5岁以下腹泻患儿副溶血性弧菌感染调查分析

孙晶晶，龚四堂，陈冠桦，刘瑞桃，耿岚岚，黄玲，张顺先

1广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心消化科，广州 510623；2广州市儿童医院消化科；3增城市妇幼保健院消化科；4上海中医药大学附属龙华医院临床研究中心

腹泻是引起全球5岁以下儿童死亡的第二大疾病，仅次于下呼吸道感染性疾病［1］。2015年，全球50.9万名1～5岁儿童死于腹泻，由腹泻引起的死亡人数占此年龄段死亡人数的8.6%［2］。腹泻是由多种病原、多因素引起的肠道传染性疾病，主要病原体包括轮状病毒A、诺如病毒GⅡ、致腹泻型大肠杆菌、志贺杆菌、沙门菌、空肠弯曲菌、艰难梭菌、腺病毒、星状病毒、副溶血性弧菌（VP）等。其中VP是引起儿童急性腹泻的主要细菌性病原体之一，辽宁省VP总体检出率为4.37%［3］，上海市成人中VP检出率为5.22%［4］。VP感染性腹泻主要在成人中研究较多，而在儿童中却鲜有报道。本研究通过分层抽样选取了2020年1月—12月就诊的822例患儿为研究对象，回顾分析5岁以下腹泻患儿VP感染情况，探讨其感染特征，旨在为VP感染引起的细菌性腹泻防治提供依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2020年1月—12月于广州市儿童医院、广州市妇婴医院、广州市妇女儿童医疗中心、广州市增城区妇幼保健院任何一家医院就诊的5岁以下急性腹泻患儿495例（腹泻组）。腹泻诊断标准［5］：24 h内腹泻次数≥3次伴粪便形态异常（血样便、水样便、黏液样便和蛋花样便等）。选择同一时期，于上述任何一家医院就诊的非腹泻患儿（近14 d内无腹泻表现）327例作为非腹泻组。本研究通过广州市妇女儿童医疗中心伦理审查委员会评审（No.2017111501），同时通过中国临床试验注册中心审核（ChiCTR-ROC-17013620）。患儿家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 样本采集使用医院提供的一次性无菌塑料杯采集符合入选标准的患儿粪便样本，挑取3 g或3 mL粪便装入15 mL无菌离心管中，4℃保存，于24 h内送至实验室检测。患儿的基本信息采用结构化问卷调查完成。问卷填写不完整或拒绝参加本次研究的被排除。

1.3 VP检测挑取黄豆大小或0.5 mL粪便样本，接种至40 g/L氯化钠蛋白胨水中培养18～24 h。随后接种至硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基（TCBS）中37℃培养16～18 h。使用一次性无菌吸头挑选圆形、半透明、表面光滑、直径2～3 mm的绿色菌落10～12个，接种至科玛嘉显色培养基上37℃培养16～18 h。挑取显色为红色的可疑菌落到无菌滤纸上，滴入氧化酶，10 s内显色为紫红色者，视为高度可疑的副溶血性弧菌。然后将该菌接种至营养琼脂上37℃培养16～18 h。用无菌棉签挑取菌落到生理盐水中，将比浊度调至0.5，使用VITEK 2革兰阴性菌鉴定卡在梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定系统上进行鉴定，37℃18～24 h后判定结果。最后将所有阳性菌株保存在含20%甘油肉汤培养基中，并于-80℃冷冻保存。

1.4 统计学方法采用SPSS26.0统计软件。定量资料呈偏态分布以M（P25，P75）表示，比较采用秩和检验；计数资料采用例（%）表示，比较采用χ2检验或Fisher's确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 腹泻组与非腹泻组基本特征比较腹泻组男236例、女259例，非腹泻组男149例、女178例，两组性别比差异无统计学意义（χ2=0.352，P＞0.05）。822例患儿年龄中位数为24个月（95%CI：23～26），腹泻组年龄中位数为17个月（95%CI：16～19），非腹泻组年龄中位数为32个月（95%CI：10～49），腹泻组年龄低于非腹泻组（Z=-5.803，P＜0.05）。

2.2 VP与腹泻的关系腹泻组VP检出率为5.9%（29/495），非腹泻组为1.5%（5/327），腹泻组VP检出率高于非 腹 泻 组（χ2=9.309，P＜0.05，OR=4.008，95%CI：1.535～10.463）。其中腹泻组1岁以下患儿VP检出率为3.0%（5/165），非腹泻组为1.0%（1/98），两组比较差异无统计学意义（χ2=1.114，P＞0.05，OR=3.031，95%CI：0.349～26.332）。腹泻组1岁以上患儿VP检出率为7.3%（24/330），非腹泻组为1.7%（4/229），两组比较差异有统计学意义（χ2=8.676，P＜0.05，OR=4.412，95%CI：1.510～12.893）。

2.3 腹泻患儿VP感染的流行特征住院和门诊腹泻患儿VP检出情况：VP检出率门诊腹泻患儿为7.0%（27/383），住院腹泻患儿为1.8%（2/112），差异 有 统 计 学 意 义（χ2=4.354，P＜0.05，OR=4.17，95%CI：0.977～17.857）。性别分布：腹泻组VP在女性患儿中检出率为6.2%（16/259），男性患儿检出率为5.5%（13/236），腹泻患儿VP检出率女性高于男性，但差异无统计学意义（χ2=0.100，P＞0.05，OR=0.885，95%CI：0.417～1.882）。年龄分布：VP检出率在＜2岁腹泻组中检出率为4.2%（14/330），＞2岁检出率为9.1%（15/165），差异有统计学意义（χ2=4.688，P＜0.05，OR=2.257，95%CI：1.062～4.797）。季节分布：VP检出率在腹泻患儿中有明显的季节分布趋势（χ2=13.982，P＜0.05），秋季（7—9月）检出率最高（13.1%，13/99），冬季（10—12月）检出率最低（2.3%，2/87）。

2.4 腹泻患儿VP感染的临床特征因＜1岁患儿不能描述其是否有腹痛表现，因此未能将腹痛临床症状纳入本次统计。VP感染阳性患儿29例，VP感染阴性患儿466例，VP感染阳性腹泻患儿与VP感染阴性患儿相比，发热、脱水、抽搐、贫血、酸中毒发生率差异无统计学意义（P均＞0.05）。呕吐发生率更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。血便和黏液便发生率差异无统计学意义（P均＞0.05），而水样便发生率高于VP感染阴性患儿，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。腹泻患儿VP阳性者腹泻时间（2 d，95%CI：2～3）与VP阴性者（3d，95%CI：3～4）相比差异有统计学意义（Z=-2.325，P＜0.05）。

表1 腹泻患儿VP感染基本特征比较

3 讨论

VP临床表现以腹痛、呕吐和水样便为主［6］，本研究结果与华南地区VP感染的临床特征基本一致［7］。VP的检出率有明显地域特征，即不同地区检出率不完全一致。研究显示，苏丹喀土穆州急性腹泻儿童中VP检出率为0.9%［8］，我国北京地区0～5岁腹泻儿童VP的检出率为0.4%［9］，而我国其他非沿海地区如云南和甘肃的腹泻儿童中几乎未检测出VP［10-11］。本研究中腹泻患儿VP的检出率为5.9%，高于其他地区，这可能与当地居民的饮食习惯有关。广州地区居民有进食海产品的习惯，有研究发现，广州市海产品VP的检出率高达70%［12］，而非沿海地区居民不常进食海产品，同时水源为淡水，不利于VP的生长，因此感染率相对较低。

VP是一种嗜盐性细菌，主要来自海产品，如海鱼、虾、蟹、贝壳，同时畜禽肉、咸菜等均发现有VP存在。本研究发现，2岁以上腹泻患儿VP检出率较2岁以下腹泻患儿更高，这与儿童的生长活动相符。2岁以上儿童的饮食中辅食种类多样化，外出游玩、就餐及活动范围更广，进食海产品的频率较高；同时，部分居民为了追求海产品的鲜嫩口感，进食烹饪时间较短、未完全熟透的食物，感染机率较大。另外，该年龄段儿童可能尚未形成良好的卫生习惯，自律性差，易接触受污染的水源，更易被感染。

VP检出集中在夏秋季，这可能与气候因素有关，夏秋季天气炎热，水温较高，有利于VP的生长和繁殖，食物易受细菌污染；同时，海产品大量上市，增加了感染机率。冬季是VP检出率最低时期，而此时以儿童病毒性腹泻为主［13］。

VP检出率在门诊（7%）腹泻患儿中高于住院（1.8%）腹泻儿童，这可能与VP感染引起的临床症状相对较轻有关，一般在门诊就能治愈；同时，也与家长重视儿童健康有关，在儿童腹泻的早期阶段及时就医治疗，使感染在疾病初期阶段就得到有效控制。

本研究发现，非腹泻患儿仍可检出VP，可能原因：一是患儿已感染VP，但处于疾病的潜伏期，尚未表现出临床症状。研究显示，VP感染致病的潜伏期为12～24 h［14］。二是患儿感染的VP数量较少，不足以引起临床症状。文献报道，tdh和trh基因编码的直接溶血素和直接溶血相关霉素是VP主要的临床致病因子［15］，患儿VP毒力基因携带情况不同，致病力不同。因此，VP阳性的非腹泻患儿，其VP毒力基因携带情况及大便VP阳性持续时间等将是我们后续研究的重点。

VP感染相关腹泻通常为自限性疾病，病程约为3 d［14］。本研究中VP阳性者腹泻持续时间多为2 d且较VP阴性者腹泻时间更短，考虑为此次VP阳性样本量较少所致。VP感染一般不主张应用抗生素治疗，但对于有严重脱水、免疫缺陷的患儿，应根据粪便培养和药物敏感性结果［16］，使用相应的抗生素进行及时救治。另外，VP被认为是一种食源性病原体，其相关腹泻以散发为主，但在全球如亚洲、非洲、美洲等地区也可引起爆发性流行［17］，故应加强对VP的监测，特别是在幼儿园、托儿所等场所，以防爆发流行。

综上所述，广州地区5岁以下腹泻患儿存在VP感染，有明显的季节分布特征，秋季高发，临床以呕吐、水样便为主要表现。