复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱的建立及多组分定量分析

郝佳旭，杨丽娟，范 晓，查丽春，崔利利，程炳铎，李元增，马云淑*

复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱的建立及多组分定量分析

郝佳旭1, 2，杨丽娟1, 2，范 晓1, 2，查丽春1, 2，崔利利3，程炳铎1, 2，李元增1, 2，马云淑1, 2*

1. 云南中医药大学中药学院暨云南省南药可持续利用研究重点实验室，云南 昆明 650500 2. 云南省高校外用给药系统与制剂技术研究重点实验室，云南 昆明 650500 3. 南京中医药大学，江苏 南京 210023

建立复方蜘蛛香挥发油GC-MS指纹图谱及其10个指标成分的定量分析方法，为其质量控制及评价提供参考。提取15批复方蜘蛛香挥发油，采用GC-MS技术建立指纹图谱，使用中南大学“中药指纹图谱计算软件”计算相似度，并对共有峰进行归属。采用聚类分析（cluster analysis，CA）、主成分分析（principal component analysis，PCA）、正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）对指纹图谱进行评价。利用GC法测定挥发油中10个指标成分的含量。15批挥发油得量在4.4～6.8 mL；GC-MS指纹图谱有31个共有峰，其中峰1、11归属于蜘蛛香挥发油；峰31归属于木香挥发油；峰6～9、15、21归属于草果挥发油；峰2～5、10、18为蜘蛛香、草果挥发油共有；峰23、25、27、29、30为蜘蛛香、木香挥发油共有；峰12～14、16、17、19、20、22、24、26、28为蜘蛛香、木香、草果3者挥发油共有；15批样品指纹图谱与中位数法生成的指纹图谱共有模式的相似度在0.798～0.998；聚类分析可以将样品分为2类，其中S1、S2、S5、S6、S11、S14、S15为第1类；S3、S4、S7～S10、S12、S13为第2类；PCA及OPLS-DA可将样品分为4类，其中S1、S2、S5、S6为第1类，S3、S4、S7～S9为第2类，S10、S12、S13为第3类，S11、S14、S15为第4类。异戊酸（峰1）、α-蒎烯（峰2）、β-蒎烯（峰3）、1,8-桉叶素（峰7）、α-松油醇（峰13）、香叶醇（峰15）、β-榄香烯（峰23）、β-丁香烯（峰25）、反式-橙花叔醇（峰28）、石竹素（峰29）的质量浓度在19.49～43.24、2.90～13.15、7.47～17.19、182.94～248.19、12.83～20.48、21.82～57.63、1.54～2.83、3.07～6.50、12.06～19.02、2.94～5.43 mg/mL。建立的复方蜘蛛香挥发油指纹图谱及定量分析方法分离度好、准确性高，可为复方蜘蛛香挥发油质量控制及评价提供参考。

复方蜘蛛香；挥发油；GC-MS；指纹图谱；定量分析；质量控制；聚类分析；主成分分析；正交偏最小二乘法-判别分析；蜘蛛香；木香；草果；异戊酸；α-蒎烯；β-蒎烯；1,8-桉叶素；α-松油醇；香叶醇；β-榄香烯；β-丁香烯；反式-橙花叔醇；石竹素

复方蜘蛛香（Compound Zhizhuxiang，CZ）源于中药部颁标准“香果健消片”［蜘蛛香（炒焦）250 g、草果（去壳、炒焦）100 g、木香（炒）70 g、糯米80 g］，去除糯米而成。方中蜘蛛香辛温散寒，有消食健胃、理气止痛的作用，为君药；木香、草果行气止痛、燥湿温中、消食导滞，共为臣药。全方以调畅气机、疏通经脉为治则，善治消化不良、气胀饱闷、食积腹痛、胸满腹胀。方中蜘蛛香、木香、草果3药均含有挥发油类成分，且3药挥发油类成分均具有一定的药理活性。蜘蛛香挥发油中主要含有萜类、酯类、有机酸类等化合物[1]，且研究显示其对脂多糖诱导的小胶质细胞活化具有抑制作用[2]，可以通过增加脑组织中5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺的含量改善抑郁症状[3]，对DPPH自由基具有较强的清除能力[4]。木香挥发油对多种细菌均有一定的抑菌作用[5]，且对二磷酸腺苷诱导的血小板聚集有着显著的抑制作用[6]。草果挥发油对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有抑菌作用[7]，还有具有一定的抗癌[8-9]、抗感染[10]、抗氧 化[11]等药理活性。

目前，对CZ挥发油成分的研究较为缺乏，尚未见有关报道，仅有本课题组对香果健消片挥发油的包合工艺进行了研究[12]。课题组后续拟将CZ制为透皮贴剂，使用CZ挥发油作为促渗剂的同时，同时发挥一定的药效作用，以期起到“双效合一”的作用。故本研究拟通过GC-MS技术建立CZ挥发油指纹图谱，结合聚类分析、主成分分析（principal component analysis，PCA）及正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）[13]对指纹图谱进行综合评价，并进行多指标成分定量分析，以期为其质量控制及评价提供参考，保证后续制剂的质量稳定性。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 7890a-5975c型气质联用仪、Aglient 7820A型气相色谱仪，美国Agilent公司；EX125ZH型分析天平，奥豪斯仪器有限公司。

1.2 材料

药材样品信息及组合见表1。所有批次药材经云南中医药大学中药学院张洁副教授鉴定，蜘蛛香为败酱科缬草属植物蜘蛛香Jones的干燥根茎和根、木香为菊科云木香属植物木香Decne.的干燥根、草果为姜科砂仁属植物草果Crevost et Lemaire的干燥成熟果实。

表1 样品信息

对照品反式-橙花叔醇（批号M27N11LB0158，质量分数91.5%）、异戊酸（批号B24108，质量分数98.0%）购自上海源叶生物科技有限公司；α-蒎烯（批号110897-201803，质量分数99.5%）、β-蒎烯（批号111827-201202，质量分数99.6%）、α-松油醇（批号111859-201804，质量分数95.0%）、1,8-桉叶素（批号1110788-202108，质量分数99.7%）、香叶醇（批号111643-200602，质量分数96.0%）、β-丁香烯（批号11819-202104，质量分数96.5%）购自中国食品药品检定研究院；对照品石竹素（批号DS021001，质量分数97.3%）、β-榄香烯（批号DL026701，质量分数96.0%）购自森岚科技有限公司；无水乙醇（批号20211001321）、无水硫酸钠（批号2021062079），分析纯，天津市致远化学试剂有限公司。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的配制 精密吸取0.1 mL CZ挥发油，加入无水乙醇稀释至5 mL，摇匀，取适量溶液，过0.22 μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.2 阴性供试品溶液的配制 按照“2.1”项下方法，同法分别提取S15样品产地缺蜘蛛香、木香、草果的阴性挥发油及单味药材挥发油。按照“2.2.1”项下方法制备阴性供试品溶液。

2.3 GC-MS指纹图谱条件及方法学考察

2.3.1 GC-MS条件

（1）GC条件：J&W 122-5532石英毛细管柱（30 m×250 μm×0.25 μm），柱温40 ℃（保持1 min），以5 ℃/min的速率升温至180 ℃（保持2 min），以8 ℃/min的速率升温至250 ℃（保持5 min），进样口温度230 ℃，载气为氦气，柱体积流量1 mL/min；分流比40∶1，进样量1 μL，溶剂延迟4 min。

（2）质谱条件：电离方式EI，离子源230 ℃，电子能量70 eV，四极杆温度150 ℃，辅助加热290 ℃，扫描质量范围/50～600，质谱检索标准库：NIST 11。

2.3.2 精密度试验 取S1号样品，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3.1”项下GC-MS条件连续进样6针，以7号峰（1,8-桉叶素）为参照峰，计算各个共有峰相对保留时间及相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD在0.02%～0.06%，相对峰面积的RSD在0.19%～4.64%，表明仪器精密度良好。

中老年人的身体骨骼已经相对成熟，肌肉灵活度和柔韧性较差，因而肌肉拉伤、关节受伤等现象时常发生。这就要求中老年舞蹈培训与辅导的过程中，舞蹈动作难度要适宜，动作幅度和强度不能太大，否则只会加剧中老年人的身体负担。舞蹈动作难度过大，一方面会诱使不安全因素的发生，增加舞蹈的危险系数；另一方面，会增加舞蹈的难度，不利于舞蹈动作的完成，弱化舞蹈的连贯性和整体性美感。而且，开展舞蹈培训与辅导活动之前，中老年人必须进行基本的准备工作，唤醒身体机能，提高身体的灵活性和敏感度，降低意外情况的发生概率。

2.3.3 重复性试验 取S1号样品6份，按照“2.2.1”项下方法制备6份供试品溶液，按照“2.3.1”项下GC-MS条件进样，以7号峰（1,8-桉叶素）为参照峰，计算各个共有峰相对保留时间及相对峰面积。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD在0.03%～0.14%，相对峰面积的RSD在0.49%～4.89%，表明该方法重复性良好。

2.3.4 稳定性试验 取S1号样品，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3.1”项下GC-MS条件，分别于制备后0、2、4、6、8、12 h进样分析，以7号峰（1,8-桉叶素）为参照峰，计算各个共有峰相对保留时间及相对峰留面积。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD在0.03%～0.09%，相对峰面积的RSD在0.29%～4.76%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4 GC-MS指纹图谱的建立及评价

2.4.1 指纹图谱的建立 将15批CZ挥发油GC-MS指纹图谱导入中南大学“中药指纹图谱计算软件”，设定时间窗宽为0.1 min，多点校正后以样品S15色谱图为参照，建立指纹图谱共有模式，结果见图1，结果显示，15批CZ挥发油样品指纹图谱共标定了31个共有峰，经与质谱检索标准库NIST 11比对及文献检索[1,5,7,14-16]，对31个共有峰进行鉴定，结果见表2；以中位数法生成的对照指纹图谱为基准计算相似度，15批CZ挥发油指纹图谱与中位数图谱的相似度分别为0.879、0.912、0.995、0.991、0.912、0.914、0.994、0.996、0.998、0.994、0.882、0.997、0.995、0.829、0.798。

图1 15批CZ挥发油GC-MS指纹图谱

2.4.2 色谱峰归属 将样品S15的色谱图与各阴性样品色谱图比较，可知峰1、11归属于蜘蛛香挥发油；峰31归属于木香挥发油；峰6～9、15、21归属于草果挥发油；峰2～5、10、18为蜘蛛香、草果挥发油共有；峰23、25、27、29、30为蜘蛛香、木香挥发油共有；峰12～14、16、17、19、20、22、24、26、28为蜘蛛香、木香、草果3者挥发油共有（图2）。

2.4.3 聚类分析 为进一步揭示15批CZ挥发油的差异性，使用SPSS 21软件，以15批样品的31个共有峰峰面积为变量，采用组间连接法，以平方欧氏距离为测量区间对15批样品进行聚类分析，结果见图3。结果显示，当分类距离为10时，样品可以分为2类，其中S1、S2、S5、S6、S11、S14、S15为第1类；S3、S4、S7～S10、S12、S13为第2类。其中，第1类除S11外，所有草果产地均为云南文山；而第2类草果产地主要为云南德宏及云南红河。该结果与相似度结果相互印证，表明不同批次的CZ挥发油之间差异较大，可能对其质量控制及药理作用产生一定影响，而聚类分析结果表明，CZ挥发油质量差异可能主要与草果产地有关。

2.4.4 PCA 将15批CZ挥发油样品的31个共有峰峰面积导入SIMCA 14.1软件，建立PCA模型，结果见图4。结果显示，PCA模型解释率参数2为0.701，2为0.529，均大于0.5，表示建立的模型稳定、可靠；15批样品可以分为4类，其中S1、S2、S5、S6为第1类，S3、S4、S7～S9为第2类，S10、S12、S13为第3类，S11、S14、S15为第4类。第1类草果产地均为云南文山；第2类木香产地主要为云南大理；第3、4类蜘蛛香产地均为云南大理，提示3味药材的产地均会对CZ挥发油质量差异产生一定的影响。PCA结果与聚类分析整体相似，但将样品分为4类，存在一定差距，可能是由于PCA时提取出的主成分仅能代表大部分样品信息，却不能代表全部样品信息所致。

表2 15批CZ挥发油31个共有峰鉴定结果

a-S15挥发油 b-蜘蛛香挥发油 c-木香挥发油 d-草果挥发油 e-缺蜘蛛香挥发油 f-缺木香挥发油 g-缺草果挥发油

图3 15批CZ挥发油聚类分析结果

图4 15批CZ挥发油PCA得分

2.4.5 OPLS-DA 将15批挥发油样品的31个共有峰峰面积导入SIMCA 14.1软件，建立OPLS-DA模型，结果见图5。结果显示，模型解释参数22分别为0.701、0.649，2为0.525，均大于0.5，表明建立的模型稳定可靠；15批样品可以分为4类，其中S1、S2、S5、S6为第1类，S3、S4、S7～S9为第2类，S10、S12、S13为第3类，S11、S14、S15为第4类。以变量投影重要性值（VIP）＞1为标准，筛选出18个共有峰，结果见图6。VIP值由大到小依次排序为6、28、8、2、4、20、3、19、16、9、24、14、22、5、26、15、10、17号峰，而上述18个共有峰分别来源于CZ中3味药材的挥发油，表明蜘蛛香、木香、草果均对CZ挥发油GC-MS指纹图谱具有一定影响。

图5 15批CZ挥发油OPLS-DA得分

图6 CZ挥发油OPLS-DA的VIP值

2.5 多组分定量分析

2.5.1 色谱条件 毛细管柱Agilent 19091J-413 HP-5（30 m×320 μm×0.25 μm），FID检测器；进样口温度230 ℃，检测器温度250 ℃，柱温以40 ℃为起始温度，保持1 min，以5 ℃/min的速率升温至180 ℃，保持1 min，分流比40∶1，体积流量1.5 mL/min，进样量1 μL。

2.5.2 混合对照品溶液的配制 精密称取异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素对照品适量，溶于无水乙醇，摇匀，使之成为质量浓度分别为1.06、0.40、0.42、7.92、0.54、1.45、0.11、0.21、0.46、0.16 mg/mL的混合对照品溶液。

2.5.3 供试品溶液的配制 同“2.2.1”项下方法。

2.5.4 专属性考察 取无水乙醇、混合对照品溶液、供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进样检测。结果显示，各色谱峰峰形良好、分离度均大于1.5，结果见图7。

2.5.5 线性关系考察 取“2.5.2”项中的混合对照品溶液1.67、3.33、6.67、8.33、10.00 mL置于10 mL量瓶中，加入适量无水乙醇，定容，摇匀，分别按照“2.5.1”项下色谱条件进样检测，记录峰面积，以对照品质量浓度为横坐标（），峰面积为纵坐标（），绘制标准曲线，进行线性回归，得回归方程分别为异戊酸＝215.514 9－1.795 4，＝1.000 0，线性范围0.18～1.06 mg/mL；α-蒎烯＝340.944 8＋9.149 6，＝0.999 8，线性范围0.07～0.40 mg/mL；β-蒎烯＝350.287 9＋8.947 0，＝0.999 9，线性范围0.07～0.42 mg/mL；1,8-桉叶素＝382.688 5＋69.213 9，＝0.999 8，线性范围1.32～7.92 mg/mL；α-松油醇＝384.615 7＋3.127 6，＝0.999 5，线性范围0.09～0.54 mg/mL；香叶醇＝365.406 7＋12.867 8，＝0.999 7，线性范围0.24～1.45 mg/mL；β-榄香烯＝423.280 5＋2.532 9，＝0.999 6，线性范围0.02～0.11 mg/mL；β-丁香烯＝449.043 2＋2.210 0，＝0.999 7，线性范围0.04～0.21 mg/mL；反式-橙花叔醇＝353.389 7－4.525 6，＝0.999 6，线性范围0.08～0.46 mg/mL；石竹素＝207.340 9＋0.302 1，＝ 0.999 8，线性范围0.03～0.16 mg/mL。

2.5.6 精密度考察

（1）日内精密度：取“2.5.5”项中稀释后的混合对照品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件连续进样6针，记录峰面积，结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素的峰面积的RSD分别为1.43%、2.68%、1.01%、1.92%、1.85%、1.61%、1.91%、2.20%、2.05%、0.80%，表明仪器日内精密度良好。

A-无水乙醇 B-混合对照品 C-供试品 1-异戊酸 2-α-蒎烯 3-β-蒎烯 4-1,8-桉叶素 5-α-松油醇 6-香叶醇 7-β-榄香烯 8-β-丁香烯 9-反式-橙花叔醇 10-石竹素

（2）日间精密度：取“（1）”项日内精密度中混合对照品溶液，于第2、3天按相同条件分别连续进样3次，记录峰面积，结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素的峰面积的RSD分别为1.57%、1.78%、2.34%、1.98%、2.85%、1.45%、2.83%、2.46%、2.57%、2.71%，表明仪器日间精密度良好。

2.5.7 重复性考察 取S1号样品6份，按照“2.2.1”项下方法平行制备6份供试品溶液，分别按照“2.5.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积，计算各成分含量，结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素平均质量浓度分别为28.14、13.15、13.07、211.46、12.83、41.59、1.84、4.82、12.61、2.94 mg/mL，其RSD分别为1.28%、2.56%、0.68%、0.98%、2.52%、2.93%、2.17%、2.79%、2.88%、2.92%，表明该方法重复性良好。

2.5.8 稳定性考察 取“2.2.1”项中制备的S1号供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件，分别于制备后0、2、4、6、8、12 h进样检测，记录峰面积，结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1，8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素峰面积的RSD分别为1.74%、2.61%、2.59%、1.62%、2.54%、2.95%、2.04%、2.79%、2.52%、2.86%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.5.9 加样回收率考察 取S1号样品6份，加入样品中对应成分含量约1∶1的混合对照品，按照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项下色谱条件进样检测，记录峰面积，结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素的平均加样回收率分别为100.87%、99.18%、98.00%、100.81%、99.77%、99.19%、102.36%、99.63%、99.31%、99.12%，RSD分别为2.32%、1.67%、1.54%、2.23%、2.00%、1.33%、1.88%、1.57%、2.19%、2.39%。

2.5.10 样品测定 取S1～S15号样品，按照“2.1.1”项下方法制备供试品溶液，按照“2.5.1”项色谱条件进样检测，记录峰面积，计算样品中10个成分的含量，结果见表3。结果显示，异戊酸、α-蒎烯、β-蒎烯、1,8-桉叶素、α-松油醇、香叶醇、β-榄香烯、β-丁香烯、反式-橙花叔醇、石竹素的质量浓度分别在19.49～43.24、2.90～13.15、7.47～17.19、182.94～248.19、12.83～20.48、21.82～57.63、1.54～2.83、3.07～6.50、12.06～19.02、2.94～5.43 mg/mL。

3 讨论

3.1 指纹图谱的建立

蜘蛛香主要分布于我国西南及东北地区，在云南、贵州、四川等地有着广泛的分布[17]。木香主要栽培于云南、四川等地，木香是云南的重要道地药材[18]。云南是草果的主要产地，草果的种植面积和产量均占全国的90%以上，主产于红河、文山、德宏等地[19]。本研究在组合形成15批CZ样品时，依据课题组前期对3味药材挥发油指纹图谱的研究[20]，选择了各药的主产地或道地产地。以3味药材为影响因素，药材产地为因素水平，建立L9(34)正交试验设计（S2～S5、S7～S9、S12、S14），并在此基础上随机组合其余批次样品（S1、S6、S10、S11、S13、S15），科学的形成15批样品。在建立GC-MS指纹图谱及定量分析的过程中，考察了不同初始温度（40、50、60 ℃）、不同分流比（10∶1、20∶1、40∶1）对谱图的影响，结果显示初始温度为40 ℃、分流比为40∶1时，谱图峰形、分离度较好。

表3 15批CZ挥发油中10个成分的定量分析

3.2 定量分析指标成分的选择

CZ挥发油中成分复杂，且方中蜘蛛香、木香、草果3味药材均含有一定的挥发油类成分，故在指标成分选择时需兼顾3者。研究显示异戊酸可以改善卵巢切除所致的骨质疏松[21]，归属于蜘蛛香挥发油。1,8-桉叶素为CZ挥发油中含量最多的成分，具有抗水肿[22]、抗炎[22]、抗心力衰竭[23]等多种药理活性；香叶醇对多种癌细胞[24-25]增殖均具有抑制作用，对糖尿病所致肾病有着一定的治疗作用[26]，二者均归属于草果挥发油。α-蒎烯具有神经保护作用[27]；β-蒎烯具有抗癌作用[28]，二者均有一定的抗菌、抗病毒[29-30]活性，二者为草果、蜘蛛香挥发油共有。β-榄香烯具有抗癌作用[31]，β-丁香烯可以减轻脑部缺血再灌注的损伤[32]，石竹素具有镇静作用[33]，3者为蜘蛛香、木香挥发油共有。α-松油醇具有抗炎[34]、心血管保护[35]作用，反式-橙花叔醇对高血压有着一定的缓解作用[36]，二者为3药挥发油共有。此外，α-蒎烯、β-蒎烯、香叶醇、反式-橙花叔醇为OPLS-DA中所得对CZ挥发油影响较大的成分。综上分析，故本研究选择上述10个成分进行定量分析。

4 结论

本研究中的CZ源于香果健消片，去除糯米而成。课题组前期使用原方中4味药材制备透皮贴剂，发现加入糯米后贴剂难以成型；同时，考虑糯米在原方中主要起涩肠作用，其主要成分为淀粉、蛋白质等大分子物质，难以透过皮肤发挥功效。综合考虑，去除方中糯米进行研究。

课题组将CZ制为透皮贴剂，使用CZ挥发油作为促渗剂的同时，同时发挥一定的药效作用，以期起到“双效合一”的作用[37]，为保证后续制剂质量稳定性，故建立了CZ挥发油GC-MS指纹图谱及其中10个指标成分的定量分析方法。方中含挥发油类成分的3味药材挥发油均有表征，较全面地反映了CZ挥发油的化学成分，可以为其质量控制及评价提供参考。通过结合聚类分析、PCA、OPLS-DA评价不同产地来源的药材对质量的影响，结果提示，3味药材的产地均会对其质量产生一定的影响，提示在后续实验过程中需严格控制药材产地来源，以保证后续制剂的质量稳定性。但CZ挥发油的药理作用尚未明确，且挥发油类成分往往受多种因素影响，其成分差异较大，何种差异成分与其药效相关，这些都有待后续深入研究。

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

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Establishment of GC-MS fingerprint and quantitative analysis of multi- components of volatile oil from Compound Zhizhuxiang

HAO Jia-xu1, 2, YANG Li-juan1, 2, FAN Xiao1, 2, ZHA Li-chun1, 2, CUI Li-li3, CHENG Bing-duo1, 2, LI Yuan-zeng1, 2, MA Yun-shu1, 2

1. College of Chinese Materia Medica and Yunnan Key Laboratory of Southern Medicinal Utilization, Yunnan University of Chinese Medicine, Kunming 650500, China 2. The Key Laboratory of External Drug Delivery System and Preparation Technology in University of Yunnan Province, Kunming 650500, China 3. Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China

To establish the GC-MS fingerprint of the volatile oil of Compound Zhizhuxiang (CZ) and quantitative analysis method of 10 index components, providing a reference for the quality control and evaluation of volatile oil of CZ.A total of 15 batches of volatile oil from the CZ were extracted. The GC-MS technology was used to establish the fingerprint of volatile oils, then the “” of Central South University was used to evaluate the similarity, and the common peaks were assigned. Fingerprints were assessed by cluster analysis (CA), principal component analysis (PCA), and orthogonal partial least squares-discriminant analysis (OPLS-DA). The contents of 10 index components in CZ were determined by GC.The volatile oil yield of 15 batches of CZ was between 4.4 and 6.8 mL. 31 Common peaks were identified in the GC-MS fingerprint. Among them, peaks 1, 11 belonged to the volatile oil from Zhizhuxiang (et, VJRR); Peak 31 belonged to the volatile oil from Muxiang (, AR); Peaks 6—9, 15, and 21 belonged to the volatile oil from Caoguo (, TF); Peaks 2—5, 10, 18 were shared by the volatile oil from VJRR and TF; Peaks 23, 25, 27, 29, 30 was shared by the volatile oil from VJRR, and AR, peaks 12—14, 16, 17, 19, 20, 22, 24, 26, 28 shared by the volatile oil from VJRR, AR and TF. The similarity between the 15 batches of sample fingerprints and the median fingerprint was between 0.798 and 0.998. The samples could be divided into two categories by cluster analysis, among S1, S2, S5, S6, S11, S14, and S15 are the first category; S3, S4, S7—S10, S12, and S13 are the second category. The samples could be divided into four categories by PCA and OPLS-DA; among them, S1, S2, S5, and S6 are the first category; S3, S4, S7—S9 are the second category; S10, S12, and S13 are the third category; S11, S14, and S15 are the fourth category. The content of isovaleric acid (peak 1), α-pinene (peak 2), β-pinene (peak 3) 1,8-cineole (peak 7), α-terpineol (peak 13), geraniol (peak 15), β-elemene (peak 23), β-caryophyllene (peak 25), nerolidol (peak 28), caryophyllene oxide (peak 29) was between 19.49—43.24, 2.90—13.15, 7.47—17.19, 182.94—248.19, 12.83—20.48, 21.82—57.63, 1.54—2.83, 3.07—6.50, 12.06—19.02, 2.94—5.43 mg/mL.The established GC-MS fingerprint and quantitative analysis method of volatile oil from CZ have good separation and high accuracy. It can provide a reference for the quality control and evaluation of the volatile oil from CZ.

Compound Zhizhuxiang; volatile oil; GC-MS; fingerprint; quantitative analysis; cluster analysis; principal component analysis; orthogonal partial least squares-discriminant analysis;et;;; isovaleric acid; α-pinene; β-pinene; 1,8-cineole; α-terpineol; geraniol; β-elemene; β-caryophyllene; nerolidol; caryophyllene oxide

R283.6

A

0253 - 2670(2022)22 - 7048 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.22.008

2022-05-27

国家自然科学基金资助项目（82174065）；云南省科技人才和平台计划（202105AG070012）

郝佳旭，男，硕士研究生，研究方向为中药药剂学。E-mail: zermattbm@163.com

马云淑，女，博士，教授，研究方向为中药药剂学。Tel: (0871)65918217 E-mail: yunshuma2@126.com

[责任编辑 郑礼胜]