淋巴结转移性甲状腺乳头状癌免疫微环境改变及预后分析

蓝 莉，黄英举

（1.钦州市第二人民医院病理科；2.钦州市第二人民医院肿瘤外科，广西 钦州 535000）

目前随着人们生活方式的改变和生活节奏的加快，甲状腺癌的发病率逐年上升，女性和男性的患病率之比为3∶1[1]。甲状腺乳头状癌是甲状腺癌中最常见的病理类型，占比较高，一般甲状腺乳头状癌的病情发展缓慢，恶性程度较低，预后较好，若淋巴结转移超过30%，患者术后5年内复发率极高，预后较差[2]。目前临床有研究显示，肿瘤的免疫微环境与肿瘤的发生、转移、预后等都有紧密联系[3]。基于此，本研究探讨了淋巴结转移性甲状腺乳头状癌免疫微环境的变化与预后的相关性，为临床提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年1月至2021年4月钦州市第二人民医院收治的31例淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者为研究对象进行回顾性分析，其中男性10例，女性21例；年龄30～69岁，平均年龄（48.52±2.34）岁；腺外浸润20例，非腺外浸润11例。本研究经钦州市第二人民医院伦理委员会批准。纳入标准：①符合《甲状腺疾病外科学》[4]中甲状腺乳头状癌的诊断标准；②临床资料完整；③经病理检查确诊为淋巴结转移性甲状腺乳头状癌；④mRNA测序数据完整。排除标准：①同时合并其他恶性肿瘤；②随访时间不足60 d；③认知、精神存在障碍。

1.2 研究方法 采用TIMER软件对31例淋巴结转移性甲状腺乳头状癌的样本进行处理，主要是计算22种免疫细胞的浸润百分比，幼稚CD4+T细胞浸润程度均是0，对剩下21种免疫细胞均进行浸润百分比计算，之后进行排列。以淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者术后病情加重或死亡作为观察终点，再应用Perl语言对免疫细胞含量矩阵和相关临床信息作相应的整合。采用Wilcoxon检验对不同临床病理特征中的每个免疫细胞浸润程度的差异进行计算和分析。得出的每种免疫细胞含量相对百分数中位值作为界线，然后把淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者分为低浸润组和高浸润组。应用TIMER软件分析各个免疫细胞和淋巴结转移情况，采用Log-rank检验生存分析评价甲状腺乳头状癌患者的无进展生存时间，评估免疫微环境的改变与预后相关性。

1.3 观察指标 ①比较免疫细胞浸润丰度情况。②分析免疫细胞与性别的相关性。③分析免疫细胞与肿瘤外浸润的相关性。④分析免疫细胞与预后的关系。

1.4 统计学分析 采用SPSS 19.0软件进行数据处理。计量资料以（x）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以[例(%)]表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫细胞浸润丰度情况比较 幼稚CD4+T细胞的浸润程度为0，淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者的M0巨噬细胞、M2巨噬细胞、静息状态下肥大细胞、静息状态下树突状细胞、活化树突状细胞的浸润丰度高于正常细胞，记忆B细胞、幼稚B细胞、M1巨噬细胞、CD8+T细胞、活化肥大细胞、嗜酸粒细胞的浸润丰度低于正常细胞，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 免疫细胞浸润丰度情况比较（x）

2.2 免疫细胞浸润丰度与性别的相关性分析 不同性别患者M0巨噬细胞、M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、静息状态树突状细胞、静息状态肥大细胞、活化树突状细胞、记忆B细胞、幼稚B细胞、CD8+T细胞、嗜酸粒细胞、活化的肥大细胞浸润丰度比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 免疫细胞浸润丰度与性别的相关性分析（x）

2.3 免疫细胞浸润丰度与肿瘤外浸润的相关性分析 肿瘤腺外浸润患者的静息状态树突状细胞、M0和M2巨噬细胞的浸润丰度较未出现腺外浸润患者高，幼稚B细胞和CD8+T细胞的浸润丰度低于未出现腺外浸润患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 免疫细胞浸润丰度与肿瘤外浸润的相关性分析（x）

2.4 分免疫细胞与预后的相关性分析 以患者病情严重或死亡作为观察的终点，将出现差异的11种免疫细胞含量相对百分数中位值作为界线，把患者分为高浸润组和低浸润组，M0巨噬细胞（P=0.042）、M2巨噬细胞（P=0.023）、CD8+T细胞（P=0.043）、静息状态树突状细胞（P=0.045）、幼稚B细胞（P=0.032）与患者的预后相关（P＜0.05），见表4。M0巨噬细胞、M2巨噬细胞、静息状态树突状细胞高浸润组患者的无进展生存时间比较短，幼稚B细胞、CD8+T细胞高浸润组患者的无进展生存时间较长。

表4 免疫细胞与预后的相关性分析（x）

3 讨论

肿瘤微环境主要组成成分有肿瘤细胞和周围的各种免疫细胞、胶质细胞、成纤维细胞及炎症细胞因子、细胞间质微血管等。有研究显示，肿瘤在增殖生长与转移时都离不开肿瘤微环境[5]，并且微环境中的免疫细胞浸润与肿瘤发生发展更有紧密联系。在肿瘤刚开始形成的时候，免疫细胞能够对其进行监视和抗击，但是随着肿瘤不断增多增大，免疫细胞就会与其产生协同作用，协助其完成免疫逃逸[6]。

肿瘤微环境中免疫和巨噬细胞是最常见的，其中巨噬细胞分为M0、M1和M2型，M0型的未活化状态主要为幼稚细胞，受到M1和M2特异性的信号激活后活化，进而形成M1和M2型巨噬细胞[7]。M1型巨噬细胞主要作用是释放出NO等物质，并直接将其杀死，还能合成肿瘤坏死因子、白细胞介素-12白细胞介素-18、白细胞介素-1β等细胞因子，对Th1型细胞免疫应答进行调节并有促进作用，进而产生有效的抗肿瘤效果[8]。M2型巨噬细胞能够分泌白细胞介素-10、转化生长因子-β1等细胞因子和免疫因子等，对Th2型细胞免疫应答进行调节并促进，进而产生免疫抑制功能，促进肿瘤细胞因子的生长、迁移、增殖等[9]。有研究显示，肾乳头状癌中的M2巨噬细胞浸润度比较高，并且该细胞与病情进展有密切联系[10]。还有研究发现，在甲状腺乳头状癌中刺激M0型巨噬细胞，使其分化成M2型，该过程会对肿瘤的生长和转移产生促进作用[11]。本研究结果结果显示，淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者的M0巨噬细胞、M2巨噬细胞、静息状态下肥大细胞、静息状态下树突状细胞、活化树突状细胞的浸润丰度高于正常细胞，记忆B细胞、幼稚B细胞、M1巨噬细胞、CD8+T细胞、活化肥大细胞、嗜酸粒细胞的浸润丰度低于正常细胞；肿瘤腺外浸润患者的静息状态树突状细胞和M0、M2巨噬细胞浸润丰度较高，幼稚B细胞和CD8+T细胞的浸润丰富较低；M0巨噬细胞、M2巨噬细胞、静息状态树突状细胞高浸润组患者的无进展生存时间较短，幼稚B细胞、CD8+T细胞高浸润组患者的无进展生存时间较长。树突状细胞是人体抗原提呈细胞中活化效果最好的，能够有效激活CD8+和CD4+T细胞，在免疫应答中主要起到启动和调控的作用[12-13]。本研究结果发现，静息状态树突状细胞含量高的患者预后相对更差，并且肿瘤出现周围浸润和转移的概率也更高。淋巴细胞是免疫细胞重要的组成部分，在本研究中CD8+T细胞在无肿瘤腺外浸润组的浸润丰度更高，与患者的预后呈正相关。

综上所述，淋巴结转移性甲状腺乳头状癌患者的免疫微环境具有一定的特异性，与预后有紧密联系，该结果也为临床的免疫治疗提供新方向。