急性髓系白血病患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与病理特征和预后的关系

尹薇，王欣

遂宁市中心医院血液内科，四川 遂宁 629000

白血病是早期造血前体细胞基因突变和未成熟成髓细胞增殖不良导致的恶性克隆性疾病。2022年癌症统计数据显示，中国白血病发病8.8万例，死亡6.4万例［1］。急性髓系白血病（AML）是成人急性白血病最常见类型，尽管近年来AML诊治取得一定进展，但长期生存率仍较低［2］。因此还需进一步了解其发生和进展机制，以促进临床诊断和新疗法的开发。近年研究表明，长链非编码RNA（lncRNA）、微小RNA（miRNA）等非编码RNA参与AML发生、发 展［3-4］。lncRNA小 核 仁RNA宿 主 基 因16（SNHG16）是lncRNA SNHG家族重要成员。研究报道，lncRNA SNHG16在宫颈癌、肾母细胞瘤等恶性肿瘤中发挥致癌作用［5-6］。miR-183-5p是miRNA家族重要成员。研究报道，miR-183-5p在乳腺癌、结肠癌等恶性肿瘤中异常水平，与肿瘤进展有关［7-8］。笔者通过StarBase数据库预测发现，lncRNA SNHG16与miR-183-5p存在靶向结合位点，但目前关于lncRNA SNHG16、miR-183-5p在AML患者血浆中水平及与病理特征和预后的关系尚未可知。2018年1月—2019年6月，我们通过检测AML患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平，分析二者与病理特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料选取2018年1月—2019年6月我院收治的93例AML患者为AML组，其中男50例、女43例，年龄18～83（56.85±7.62）岁；血红蛋白：≥80 g/L者87例、＜80 g/L者6例；白 细 胞 计 数：≥30×109/L者45例、＜30×109/L者48例；血小板计数：≥50×109/L者37例、＜50×109/L者56例；骨髓原始细胞比率：≥70%者55例、＜70%者38例；髓外病变：有15例、无78例；法美英分型：M1型9例、M2型41例、M4型9例、M5型28例、M6型6例；预后危险分层［9］：高危11例、中危48例、低危34例。选取同期40例体检中心查体健康者为对照组，男23例、女17例，年龄18～77（55.87±7.25）岁；两组性别、年龄比较差异无统计学意义（χ2/t分别为0.158、0.690，P均＞0.05）。纳入标准：①经病理检查确诊为AML，符合《成人急性髓系白血病（非急性早幼粒细胞白血病）中国诊疗指南（2017年版）》［10］诊断标准；②初次确诊，入院前未接受任何抗肿瘤治疗；③临床资料齐全；④可接受随访；⑤患者及家属知情并签署同意书。排除标准：①法美英分型M3型（急性早幼粒细胞白血病）；②合并骨髓增生异常综合征；③合并全身性感染性疾病、自身免疫性疾病、其他部位恶性肿瘤；④年龄＜18岁。本研究经医院伦理委员会批准（2018-0129）。

1.2 血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p检测收集AML组入院时和对照组体检时3 mL静脉血，枸橼酸钠抗凝，3 000 r/min离心15 min（离心半径10 cm），弃血清，留取血浆。采用TRIzol法（北京百奥莱博科技有限公司，编号：ALH011）提取血浆总RNA，微量分光光度计（赛默飞世尔科技有限公司，型号：Nano-Drop）验 证 纯 度、浓 度，OD260/OD280为1.8～2.0，TaKaRa反转录试剂盒（北京智杰方远科技有限公司，编号：RR036A）合成cDNA。以cDNA为模板，采用PCR扩增仪（赛默飞世尔科技有限公司，型号：ABI 9700）按照SYBR®Premix Ex Taq™试剂盒（上海赫果生物科技有限公司，编号：DRR820A）进行扩增：lncRNA SNHG16正向引物：5'-GTGCCTCAGGAAGTCTCTTGCC-3'，反向引物5'-ATCCAAACAAGTTATCACACAGCAC-3'；lncRNA SNHG16内参GAPDH正向引物：5＇-AGAAGGCTGGGGCTCATTTG-3'，反 向 引 物5＇-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-3'；miR-183-5p正 向 引 物：5＇-GCGGCTATGGCACTGGTAGAA-3'，反向引 物5＇-GTGCAGGGTCCGAGGTATTC-3'；miR-183-5p内参U6正向引物：5＇-CTCGCTTCGGCAGCACA-3＇，反向引物5＇-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3＇；引物设计和合成由上海生工生物工程股份有限公司完成。反应条件：95℃90 s，95℃30 s、63℃30 s、72℃15 s，循环40次 后 收 集Ct值，采 用2-ΔΔCT法 计 算 血 浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p相对水平。

1.3 随访和分组AML患者出院后通过门诊或电话随访3年，根据血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平分为lncRNA SNHG16高水平组（≥1.90，n=47）、lncRNA SNHG16低水平组（＜1.90，n=46）和miR-183-5p高水平组（≥1.03，n=49）、miR-183-5p低水平组（＜1.03，n=44），统计不同组别患者的生存情况。

1.4 统计学方法采用SPSS28.0统计软件。计数资料以例（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料呈正态分布以±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用F检验，事后多重比较采用Bonferroni校正；Pearson相关系数分析AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平的相关性；Kaplan-Meier法绘制AML患者生存曲线，组间生存率比较采用Log-rank检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比较AML组、对照组血浆lncRNA SNHG16相对表达量分别为1.90±0.44、1.29±0.23，miR-183-5p相对表达量分别为1.03±0.24、1.60±0.31，两组血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平比较差异有统计学意义（t分别为10.635、10.304，P均＜0.01）。

2.2 AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平的相关性Pearson相关性分析显示，AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平呈负相关（r=-0.704，P＜0.01）。

2.3 AML患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与病理特征的关系AML患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层有关（P均＜0.05）。见表1。

表1 血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与AML患者病理特征的关系（±s）

表1 血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与AML患者病理特征的关系（±s）

病理特征性别男 女年龄≥60岁＜60岁血红蛋白≥80 g/L＜80 g/L白细胞计数≥30×109/L＜30×109/L血小板计数≥50×109/L＜50×109/L骨髓原始细胞比率≥70%＜70%髓外病变有 无法美英分型M1、M2 M4、M5 M6预后危险分层高危中危低危n 50 43 20 73 87 6 45 48 37 56 55 38 15 78 50 37 6 11 48 34 lncRNA SNHG16images/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.92±0.45 1.88±0.43 1.92±0.37 1.90±0.45 0.90±0.42 1.97±0.64 2.01±0.44 1.80±0.41 1.83±0.36 1.95±0.48 2.00±0.43 1.76±0.40 2.02±0.47 1.88±0.43 1.93±0.43 1.91±0.45 1.67±0.37 2.24±0.57 1.92±0.37 1.76±0.42 t/F 0.454 0.242 0.367 2.396 1.275 2.683 1.119 0.908 13.448 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05 miR-183-5pimages/BZ_7_1777_1203_1802_1246.png±s 1.02±0.24 1.04±0.24 1.02±0.19 1.04±0.25 1.04±0.24 0.97±0.30 0.97±0.18 1.09±0.28 1.07±0.21 1.01±0.25 0.98±0.23 1.12±0.23 0.95±0.24 1.05±0.24 1.04±0.27 1.03±0.19 1.04±0.27 0.76±0.23 1.03±0.18 1.12±0.25 t/F 0.402 0.367 0.624 2.530 1.270 2.874 1.456 0.023 14.790 P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05＞0.05＜0.05

2.4 AML患者血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与预后的关系93例AML患者中位随访25个月，失访7例，死亡42例，3年总生存率为54.84%（51/93）。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，lncRNASNHG16高水平组3年总生存率40.43%（19/47）低于lncRNA SNHG16低水平组69.57%（32/46）；miR-183-5p高水平组3年总生存率67.35%（33/49）高于miR-183-5p低水平组40.91%（18/44），差异均有统计学意义（χ2分别为8.895、6.409，P均＜0.05）。

3 讨论

AML是造血干细胞或祖细胞中特定细胞转录、表观遗传、点突变、遗传突变等变化转变形成的恶性肿瘤，主要表现为髓系前体细胞增殖失控和骨髓衰竭引起的白细胞增加、血小板减少、贫血［11］。目前，造血干细胞移植仍然是AML最有效的治疗手段，但受限于造血干细胞来源和经济条件的影响，未能有效开展［12］。尽管近年来国际上已有统一的AML系统治疗方案，完全缓解率可达50%～80%，但仍有部分AML患者不能达到完全缓解或多次复发，发展为复发性难治性AML，通常于数周或数月内死亡［13］。因此，有必要进一步探索AML相关调控机制，以改善患者预后。

表观遗传学是生命科学研究热点之一。近年越来越多研究证实，表观遗传学能通过影响组织学中多种致癌与抑癌基因途径和免疫系统参与白血病发生、发展［14］。非编码RNA在表观遗传学调控中发挥重要作用。lncRNA是一类转录本＞200个核苷酸的非编码RNA，能通过直接或海绵miRNA间接调节调控基因水平［15］。lncRNA SNHG16定位于人17号染色体长臂25.1，最初由YU等［16］在神经母细胞瘤中发现，并证实其参与促进神经母细胞瘤细胞生长和侵袭。因此，近年来诸多学者致力于研究其在不同肿瘤中的作用。XIAO等［17］研究报道，lncRNA SNHG16在骨肉瘤中高表达，通过miR-1285-3p促进骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和抑制凋亡。XU等［18］研究报道，lncRNA SNHG16在胰腺癌中高水平，通过调控miR-302b-3p/溶质载体家族22成员4轴促进胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。本研究结果显示，AML患者血浆lncRNA SNHG16水平显著上调，提示lncRNA SNHG16高水平可能与AML发生有关，其高水平机制可能与lncRNA SNHG16被癌基因激活而大量转录有关［17-18］。另外，AML患者血浆lncRNA SNHG16水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层有关，提示lncRNA SNHG16高水平参与AML发展，其机制可能与lncRNA SNHG16能调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。肿瘤发生、发展涉及多条信号通路激活或失活，PI3K/Akt信号通路异常激活可改变AML细胞周期，促进AML细胞增殖、迁移、存活和耐药［19］。lncRNA SNHG16水平上调能通过降低第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物活性，促进PI3K/Akt信号通路激活，进而促进AML细胞增殖和迁移［20］。

miRNA是一类长度18～25个核苷酸的非编码RNA，通过与mRNA的3'-非翻译区结合而降解或抑制其翻译而参与基因调控［21］。miR-183-5p定位于人7号染色体长臂23.2，水平高度保守，作为视网膜高度水平特异性miRNA，既往研究多报道其与眼科疾病有关。近年研究发现，miR-183-5p亦参与癌症过程［22］。HU等［23］研究报道，miR-183-5p在膀胱癌中低水平，能靶向调控多核糖核苷酸核苷转移酶1，促进膀胱癌细胞凋亡。MO等［24］研究报道，miR-183-5p在肺腺癌中高水平，能靶向河马/Yes相关蛋白信号通路，促进肺腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成。上述研究提示，miR-183-5p在不同恶性肿瘤中发挥不同作用。本研究结果显示，AML患者血浆miR-183-5p水平显著下调，与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层有关，提示miR-183-5p低水平参与AML发生、发展。miR-183-5p在AML中低水平可能与启动子甲基化有关［23］。随着miR-183-5p水平下调，通过ErbB2相互作用，蛋白激活PI3K/Akt等信号通路增强AML细胞增殖和分化能力，促进AML进展［25］。本研究通过相关性分析发现，AML患者血浆lncRNA SNHG16与miR-183-5p水平呈负相关，提示lncRNA SNHG16与miR-183-5p可能共同参与AML发生、发展，但尚需进一步实验证实。本研究通过随访和绘制不同血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平AML患者生存曲线发现，lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平的AML患者3年总生存率低于lncRNA SNHG16低水平与miR-183-5p高水平患者，说明血浆lncRNA SNHG16、miR-183-5p水平与AML患者预后密切相关，可能成为AML患者预后评价指标。

综上所述，AML患者血浆lncRNA SNHG16高水平和miR-183-5p低水平与白细胞计数、骨髓原始细胞比率、预后危险分层和预后有关。但本研究结果还需多中心研究证实，并需进一步延长随访时间分析二者与AML患者长期预后的关系。