广西仫佬族自治县高胆红素血症新生儿UGT1A1基因谱

张慧玲，钟丹妮，李 燕

(1.广西医科大学第一附属医院新生儿科，广西 南宁 530021； 2.广西罗城仫佬族自治县人民医院新生儿科，广西 罗城 546400)

高胆红素血症是新生儿中发病率较高的疾病，是新生儿返院的最常见原因之一[1]。虽然大多数情况下不会造成严重后果，但仍有患儿因胆红素值达到甚至超过危险水平，导致胆红素脑病，对中枢神经系统、听力、视觉、牙齿、运动等方面的发育造成永久性损伤[2-3]。葡萄糖醛酸转移酶是人体内一类重要的Ⅱ相代谢酶，在人体中发挥着不可或缺的作用[4]。葡萄糖醛酸转移酶1A1(uridine diphosphate glucuronosyltransferase 1A1，UGT1A1)是参与胆红素结合和代谢唯一的关键酶[5-7]。UGT1A1基因变异和转录调控改变，都会对酶的表达产生破坏性影响，使胆红素代谢发生异常，蓄积在血液中，从而出现不同程度的高胆红素血症，如Crigler-Najjar综合征和Gilbert综合征等[8-9]。UGT1A1基因的多态性因种族和地区而异，如在高加索人群中，最常见的突变类型为启动子的TATA box重复多态性突变；而G71R基因突变，也就是c.211G>A错义突变是亚洲人群最常见的突变类型[10-11]。广西罗城仫佬族自治县是一个多民族的地区，UGT1A1基因突变是否影响该地区高胆红素血症的发生，究竟是哪种突变导致了该病，目前尚无报道。本文将探讨UGT1A1基因的TATA box突变和G71R突变与广西罗城仫佬族自治县新生儿高胆红素血症之间的关系，现报道如下。

1资料与方法

1.1临床资料

选取2021年1月至12月在罗城仫佬族自治县人民医院确诊为高胆红素血症的100例患儿作为病例组。高胆红素血症诊断标准为：时龄胆红素达到或者超过新生儿小时胆红素列线图第95百分位[12]。选取同一时期在我院妇产科出生，且随访2周无黄疸的足月新生儿100例为对照组。排除标准：葡萄糖六磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G-6-PD)缺乏症、败血症、母婴血型不合型溶血病、巨大儿、早产儿、低出生体重儿、头颅血肿、红细胞增多症等。

200例新生儿日龄1～14天，体重在2.5～4.0kg，收集患儿的性别、民族、胆红素值等基本信息。本研究经医院医学伦理委员会批准，并征得患者家属知情同意。

1.2方法

采集新生儿外周血2mL，用血液基因组DNA分离试剂盒(北京天根公司)分离DNA，储存于-20℃的冰箱中。根据文献设计第一外显子引物，引物序列为F引物：5′-GTCACGTGACACAGTCAAAC-3′，R引物：5′-GTCCCACTCCAATACACAC-3′，产物片段长度999bp[13]。聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)体系(总体积为50μL)：上下游引物各2μL，DNA模板质量为500ng(根据公式：体积=质量/浓度，计算出所需的DNA体积)，2×Taq MasterMix(康为世纪公司)25μL，用去离子水补足50μL。PCR反应程序：94℃预变性2min，94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次，72℃终延伸2min，置于-20℃保存，并送往上海生工生物工程公司直接测序，所得结果与Gene Bank中UGT1A1的基因序列比较，应用Chromas软件判断基因突变位点。

1.3统计学方法

2结果

2.1两组一般资料比较

病例组男53例，女47例；平均胎龄(272.51±9.33)天；平均出生体重(3 168.90±440.67)g；汉族31例，壮族29例，仫佬族35例，其他民族5例。对照组男48例，女52例；平均胎龄(274.64±7.07)天；平均出生体重(3 228.50±313.44)g；汉族24例，壮族39例，仫佬族35例，其他民族2例。两组胎龄、出生体重、性别、民族等基本资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

2.2两组UGT1A1 G71R 基因型分布及等位基因突变率

两组均未检测到启动子TATA box突变。病例组中，纯合G71R突变4例，杂合突变37例，突变率为41.00%(41/100)；对照组中G71R杂合突变9例，未检出纯合G71R突变，突变率为9.00%(9/100)，见图1。G71R基因突变频率和A等位基因频率在病例组和对照组中差异有统计学意义(χ2值分别为28.390、27.746，P<0.05)，见表1。

表1 两组G71R 基因型分布及等位基因频率的比较[n(%)]

2.3病例组不同民族 G71R 等位基因频率的比较

比较病例组中汉族、壮族、仫佬族的G71R 等位基因频率， 差异均无统计学意义(P>0.05)，见表2。因其他民族人数较少，不纳入统计范围。

表2 病例组不同民族间 UGT1A1 G71R等位基因频率的比较

3讨论

3.1新生儿高胆红素血症的病因

新生儿高胆红素血症是临床上常见的疾病，经过多年的研究，部分病因已被人们所知，然而，在一些患儿中，尚未明确病因。近年来，许多学者将探究的目光投向胆红素代谢过程中的代谢酶——UGT1A1酶[14]，它可催化胆红素与葡萄糖醛酸的结合反应，促使胆红素排出体外，成为胆红素代谢中唯一的关键酶[5-7]。当UGT1A1基因启动子序列和编码位点发生了突变，将导致不同类型的高胆红素血症[8-9]。UGT1A1基因最常见的突变为启动子 TATA box 突变与第一外显子 G71R突变。启动子TATA box的TA重复序列增加，使TATA box与TATAA结合蛋白的亲和力下降，造成UGT1A1酶活性降低，影响胆红素的结合能力。第一外显子区域 G71R 基因突变是指UGT1A1 酶第71位的Gly变为Arg，酶活性下降。

3.2 UGT1A1基因多态性的种族和地域差异

在不同的种族和地域之间，UGT1A1基因多态性存在差异。在高加索人群中，最常见的突变类型为(TA)7/(TA)7，发病率为9.7%～13.6%；在亚洲人群中发病率为1%～2%[10-11]；Akaba等[15]1998年报道亚洲人群中最常见的是G71R突变，在中国、日本、韩国尤其普遍。本研究病例组UGT1A1 G71R 基因突变频率为 41.00%，远高于高加索人群，略低于日本的Akaba等[16]学者报道的G71R突变频率47%，也低于韩国学者Kim等[17]在81名高胆红素血症患者中检测到的G71R突变频率50.62%。在本研究中，G71R等位基因频率在对照组和病例组间存在明显差异，该突变可能是广西罗城仫佬族自治县新生儿高胆红素血症的主要类型。病例组的G71R等位基因频率为22.50%，与广西其他地区相似[13,18]，低于上海地区[19]，也低于其他国家如韩国[15]和越南[20]的报道。这可能意味着地域环境、种族等因素导致这种基因的差异性。

在此前的许多研究发现，UGT1A1启动子TATA box突变在亚洲地区发病率较低，且大多发现该突变与亚洲人群高胆红素血症风险增加无明显相关性[21-23]。本研究人群中未检测到TATA box突变，说明广西仫佬族自治县高胆红素血症可能与TATA box突变无关。

不同民族UGT1A1基因谱可能有所不同[24]。奎莉越等[25]研究表明，云南汉族婴儿主要与G71R、Y486D、c.1061C>T这3个位点的复合杂合突变，而Y486D纯合突变则多存在于少数民族婴儿中。吴晓静等[26]、钟勇等[13]发现G71R突变是广西黑衣壮族、来宾壮族及汉族人群中最常见的突变类型，G71R等位基因频率在黑衣壮族和汉族之间具有民族差异性，但来宾壮族、汉族的G71R基因频率无明显差异。本研究中不同民族患儿G71R 基因型分布差异无统计学意义，提示在罗城仫佬族自治县患儿中，G71R突变基因频率可能无民族性差异。

本研究局限性在于纳入人数较少，仅3个民族进行比较，且只对TATA box和G71R基因进行检测，仍有部分患儿未出现该突变，说明还存在着其他的致病因素。今后还应增加研究人数，深入研究除以上两种基因突变类型外的其他基因多态性。

3.3小结

综上所述，UGT1A1 G71R突变是广西罗城仫佬族自治县高胆红素血症的主要突变类型，罗城仫佬族自治县汉族、壮族、仫佬族人群之间的G71R突变基因频率无明显差异。本研究结果对该地区新生儿高胆红素血症的诊治具有一定的意义。此外，识别个人的遗传综合征可对家庭成员产生一定的影响，有助于为家庭和产前遗传咨询及基因检测铺设道路。