异无统计学意义，见图2。

注：与未感染组比较，*P<0.05图2 感染和未感染华支睾吸虫小鼠肝组织Col I、Col III、α-SMA蛋白表达水平Fig.2 Expression levels of Col I, Col III and α-SMA in liver tissues in mice with or without Clonorchis sinensis infection

2.2 小鼠肝组织ColI、α-SMA、TGF-β、ColIII基因mRNA表达水平 荧光定量PCR结果(图3)显示，接受ART治疗的小鼠，各组间(NaCl组、ART组、PZQ组、PZQ+ART组)ColI(1.23±0.84、9.4±11.17、0.84±0.41、0.59±0.41)、α-SMA(3.17±2.33、4.68±2.93、1.84±1.55、0.91±0.37)、TGF-β(3.09±3.27、18.89±19.63、8.39±13.81、1.82±0.74)、ColIII(1.09±0.53、4.89±4.45、0.67±0.31、0.65±0.28)基因mRNA表达水平无统计学差异(ColI(tNaClvsART=-4.32,tNaClvsPZQ=0.20,tNaClvsPZQ+ART=0.33,tARTvsPZQ=0.38,tARTvsPZQ+ART=0.39,tPZQvsPZQ+ART=0.30)、α-SMA(tNaClvsART=-0.28,tNaClvsPZQ=0.25,tNaClvsPZQ+ART=0.43,tARTvsPZQ=0.48,tARTvsPZQ+ART=0.64,tPZQvsPZQ+ART=0.29)、TGF-β(tNaClvsART=-2.15,tNaClvsPZQ=-0.72,tNaClvsPZQ+ART=0.17,tARTvsPZQ=0.26,tARTvsPZQ+ART=0.43,tPZQvsPZQ+ART=0.23)、ColIII(tNaClvsART=-3.16,tNaClvsPZQ=0.35,tNaClvsPZQ+ART=0.37,tARTvsPZQ=0.47,tARTvsPZQ+ART=0.47,tPZQvsPZQ+ART=0.03))。接受DHA治疗的小鼠，PZQ+DHA组TGF-β基因mRNA表达水平低于DHA组(t=0.48,P<0.05)，PZQ+DHA组Col III基因mRNA表达水平高于PZQ组(t=-3.36,P<0.05)，除此之外，各组间(EL组、DHA组、PZQ组、PZQ+DHA组)ColI(1.85±2.49、5.1±4.35、0.84±0.41、3.12±1.97)、α-SMA(2.46±2.97、11.06±16.39、1.84±1.55、3.57±2.57)、TGF-β(4.59±5.57、9.57±6.23、8.39±13.81、2.81±1.8)、ColIII(1.61±1.8、3.72±2.84、0.67±0.31、2.81±1.43)基因mRNA表达水平无统计学差异(ColI(tELvsDHA=-0.58,tELvsPZQ=0.18,tELvsPZQ+DHA=-0.22,tDHAvsPZQ=0.43,tDHAvsPZQ+DHA=0.20,tPZQvsPZQ+DHA=-2.73)、α-SMA(tELvsDHA=-1.29,tELvsPZQ=0.09,tELvsPZQ+DHA=-0.16,tDHAvsPZQ=0.25,tDHAvsPZQ+DHA=0.20,tPZQvsPZQ+DHA=-0.55)、TGF-β(tELvsDHA=-0.39,tELvsPZQ=-0.30,tELvsPZQ+DHA=0.14,tDHAvsPZQ=0.08,tDHAvsPZQ+DHA=0.48,tPZQvsPZQ+DHA=0.20)、ColIII(tELvsDHA=-0.52,tELvsPZQ=0.23,tELvsPZQ+DHA=-0.29,tDHAvsPZQ=0.47,tDHAvsPZQ+DHA=0.14,tPZQvsPZQ+DHA=-3.36))。

注：与DHA组比较，*P<0.05(TGF-β);与PZQ组比较，*P<0.05(Col III)。图3 感染华支睾吸虫小鼠药物治疗后肝组织Col I、α-SMA、TGF-β、Col III基因mRNA表达水平Fig.3 mRNA expression levels of Col I, α-SMA, TGF-β and Col III genes in liver tissues in mice infected with Clonorchis sinensis after drug treatment

2.3 小鼠肝组织α-SMA、ColI、ColIII基因蛋白表达水平 Western Blot结果(图4,5)显示，接受ART治疗的小鼠，ART组(0.32±0.04、0.81±0.09)和PZQ+ART组(0.16±0.01、1.02±0.18)的ColI、ColIII蛋白表达水平都低于NaCl组(1.54±0.38、2.24±0.35)(ColI(tNaClvsART=1.83,P<0.01；tNaClvsPZQ+ART=2.07,P<0.05)、ColIII(tNaClvsART=2.29,P<0.01；tNaClvsPZQ+ART=1.97,P<0.05)，PZQ+ART组的ColI表达水平低于ART组(t=1.98,P<0.05)。接受DHA治疗的小鼠, DHA组(1.00±0.63、0.78±0.43)、PZQ+DHA组(0.66±0.22、1.13±0.26)α-SMA、Col I蛋白表达水平与EL组(0.62±0.19、1.22±0.18)比较无统计学差异(α-SMA(tELvsDHA=-0.98,tELvsPZQ+DHA=-0.1)、Col I(tELvsDHA=1.19,tELvsPZQ+DHA=0.23)。

注：与NaCl组比较，*P<0.05，**P<0.01。图4 感染华支睾吸虫小鼠ART治疗后肝组织Col I、Col III蛋白表达水平Fig.4 Expression levels of Col I and Col III proteins in liver tissue in mice infected with Clonorchis sinensis after ART treatment

图5 感染华支睾吸虫小鼠DHA治疗后肝组织α-SMA、Col I蛋白表达水平Fig.5 Expression levels of α-SMA and Col I proteins in liver tissue in mice infected with Clonorchis sinensis after DHA treatment

2.4 小鼠肝功能检测 如图6A所示，接受ART治疗的小鼠，各组血清ALP(62.5±12.92、132±143.41、66.33±13.05、86.66±68.64 U/L)无统计学差异(tNaClvsART=-2.68,tNaClvsPZQ=-0.14,tNaClvsPZQ+ART=-0.93,tARTvsPZQ=0.22,tARTvsPZQ+ART=0.15,tPZQvsPZQ+ART=-0.89)；PZQ组(58±8.71 U/L)血清ALT水平高于NaCl组(33.5±8.1 U/L)(tNaClvsPZQ=-1.51,P<0.05)，与ART组(74±39.94 U/L)和PZQ+ART组(43.66±11.01 U/L)比较无统计学差异，NaCl组、ART组、PZQ+ART组之间无统计学差异(tNaClvsART=-2.49,tNaClvsPZQ=-1.51,tNaClvsPZQ+ART=-0.62,tARTvsPZQ=0.2,tARTvsPZQ+ART=0.37,tPZQvsPZQ+ART=0.94)；ART组(197.75±8.84 U/L)和PZQ+ART组(234.66±42.54 U/L)血清AST水平与NaCl组(150±20.29 U/L)比较明显升高(tNaClvsART=-1.17,P<0.01;tNaClvsPZQ+ART=-2.08,P<0.05)，PZQ组(195±31.22 U/L)与NaCl组无统计学差异，ART组和PZQ+ART组之间无统计学差异(tNaClvsART=-1.17,tNaClvsPZQ=-1.1,tNaClvsPZQ+ART=-2.08,tARTvsPZQ=0.15,tARTvsPZQ+ART=-2.08,tPZQvsPZQ+ART=-0.73)。

如图6B所示，接受DHA治疗的小鼠，各组血清ALP(57±7.83、102.5±57、66.33±13.05、65±17.56 U/L)无统计学差异(tELvsDHA=-2.9,tELvsPZQ=-0.59,tELvsPZQ+DHA=-0.51,tDHAvsPZQ=0.31,tDHAvsPZQ+DHA=0.32,tPZQvsPZQ+DHA=0.05)。PZQ+DHA组(29±12.98 U/L)血清ALT水平与EL组(107.25±54.26 U/L)和PZQ组(58±8.71 U/L)比较明显降低(tELvsPZQ+DHA=0.72,tPZQvsPZQ+DHA=1.92,P均<0.05)，EL组、DHA组(53.5±36.2 U/L)和PZQ组之间无统计学差异，PZQ+DHA组与DHA组之间无统计学差异(tELvsDHA=0.49,tELvsPZQ=0.45,tELvsPZQ+DHA=0.72,tDHAvsPZQ=-0.06,tDHAvsPZQ+DHA=0.33,tPZQvsPZQ+DHA=1.92)。PZQ+DHA组(143±27.43 U/L)血清AST水平与EL组(207±42.48 U/L)比较显著降低(tELvsPZQ+DHA=0.75,P<0.05)，与DHA组(165±17.98 U/L)和PZQ组(195±31.22 U/L)比较无统计学差异，EL组、DHA组和PZQ组之间无统计学差异(tELvsDHA=0.49,tELvsPZQ=0.14,tELvsPZQ+DHA=0.75,tDHAvsPZQ=-0.83,tDHAvsPZQ+DHA=0.61,tPZQvsPZQ+DHA=0.96)。

注：与NaCl或EL组比较，*P<0.05，**P<0.01。图6 感染华支睾吸虫小鼠药物治疗后血清ALP、ALT、AST水平Fig.6 Serum ALP, ALT and AST levels in mice infected with Clonorchis sinensis after drug treatment

3 讨 论

本研究选择从野生麦穗鱼肌肉获取华支睾吸虫囊蚴，因为小型野生鱼类如麦穗鱼感染率高，感染程度重，囊蚴几乎遍布鱼体全身，但以肌肉内为最多[20]。华支睾吸虫囊蚴在终宿主消化道内经胃蛋白酶和胰蛋白酶作用，囊壁软化，十二指肠内的胆汁进入囊内，引发幼虫破囊壁而出，童虫经总胆管进入肝胆管发育为成虫，成虫虫卵随宿主胆汁进入小肠，随粪便排出体外[20]。本研究以30个囊蚴灌胃小鼠后约30 d在小鼠粪便中发现虫卵。发现虫卵后30 d，肝脏病理切片显示肝内胆管及周边组织发生明显病变，Masson染色显示大量胶原纤维蓝染，Western blot结果显示Col III显著增高，确认肝脏病变部位周围出现纤维组织增生，证明华支睾吸虫所致肝纤维化小鼠模型建立成功，该模型的建立是后续青蒿素药物实验的基础。

本研究选择文献报道过的用于小鼠肝纤维化治疗的青蒿琥酯(ART)和双氢青蒿素(DHA)剂量浓度和给药方法。有研究按照60 mg/kg剂量每天腹腔注射ART，连续2周，较好地早期干预了日本血吸虫感染所致小鼠肝纤维化[21]；有研究报道20 mg/kg的DHA灌胃，1 次/d，共12次，有效抑制胆总管结扎引起的小鼠肝纤维化和四氯化碳诱导小鼠肝纤维化[18-19]。由于本研究选择在肝纤维化形成过程中全程用药，连续用药30 d，所以本研究降低文献中ART剂量至20 mg/kg，与DHA相同，用于治疗华支睾吸虫所致小鼠肝纤维化。除此之外，本研究治疗组中增加吡喹酮300 mg/kg连续2 d用药杀灭肝胆管内成虫，去除继续刺激肝脏导致肝纤维化的病因，作为辅助治疗增强青蒿素抗纤维化的治疗效果。

本研究在转录和翻译两个水平显示青蒿素抗华支睾吸虫所致肝纤维化的有效性。虽然在转录水平与未治疗组相比各ART用药组纤维化相关分子指标表达量没有显著差异，但在蛋白表达水平上，ART治疗组肝脏胶原蛋白(Col I & III)表达显著下降，并且经PZQ杀虫后ART治疗可使胶原蛋白(Col I)水平进一步显著下降，证明ART在20 mg/kg剂量下对华支睾吸虫所致肝纤维化有治疗作用，合并杀虫对ART抗纤维化有重要意义。但是各DHA用药组纤维化分子指标无论在转录还是蛋白表达水平都与对照组没有显著差异，证明DHA在20 mg/kg剂量下抗华支睾吸虫所致肝纤维化作用有限，同时证明没有青蒿素的抗纤维化作用，PZQ杀虫本身不能对肝纤维化治疗起到关键作用。本研究部分治疗组q-PCR结果标准差较大，提示组内存在个体差异，这可能与灌胃后囊蚴在各小鼠体内存活、发育为成虫的数量以及成虫发育程度不均一有关。ART治疗组各纤维化分子指标mRNA水平和蛋白表达量不一致的原因可能是各基因以相同水平转录后，ART药物作用使蛋白翻译水平降低，或者翻译后由于药物作用蛋白降解增加。

本研究探讨ART和DHA连续用药对小鼠肝功能的保护作用。与对照组相比，ART在20 mg/kg剂量下没有明显改善小鼠肝功能作用，相反会引起血清AST的显著增高。DHA在20 mg/kg剂量下也没有明显改善小鼠肝功能，但合并PZQ可以显著降低血清ALT和AST水平，起到一定程度的保肝作用。PZQ单独使用对肝功能保护作用不明显。肝功能检测结果提示适当降低ART剂量或给药次数可能既保证其抗纤维化作用又减少其肝毒性，而加大DHA剂量可能会更好发挥其抗纤维化和保肝作用。后续研究将探索ART和DHA在不同剂量下对华支睾吸虫所致肝纤维化和肝功能的作用，将更全面地了解两种青蒿素衍生物的功能效用和治疗作用，为进一步探索青蒿素对肝脏的作用机制奠定基础。

利益冲突：无