贵阳地区新生儿遗传代谢疾病串联质谱技术筛查分析

杨 雪 李林洁 张晓怡 刘兴宇 汤贤英

贵州省贵阳市妇幼保健院(550003)

遗传代谢病是因基因突变导致的细胞膜功能异常和酶缺陷，不仅易造成机体生化代谢紊乱，还可造成终身残疾，诱发不可逆神经系统损伤，严重影响出生人口素质[1]。项东顺[2]研究显示，早发现、早诊断、早治疗是筛查新生儿患病的重要途径。串联质谱筛查实现了多种疾病检测，可提高实验效率性和准确性，从而尽早发现基因缺陷，最大程度上降低该病危害[3]。虽然串联质谱推广价值较高，但在应用过程中可受到采血时间、营养摄入、新生儿成熟度及新生儿代谢状态等多种因素影响，出现阳性漏筛，干扰了临床结果判读[4]。目前串联质谱对新生儿遗传代谢疾病监测作用已得到临床证实，但影响初筛阳性率因素研究较少。本文回顾性分析了新生儿遗传代谢疾病初筛情况，分析初筛阳性新生儿特征，为提高本地区出生缺陷干预水平提供参考。

1 资料与方法

1.1 资料来源

经本院伦理委员会审批，收集2015年11月16日—2019年12月31日来自于贵阳地区新生儿干血滤纸片样本105742例及临床资料，剔除缺失及错误数据。

1.2 检测方法

①仪器设备：主要设备WATERS XEVO TQD；PerkinElmer非衍生化多种氨基酸、肉碱和琥珀酰丙酮测定试剂盒；数据来源博圣信息管理系统。②样本采集：采集新生儿足跟外侧或内侧血液标本，制作成滤纸干血片(直径>8mm)，自然通风晾干，4℃保存，送检。③串联质谱筛查：使用全自动打孔仪取圆形血片(直径3.2mm)，放入96孔V底微孔板中，加入内标工作液(100μl)，置45℃ 45min震荡孵育，转移至无包被洁净微孔中，封板检测。对可疑阳性标本复查1次，若复查结果与第一次相同需召回再次复查；若第一次检测结果高于截断值需复查；对复查结果异常者行基因检测或气相色谱检测，确诊疾病。

1.3 观察指标

分析2015—2019年、不同地区初筛阳性率，对比初筛阳性组和阴性组新生儿性别、出生孕周、出生体重情况。

1.4 统计学处理

采用SPSS20.0统计学处理。计数资料用(%)表示，χ2检验；采用二元logistic回归分析。检验水准a=0.05。

2 结果

2.1 新生儿遗传代谢病筛查

2015年11月16日—2019年12月31日累计初筛新生儿105 742例，男性56 281例，女性49 428例；胎龄>42周646例，37～41周101 295例，<37周3450例；出生体重≥4000g 4648例，2500g～3999g 94 500例，<2500g 3036例。正常104 329例；阳性1413例，初筛阳性率1.34%。初筛阳性召回率70.28%，确诊14例，总发病率1/7553。14例中，苯丙酮尿症4例(0.38/万)、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症3例(0.28/万)、异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症2例(0.19/万)、原发性肉碱缺乏症2例(0.19/万)，中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症、酪氨酸血症 I 型各1例，发生率均为0.09/万。

2.2 疾病高发基因突变类型

苯丙酮尿症：苯丙氨酸羟化酶基因；异丁酰辅酶A脱氢酶缺乏症：乙酰辅酶A脱氢酶8基因c.286G>A、c.887G>A、c.289G>A和c.904C>T；原发性肉碱缺乏症：人源重组蛋白P01基因c.1195C>T；中链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症：重组人中链酰基辅酶A脱氢酶基因c.668T>C、c.1247T>C；短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症：短链酰基辅酶A脱氢酶基因c.1148G>A、c.1072G>A；c.981_983delGAC和c.1031A>G；ACADSB基因c.1165A>G；酪氨酸血症 I 型：延胡索二酰乙酰乙酸酶基因 c.509G>T等。

2.3 不同年份、不同地区初筛情况

2015—2019年新生儿遗传代谢疾病初筛阳性率分别为1.15%(62/5396)、0.63(192/30488)、0.88%(199/22617)、2.40%(531/22125)、1.71%(429/25116)。来自于贵阳市北部、西部地区(白云区、清镇市、修文县)初筛阳性率相对较高；东部、南部地区(南明区、开阳县、花溪区)初筛阳性率相对较低；观山湖区虽地处贵阳市西部但初筛阳性率较低。见表1。

表1 贵阳市不同地区新生儿遗传代谢疾病初筛阳性情况分布[例(%)]

2.4 初筛阳性与阴性新生儿基本资料

初筛阳性与阴性新生儿性别无差异(P>0.05)，出生孕周、新生儿出生体重有差异(P<0.05)。见表2。

表2 初筛阳性与阴性新生儿基本资料比较[例(%)]

2.5 二元logistic回归分析

以“初筛是否阳性”作为因变量(1=初筛阳性；0=初筛阴性)，将“出生孕周、新生儿体重”为自变量，纳入二元logistic回归模型。结果显示，早产、低体重儿为遗传代谢病新生儿特征因素(P<0.05)。见表3、表4。

表3 因素变量赋值

表4 logistic回归分析

3 讨论

遗传代谢病主要是因基因突变导致体内受体、膜、蛋白、代谢酶发生异常病变，引发一系列临床症状[5-6]。多发生在婴幼儿期和新生儿期，若处理不及时可造成脑部和神经系统损伤，影响新生儿健康生长发育[7-8]。串联质谱技术是目前筛查遗传代谢病常用方法，为疾病确诊、拟定治疗方案提供科学依据，实现一次检测多种疾病的目的[9-10]。封纪珍[11]研究显示，串联质谱技术能够及时筛查出原发性肉碱缺乏症、甲基丙二酸血症、苯丙酮尿症等多种新生儿遗传代谢性疾病。

本研究对贵阳市范围新生儿资料分析显示，2015—2019年共初筛105 742例，初筛阳性率在2018年相对较高。在各个送样地区中，总体而言贵阳市北部、西部地区初筛阳性率相对较高，而贵阳市东部、南部地区初筛阳性率相对较低。有学者[12]对江津市新生儿疾病筛查结果分析显示，嘉平镇、几江街道、慈云镇、石门镇、永兴镇疾病筛出率相比于其他市区更高。说明遗传病的发生可能与不同地区、不同时期有关，但具体机制有待深入研究。提示临床，可通过串联质谱筛查实现“一次实验检测多种疾病”目的，为遗传代谢病筛查提供技术支持。

本文分析，早产儿、低出生体重是初筛阳性新生儿的特征因素。低体重儿多为早产儿，可致肾上腺、肝脏、肾脏等器官功能发育不成熟[13]。为降低新生儿遗传性代谢疾病发生，需注重：①广泛开展新生儿遗传性代谢性疾病的宣传教育工作，强化家属复诊、就诊意识[14]；②构建新生儿疾病筛查网络、制定新生儿疾病筛查技术规范、对新生儿疾病筛查实施全面质量管理；③注重管理，一方面广泛开展串联质谱新生儿遗传代谢病筛查，另一方面积极治疗，建议有关部门在条件允许下设立项基金，以保证患病儿童及早就诊治疗。

总而言之，本次调查的贵阳地区多种遗传代谢病有一定患病率，串联质谱技术筛查新生儿多种遗传代谢性疾病中有较好效果。早产儿、低体重儿有更高的发生可能，应高度重视早产儿、低体重儿筛查；加强出生缺陷防治体系，减少多种遗传代谢病带来的危害，提高出生人口素质。