穿心莲片中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯检测方法研究

袁建华

(江西省医药学校，江西 南昌 330200)

1 引言

探究穿心莲片中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯检测的研究方法，提高检测穿心莲片的质量标准，以确定穿心莲片的质量检测方法。

2 实验部分

2.1 试剂和仪器

ulti Mate HY-055高效液相色谱仪(ulti mate HY-055 检测器，Thermo Scirncetific色谱工作站)；KQ3200DE HY-007数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；ME204E HY-036电子天平仪(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。硅胶 G板是由青岛海洋化工所研制，自己制作的板的厚度取值0.5 mm；预制板的范围 0.2 mm～0.25 mm，规格10 mm×20 mm；剩余试剂均为分析纯。CAMAG HY-044双波长紫外观察箱(瑞士)。DZF-6050MB HY-016真空干燥箱。SX3.3-10 HY-052节能纤维电阻炉(杭州卓驰仪器有限公司)。HC-3518 HY-027离心机(安徽中科中佳科学仪器有限公司)。PB-10 HY-003 PH计(Sartorius).H50 Lab Tech HY-072冷却水循环机。

2.2 试药

脱水穿心莲内酯对照品(批号：110854-200306中检所)，穿心莲片(广西嘉进药业股份有限公司，批号：1803271、1803272、1803273，规格：0.25 g/片)，穿心莲对照药材若干(批号：121082-200603 中检所)甲醇，乙腈，乙醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂均为分析纯[3]。

2.3 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇—水(60：40)；流速：1.0 mL/min；检测波长：225 nm(穿心莲内酯)、254 nm(脱水穿心莲内酯)[14]。

2.1 实验过程

2.1.1 溶液制备

供试品溶液的制备将此次三个批号的穿心莲片随机取其中的20片，若是包衣片，则除去表面包衣(注：①用刀片将包衣小心去除，不能将内芯切掉，否则重新取样；②用湿润的纱布将穿心莲片湿润，然后来回摩擦，将包衣摩擦掉后放入一张白净的滤纸上，待所有包衣去除完毕，备注好是哪一批。放到烘箱上面进行烘干，烘干后即可继续实验)，用电子天平精密称定20片总重，记录这个数据，然后将称量好的穿心莲片用研钵研细，用小勺取0.5 g，采用减重法精密称定并记录好数据，将称量好的粉末倒入具塞锥形瓶中，用25 mL的移液管配合洗耳球操作，精密加入甲醇25 mL，盖好塞子，连带塞子称定其总重量，置于试验台上面浸泡1小时，在这之后将它放进超声仪中，设置30分钟，处理完后拿出来放冷，再称重，损少的重量继续加甲醇补足，摇匀，用滤纸配合小漏斗进行滤过，用锥形瓶装滤液，用移液管精密量取续滤液10 mL，加在中性氧化铝柱(200目～300目，5 g，柱内径为1.5 cm)上[15]，此中性氧化铝柱采用干法装柱，并用洗耳球轻敲，使得柱子平整且紧密，但不能太过紧实。然后用甲醇20 mL进行洗脱，收集洗脱液并置于50 mL的 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

对照品溶液的制备用电子天平采用减量法(先将称量纸放上去，清零，然后取一定量的对照品，保证量足够，再清零，将一部分对照品倒入量瓶中，再将称量纸跟剩余的对照品放入天平中，看显示的数字即是称取该对照品的量)精密称取0.1135 g穿心莲内酯对照品、0.1232 g脱水穿 心莲内酯对照品，将它们分别倒入两个规格为100 mL的量瓶中，用记号笔做好标记并在实验记录本上记录好数据，然后加适量甲醇进行溶解并且稀释到刻度，则所得对照品的浓度分别是113.5μg/mL、123.2μg/mL。

阴性对照溶液的制备 取适量辅料[16]，按照3.2.2的方法同理配置 阴性对照溶液。

2.1.2 系统适应性试验

取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液 各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱[17]。 从下面的图谱中可以看出，在这个色谱条件下，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯分离效果良好[18]，阴性样品在穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品于相同保留时间没有吸收峰出现，说明并没有出现干扰[19]。

图1 HPLC色谱图A.穿心莲片；B.穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品；C.阴性样品

2.1.3 线性关系考察

分别精密吸取上述配置好的穿心莲 内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液各2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、14 μL、18 μL，将其依次注入高效液相色 谱仪中，测定它们的峰 面积。按对照品进样量(μg)为横坐标，色谱峰的面积为纵坐标，作出标准曲线[20]。结果显示，穿心莲内酯和脱水穿心莲内 酯的进样量和它的色谱峰的 面积都显示出良好的线性关系。其回归方程：穿心莲内酯：Y=6328.1X+190.95，R2=0.9996线性范围：0.227 μg～2.043 μg；脱水穿心莲内酯：Y=4975.2X-118.78，R2=0.9994，线性范围：0.2464 μg～2.2176 μg。结果见表1、表2和图2、图3。

表1 穿心莲内酯线性表

表2 脱水穿心莲内酯线性表

图2 穿心莲内酯标准曲线(r=0.9996)

图3 脱水穿心莲内酯标准曲线(r=0.9994)

2.1.4 精密度试验

精密吸取供试品(批号：1803271)溶液10 μL，注入高效液相色谱仪中，连续测定 5 份，记录每个的峰面积，算出平均峰面积，结果为穿心莲内酯平均峰面积为21460.6，相对标准偏差RSD=0.40 %；脱水穿心莲内酯平均峰面积为14539.8，RSD=0.38 %。

从表3和表4可知，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积的RSD值均小于2%，表明方法的精密度良好。

表3 穿心莲内酯精密度试验

表4 脱水穿心莲内酯精密度试验

2.1.5 稳定性试验

精密吸取供试品(批号：1803271)溶液10 μL，分别在2小时、4小时、6小时、8小时、12小时、24小时的时候测定其色谱峰面积。最后穿心莲内酯的平均峰面积为21465.7，RSD=0.23%；脱水穿心莲内酯的平均峰 面积为14538.7，RSD=0.34%。

从表5和表6可知，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰面积的RSD值小于2%，表明供试品溶液的稳定性良好。

表5 穿心莲内酯稳定性试验

表6 脱水穿心莲内酯稳定性试验

2.1.6 重复性试验

取5份相同容量的同一批次 的样品，按照样品的测定方法进行测定，结果表明样品中的穿心莲内酯平均的含量为22.47 mg/片，RSD值为0.20%；脱水穿心莲内酯平均的含量为20.08 mg/片，RSD值为0.36 %。

从表7和表8可知，穿心莲内酯峰和脱水穿心莲内酯峰含量的RSD值小于2 %，表明方法的重现性良好。

表7 穿心莲内酯重复性试验

表8 脱水穿心莲内酯重复性试验

2.1.7 加样回收试验

精密地量取6份已知含量的 样品溶液并精密加入适量的 对照品，按照样品溶液制备的方法制 备好，然后样品溶液和对照品溶液 各取10 μL，各自进样之后测定其峰面积 并计算好回收率。结果为：穿心莲内酯平均回收率 为100.215 %，RSD=1.91 %；脱水穿心莲内酯平均回收率 为99.103 %，RSD=1.97 %[10]，详见表8和表9。

表8 穿心莲内酯加样回收试验

表9 脱水穿心莲内酯加样回收试验

2.1.8 含量测定

取3批样品，依照供试品溶液的制备办法制备，得供试品溶液，按照“3.1”项下的色谱条件来进行含量测定。其结果见表10和表11。

表10 穿心莲内酯含量

表11 脱水穿心莲内酯含量

3 结果与讨论

薄层层析中穿心莲药材和样品的分离效果都不错，但其中脱水穿心莲内酯对照品的点相对来说不太明显，原因可能是对照品的浓度比较低。由此结果也可知道此方法中的展开剂以及条件都很合适，适用于穿心莲片的鉴别实验。

穿心莲内酯的线性回归方程为：Y=6328.1X+190.95，R2=0.9996，线性范围是0.227 μg～2.043 μg；脱水穿心莲内酯的线性回归方程为：Y=4975.2X-118.78，R2=0.9994，线性范围是0.2464 μg～2.2176 μg。在系统适应性试验中精密度、稳定性、重复性试验的RSD值均小于2%，表明此方法精密度、稳定性、重复性均良好。

本次三批穿心莲片中的穿心莲内酯含量分别为22.1517 mg/片、22.9167 mg/片、22.3868 mg/片，脱水穿心莲内酯的含量分别为20.1220 mg/片、20.0864 mg/片、20.0637 mg/片，表明此厂家生产的三个批次的穿心莲片质量比较稳定，且穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯较高，有较好的药用价值。

以上所述，对于穿心莲片中的穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的检测可以运用此种方法，且效果良好，简洁方便。