脂肪血制备洗涤红细胞的可行性探讨

杜明仪 余培琼 卢少芬 龙海燕 张琦 梁荧

随着医疗技术的不断发展,输血医学在治疗过程也发挥了重要的作用,应用日趋广泛,使用生理盐水与洗涤红细胞进行混悬,保存期至多为24 h,而患者有急需时还需要采用预约制度,这在很大程度上也限制了洗涤红细胞的使用,不仅会耽误患者的最佳治疗时间,而且在急需用血时也加重了血站的工作量［1］。我国在2012 年重新制定和实施的《全血成分血质量要求》以及血站操作技术详细流程中都明确规定使用红细胞保存液制备的悬浮细胞可以放置在2～6℃低温冰箱中进行保存,保存期限≤5 周［2］。如果全血在密闭系统中进行充分洗涤再与红细胞保存液进行混悬后,洗涤红细胞的保存期就可以延长到5 周,与悬浮红细胞的保存期限基本一致,这就为MAP 混悬洗涤红细胞制备提供了依据,同时也能大大减轻临床血站的工作压力,患者有急需时可以迅速调动血库满足临床需要［3］。血站将人体乳糜血分为不同程度,去除血浆后将生理盐水与洗涤红细胞进行混悬,减少血液资源的浪费,提高制备效率,但是血液中的主要成分是红细胞,如果乳糜程度较高,会对红细胞产生造成很大程度的影响,制备时去除乳糜颗粒也会损伤红细胞,因此本研究探讨不同程度的脂肪血制备洗涤红细胞的可行性,现将相关结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料 万瑞血球计数仪；万瑞半自动生化分析仪；游离红总蛋白试剂盒,722 光栅分光光度；无菌接驳机；大容量低温离心机；分浆夹；低温操作台；五联洗涤套装：生理盐水、红细胞保存液、一次性使用塑料血袋,均经过检验审批合格,放置于2～6℃低温冰箱中进行保存［4］。

1.2 血液分类 随机抽取人体脂肪血标本56 份,检测MAP 混悬洗涤红细胞制备前的脂肪血中的乳糜指数,乳糜指数越大血液乳糜程度越重［5］,根据乳糜指数不同分为对照组(正常全血)、轻度乳糜组(乳糜指数≤2)、中度乳糜组(2＜乳糜指数≤5)、重度乳糜组(乳糜指数＞5),每组14 份。

1.3 制备方法 将体采科采集的全血放置于大容量低温离心机中离心并分离出悬浮红细胞,在细胞保存期限内均可以制备MAP 混悬洗涤红细胞。通过无菌接管机将五联洗涤套装的无菌生理盐水与悬浮红细胞连接并在密闭系统中洗涤3 次,这种做法能够有效去除98%以上的血浆、90%以上的白细胞和血小板,同时还能够去除在保存过程中产生的乳酸、钾、氨等代谢产物,保留了80%以上的红细胞,最后加入到红细胞保存液中混匀即可,并留标本置于低温冰箱进行保存［6］。

1.4 检测方法 在储存2、7、14、21、28、35 d 时测定制备洗涤红细胞混悬液中的血细胞比容、游离Hb浓度、总Hb 浓度、计算储存期末溶血率,并且记录分析四组不同储存时间红细胞溶血率。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t检验。P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组MAP 混悬洗涤红细胞储存期末各项指标对比 对照组总Hb浓度为(195.8±8.6)g/L,血细胞比容为(0.54±0.02),游离Hb浓度为(0.68±0.11)g/L,储存期末溶血率为(0.16±0.03)%；轻度乳糜组总Hb 浓度为(192.4±10.5)g/L,血细胞比容为(0.52±0.04),游离Hb浓度为(0.73±0.15)g/L,储存期末溶血率为(0.18±0.05)%；中度乳糜组总Hb 浓度为(180.3±10.4)g/L,血细胞比容为(0.47±0.06),游离Hb 浓度为(1.24±0.18)g/L,储存期末溶血率为(0.24±0.06)%；重度乳糜组总Hb 浓度为(169.5±10.7)g/L,血细胞比容为(0.41±0.05),游离Hb浓度为(1.48±0.25)g/L,储存期末溶血率为(0.48±0.13)%。对照组与轻度乳糜组MAP 混悬洗涤红细胞储存期末总Hb 浓度、血细胞比容、游离Hb 浓度、储存期末溶血率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。中度乳糜组和重度乳糜组的总Hb 浓度、血细胞比容均低于对照组和轻度乳糜组,游离Hb 浓度、储存期末溶血率均高于对照组和轻度乳糜组,差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 四组MAP 混悬洗涤红细胞储存期末各项指标对比 ()

表1 四组MAP 混悬洗涤红细胞储存期末各项指标对比 ()

注：与对照组对比,aP＜0.05 ；与轻度乳糜组对比,bP＜0.05

2.2 四组不同储存时间红细胞溶血率 随着储存时间增加,四组红细胞溶血率升高,且同储存时间对照组、轻度乳糜组、中度乳糜组、重度乳糜组红细胞溶血率逐渐升高。见表2。

表2 四组不同储存时间红细胞溶血率(%)

3 讨论

脂肪血也称为乳糜血,人类摄入脂肪含量较高的食物,如肥肉、花生、油条等,脂肪就会进入血液形成乳糜微粒,血浆呈现浑浊状,近年来血站采集乳糜血的量呈现逐年上升趋势,收集乳糜血液量占总采集量的5%～6%,尽管血站定期都会进行献血知识的宣传,但是为了能够确保血液供应量充足,权衡利弊后一般不临时淘汰,容易打击献血者的积极性,且给血液采集工作增加了难度［7］。研究表明乳糜血如果输入人体会产生很多不良影响,例如导致受血者出现发热、脂肪栓塞、神经水肿等,而且重度乳糜血会增加红细胞膜的脆性,呈现牛奶状,分离血液成分也相当困难,在实验过程中不利于筛查病毒抗体、丙氨酸氨基转移酶(ALT)等,因此在临床实际应用过程中,尤其是血液供应紧张的情况下,高效利用脂肪血具有重要的意义［8］。

研究表明,在利用制备脂肪血时需要去除大量白细胞,静置离心后就可以明显观察到乳糜颗粒上浮,在底部血液中残存量较少,因此制备洗涤红细胞时需要使用生理盐水将其充分洗涤干净,离心后完全去除乳糜颗粒和其他代谢产物。红细胞保存液混悬洗涤红细胞在我国广泛应用于保存新鲜血液,MAP 液的组成成分包括葡萄糖、磷酸盐、氯化钠、枸橼酸、枸橼酸钠以及甘露醇等,葡萄糖和甘露醇的生理作用是为洗涤后的红细胞提供能量,改善pH 值,降低溶血率［9］。本实验采取不同浓度的脂肪血制备洗涤红细胞,在实验过程中是否会造成红细胞的损伤以及对于红细胞质量的影响才是应该关注的重点。而溶血则是检查红细胞储存过程中质量的重要指标,当红细胞膜破损后,Hb逸出是血液储存过程中最容易发生的现象,对于受血者的生命安全构成了威胁［10］。我国全血质量要求中明确规定MAP 混悬洗涤红细胞溶血率应该控制在红细胞总质量的0.8%之内,随着储存时间的延长,储存期末的溶血率也逐渐上升,血细胞比容以及总Hb 浓度都有小范围的上升幅度。而且乳糜程度的提高也会导致储存期末溶血率上升,本实验结果可以明显看出不同乳糜程度、储存时间均会影响洗涤红细胞储存期末溶血率［11］。

综上所述,使用轻中度乳糜血制备洗涤红细胞乳糜指数明显低于重度乳糜血,储存期末溶血率以及其他各项指标也符合国家标准,临床使用后注入人体未见明显不良反应,红细胞保存液混悬洗涤红细胞保存期限有效延长,血站可以根据临床实际用血量适时调整血液库存量,满足临床需求,缩短急需用血患者等待的时间,但是本实验也存在一定程度大的局限性,如样本量较小,可能会存在实验误差,因此需要加大样本量进一步验证实验结果准确性。