无束缚条件下针刺对不同性别佐剂关节炎大鼠镇痛的疗效观察*

戴超然，刘希茹，赵 玲△

1 上海中医药大学，上海 201203；2 上海中医药大学附属曙光医院，

关节炎（arthritis）是关节及关节周围组织，因炎症、感染、创伤、退化或其他因素引起的炎性疾病。针刺镇痛是临床常用的减缓关节炎患者痛苦的方法。痛阈、对疼痛的敏感性和耐受性对针刺镇痛效果有着重要影响，目前研究表明不同性别间的痛阈、对疼痛的敏感性和耐受性有明显差异[1-2］。疼痛差异的机制可能与性激素、内源性镇痛系统、大脑结构和功能以及社会心理因素等有关。因此性别差异是针刺镇痛中需要考虑的因素。

佐剂关节炎（adjuvant-induced Arthritis，AA）大鼠模型在临床表现、病理机制等方面与人类关节炎有许多相似之处，是研究电针对人类关节炎镇痛作用的理想动物模型[3］。本文成功建立AA大鼠模型，通过探究性别因素对电针治疗无束缚状态下AA 大鼠的镇痛作用的影响，为临床电针治疗提供依据，现报道如下：

1 材料与方法

1.1 实验动物选择40 只健康SD 大鼠，雌雄各半，体质量190～220 g，由上海中医药大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：SCXK（浙）2019-0001。饲养条件：环境温度（22±2）℃，相对湿度53%～57%，12 h光照，自由摄食饮水。

1.2 仪器与试剂韩式HANS-100B 疼痛治疗仪（上海聚慕医疗器械有限公司）；JLBehv-CPP 位置偏爱分析系统（旷场实验箱）（上海欣软信息技术有限公司）；电子称（上海香川电子衡器有限公司）。10%戊巴比妥钠（上海氟德化工有限公司，批号：860901）；弗氏（Freud's）完全佐剂（Sigma-Aldrich LLC，批号：sigmaF5881）；0.25×25 mm 无菌针灸针（苏州医疗用品厂有限公司，苏械批注：20162270970）。

1.3 实验方法

1.3.1 造模及分组 实验开始时，将雌、雄各20只大鼠（雌雄各取1 只做预实验）分别按随机数字表法分为3 组。空白对照组6 只，模型对照组7只，治疗组7 只。除空白对照组外，其余两组制备AA 大鼠模型：于实验第1 天向大鼠腹腔注射10%戊巴比妥钠，雄性1.5 mL，雌性1.2 mL，待完全麻醉后，在大鼠左后足由足垫部向外踝关节方向注入弗氏（Freud's）完全佐剂0.1 mL[4］，完成后将大鼠放回对应鼠笼。造模成功表现：28只AA大鼠在造模完成后，踝关节较之前明显肿胀，行动困难且行动意愿降低。

1.3.2 处理方法 实验第3 天，将空白对照组及模型对照组大鼠置于治疗箱内20 min，不进行治疗。治疗组采用无束缚针刺，取双侧后三里（膝关节后外侧，腓骨小头下约5 mm），用0.25×25 mm毫针，直刺7 mm，连接韩式HANS-100B 疼痛治疗仪，选用连续波，频率100 Hz，电压以大鼠耐受为度，治疗20 min，后持续治疗10天。

1.4 观察指标以大鼠在旷场实验箱内活动的总路程和活动时间来判定大鼠疼痛程度。将大鼠放入旷场内，保持周围环境安静，连接计算机，记录15 min 内大鼠活动轨迹，每次4 只大鼠。在每只大鼠实验后，用酒精喷洒清洁实验箱后通风换气，以防嗅觉暗示传递给下一只大鼠。记录完毕后，用位置偏爱分析系统软件计算大鼠活动总路程、总时间、边路路程及边路时间。

1.5 统计学方法采用SPSS 21.0 统计学软件进行统计学分析，计量资料以xˉ±s表示，与筛选期基础值进行比较，采用Wilcoxon 秩和检验，组内采用独立样本t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

旷场实验指标 1）与空白对照组比较，模型对照组大鼠自发活动总路程、总时间，自发活动边路路程及边路时间均减少（P＜0.05）。2）与模型对照组比较，雌性治疗组大鼠自发自发活动总路程及总时间，自发活动边路路程及边路时间均增加（P＜0.05），且增加程度大于雄性治疗组大鼠（P＜0.05）。3）雄性治疗组大鼠自发活动边路路程模型小于模型对照组，但差异无统计学意义（P＞0.05），自发边路时间多于模型对照组（P＜0.05）。见表1—2。

表1 3组不同性别大鼠旷场自发活动总路程及总时间比较（xˉ±s）

表2 3组不同性别大鼠旷场自发活动边路路程及边路时间比较（xˉ±s）

3 讨论

3.1 穴位选择穴位电刺激在全身均可产生一定程度的镇痛效应，且相关穴位的研究探讨与日俱增。随着研究进展的日益丰富[5-7］，研究者发现在炎性疼痛病症治疗时，针灸对其镇痛效果存在选穴的相对特异性，以疼痛局部或邻近穴位效果为佳[8-9］。足三里靠近大鼠关节炎发生位置，具有强壮身心的作用。宁云等[10］在对3组单发性AA多次100 Hz TENS 治疗中观察到不论急性期或稳定期，足三里穴位刺激组背屈评分较对照组明显降低。AA 大鼠模型既有关节的局部炎症反应，又有诸如大鼠精神萎靡、毛发失去光泽、体质量下降、耳朵、鼻和尾根部出现“关节炎”结节等全身症状表现[11］。故综合上述考量，笔者电针治疗时选择大鼠后三里穴位。

3.2 观察指标的选择在旷场内，是以大鼠总运动距离、活动时间等新指标进行观察，从而避免了因传统人为观察手工记录所造成的标准不一致性、主观性程度大、费时费力等缺点，能够更直接地反应动物的兴奋程度，也能取得更加真实准确的实验数据[12］。

3.3 使用无束缚法针刺的原因在传统针刺镇痛实验中，研究者几乎都倾向于针刺本身就是一种强烈的躯体刺激，所以一般实验动物在治疗过程中必须被抑制或麻醉[13-15］。麻醉剂或抑制诱导的应激往往伴随着复杂的激素反应模式和中枢神经系统的功能变化[16-20］。而本次实验采取的无束缚针刺治疗法对于动物在接受治疗时的状态也能进行控制，可以排除以往抑制、麻醉等刺激对实验结果的干扰，得出更能够准确反映镇痛效果的结果。

3.4 性别因素对AA 大鼠旷场数据的影响李甲文[21］发现雌性大鼠100 Hz电针的镇痛作用强于雄性大鼠，这种差异以电针20 min时最为显著，后将这种差异的形成原因指向了中枢神经系统的差异。

本实验数据发现，不同性别大鼠电针治疗效果相互对比，对大鼠在旷场内自发活动总路程、时间和边路路程的改善程度有明显差异，边路时间改善程度有轻微差异。得出100Hz 电针无束缚针刺AA 大鼠的镇痛效果中，雌性大鼠的疗效要优于雄性大鼠的结论，与查阅的文献结果相符合。

今后可以继续研究性别因素对电针或手针缓解不同种类疼痛的影响，并探求其深层机制。也可进一步研究针刺不同性别大鼠镇痛的信号通路是否相同，以获得更好的临床疗效。